GC-MS法测定荆芥挥发油中薄荷酮、胡薄荷酮含量

孙文君，于 生，单鸣秋，丁安伟

南京中医药大学、江苏省方剂研究重点实验室，南京 210046

荆芥（Schizoneetae Herba.）为唇形科一年生草本植物荆芥（Schizoneeta tenuifolia Briq.）的干燥地上部分。荆芥性温、味辛,亦有人认为其性平或凉，其生品具有祛风解表、宣毒透疹、散瘀止血之功效，主治风寒感冒、咽喉肿痛及多种皮肤病。荆芥的挥发油含量较高，其中主要有效成分为薄荷酮、胡薄荷酮等萜类化合物。目前对于荆芥挥发油的质量控制报道较多的是采用GC-MS法分析其成分及做指纹图谱研究[1-2]。为更全面地控制荆芥饮片的质量，本文建立了GC-MS法同时测定荆芥挥发油中薄荷酮、胡薄荷酮的含量。结果表明，该法具有操作方便、准确等特点，可作为荆芥挥发油的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent 6890N-5975B气相色谱-质谱联用仪、Agilent ChemStation化学工作站软件；B211D电子天平（d=0.01 mg，赛多利斯科学仪器有限公司）。

薄荷酮[（-）-Menthone]对照品（批号 111705-201004）、 胡薄荷酮 （R-（+）ulgone） 对照品 （批号111706-201004）均购于中国药品生物制品检定所（批号111706-201004）；甲醇为色谱纯。

荆芥挥发油取自安徽（11批，编号 1～11）、河北（4 批，编号 12～15）、湖北（2 批，编号 16、17）、江苏（2 批，编号 18、19）、山西（1 批，编号 20），共 20 批荆芥饮片，经本校中药鉴定教研室吴启南教授鉴定确认。水蒸汽法提取，并经除水后得荆芥挥发油。

2 方法与结果

2.1 挥发油供试品溶液的制备

取收集的挥发油100 mg，精密称定，置量瓶中，甲醇稀释到刻度；再取适量与浓度为2.6141 mg·mL-1的萘溶液（内标物）一起加入10 mL量瓶中，甲醇定容到刻度，为加入内标的供试品溶液。

2.2 色谱条件

毛细管气相色谱柱H-5MS（5%Henyl Methyl Siloxane，30.0 m×250.0 μm×0.25 μm）； 载气为氦气，流速:1.0 mL·min-1； 分流比:20∶1； 进样口温度:220℃；进样量:1μL。

程序升温方法:初始温度50℃，以10℃·min-1速率升至 100℃，保持 10 min；再以 5℃·min-1速率升至200℃，保持5 min。

2.3 质谱条件

电离方式:EI离子源，电子能量70eV；离子源温度:230℃，四级杆温度:150℃，接口温度:280℃；电子倍增器电压:1378.2V。溶剂延迟:3.5 min。取各供试溶液，过0.22 μm滤膜，以气相色谱微量进样器精密吸取1μL注射入气相色谱仪，用ChemStation软件进行峰识别，内标法计算峰面积。

2.4 线性关系考察

精密称取 （-）-薄荷酮对照品 2.068 mg，（+）-胡薄荷酮对照品14.88 mg,置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度制成含薄荷酮0.2068 mg·mL-1与胡薄荷酮1.488 mg·mL-1的混合标准品储备液。从该储备液中各精密量取 5、2.5、1、0.5、0.25 mL，置量瓶中，加内标物溶液，再加甲醇溶解并稀释至刻度，分别制成含内标物萘 0.26141 mg·mL-1，薄荷酮0.1034、0.0517、0.02068、0.01034、0.00517 mg·mL-1和胡薄荷酮 0.744、0.372、0.1488、0.0744、0.0372 mg·mL-1的系列混合对照品溶液。分别吸取上述5份溶液各1μL，注入气相色谱仪，按内标法以峰面积计算，以薄荷酮、胡薄荷酮与内标峰面积比值为纵坐标（Y），对照品浓度（mg·mL-1）为横坐标（X），绘制标准曲线，薄荷酮回归方程:Y=13.82X-0.0043（r=0.9999）；胡薄荷酮回归方程:Y=8.871X-0.0136（r=0.9991）。表明薄荷酮在 0.00517～0.1034 mg·mL-1之间呈良好的线性关系；胡薄荷酮在0.0372～0.744 mg·mL-1之间呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

以薄荷酮浓度为0.0517mg·mL-1、胡薄荷酮浓度为0.372mg·mL-1的混合对照品溶液为考察对象，依法测定，连续进样6针，薄荷酮与胡薄荷酮峰面积比的RSD（%）分别为4.6与3.68，表明本法精密度良好。

2.6 稳定性试验

取编号为 12 的供试品，依法处理。 在 0、2、4、6、8、12h依法测定。结果表明供试品溶液中薄荷酮与胡薄荷酮的含量在12h内稳定性较好，薄荷酮与胡薄荷酮峰面积比的RSD（%）分别为2.75和2.15。

2.7 重复性试验

取编号为12的供试品，依法处理样品6份，测定。结果供试品溶液中薄荷酮的平均含量为91.362 mg·g-1，RSD为3.23%；胡薄荷酮的平均含量为112.471mg·g-1，RSD为4.18%。表明重复性比较好。

2.8 加样回收率试验

精密称取薄荷酮、胡薄荷酮对照品适量，置于量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取编号12的供试品6份，每份各约50mg，精密称定，加入上述混合对照品适量，依法测定。薄荷酮回收率为98.0%，RSD为1.696%；胡薄荷酮回收率为99.4%，RSD为2.469%。

2.9 测定结果

精密量取对照品溶液和供试品溶液各1μL注入气相色谱-质谱联用仪，依法测定，按内标法以相对峰面积计算薄荷酮及胡薄荷酮的含量。结果见表1。

表1 含量测定结果（mg·g-1，n=2）

由表1可知，不同产地荆芥挥发油中薄荷酮和胡薄荷酮的含量有所差别，同一产地不同生产企业的荆芥挥发油中含量也有差别。以安徽产荆芥挥发油中薄荷酮、胡薄荷酮的含量较其他产地的高，且薄荷酮、胡薄荷酮的含量比值大体相同，质量较稳定。河北产的次之，而山西的含量最低。由此可见市场上所售的荆芥饮片质量不统一，因此有必要为荆芥饮片制定一个通用的饮片分级标准，分别对道地产区荆芥饮片和非道地产区荆芥饮片的规格进行划分。本文采用的GC-MS法较GC法灵敏度更高，测定结果更精确，同时也可以对荆芥挥发油中的成分进行分析，可作为荆芥饮片质量的控制方法之一。

[1]陈 勇，李晓如，曾 笑，等.荆芥挥发油成分的气相色谱-质谱分析[J]. 世界科技研究与发展，2007，29（4）:43-6.

[2]方明月，康文艺，姬志强，等.荆芥挥发油化学成分研究[J]. 时珍国医国药，2007，18（7）:1551-5.