高效液相色谱法测定抗心绞痛新药雷诺嗪的含量

刘爱芹，邢来全，于胜海

(1.山东省医学科学院药物研究所，山东 济南 250062; 2.山东创新药物研发有限公司，山东 济南 250101)

雷诺嗪(ranolazine)是一种部分脂肪酸氧化抑制剂，可在不改变血液动力学参数的条件下发挥抗心绞痛作用，还可防止乳酸堆积导致的酸中毒，大大增强了使用安全性，为有效治疗心绞痛、心肌梗死以及其他疾病提供了新的策略。笔者建立了测定雷诺嗪含量的高效液相色谱法[1]，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱系统(包括四元输液泵，二极管阵列检测器，自动进样器)，数据采集Millenium32软件(美国Waters公司);AG245型电子天平(Mettler Toledo，瑞士)。乙腈(天津市四友生物医学技术有限公司，色谱纯);磷酸二氢钾(天津市化学试剂六厂，分析纯);三乙胺(天津市博迪化工有限公司，分析纯);雷诺嗪对照品(由供试品精制而得，含量为99.86%);雷诺嗪(批号为20080601，20080602，20080603)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:江苏汉邦科技有限公司Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);检测器:Waters检测器，在线过滤器(美国 Agilent公司);流动相:乙腈－加0.1 mL三乙胺的0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50 ∶50);流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;柱温:室温。在该色谱条件下，雷诺嗪色谱峰的理论板数为2907，色谱图见图1。

2.2 检测波长确定

取雷诺嗪原料药对照品约12 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相适量，振荡使溶解并稀释至刻度，精密吸取5 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，置紫外分光光度计记录紫外吸收曲线图。结果最大吸收波长为272 nm，故选择272 nm为检测波长。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取雷诺嗪对照品11.8 mg，置50 mL量瓶中，加流动相适量振荡使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液 1，3，5，7，10 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成标准系列溶液。分别取该溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标进行线性回归，线性回归方程为A=2.28 ×107C －1.63×105，r=0.9993(n=5)。结果表明，雷诺嗪质量浓度在0.0492～0.492 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

稳定性考察:取含量测定项下的同一份供试品溶液，于0，2，4，6，8 h时分别取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。结果的 RSD为0.3%(n=5)，表明供试品溶液在室温(25℃)下8 h内稳定。

精密度试验:取系列对照品溶液中的同一份溶液，在上述色谱条件下，取10 μL注入液相色谱仪，连续进样5次，记录峰面积。结果的 RSD为0.3%(n=5)，表明方法精密度良好。

回收率试验:取雷诺嗪约10，12，14 mg，精密称定，分别置50 mL量瓶中，按处方量加入辅料，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，制得模拟样品，每个浓度各配2份。精密量取5 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。同法，另取雷诺嗪对照品适量，加流动相适量制成每1 mL约含0.12 mg的溶液，同法测定。结果3个浓度的回收率分别为 100.2% 和 99.9% ，100.1% 和 100.3% ，99.8%和100.0%，平均回收率为 100.1%，RSD 为 0.19%(n=6)，表明本法的准确度良好。

2.4 样品含量测定

取雷诺嗪供试品约12 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相适量，振荡使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，进样10μL，记录色谱图。另取105℃干燥至恒重的雷诺嗪对照品约12 mg，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。依法检查3批样品，结果批号为20080601，20080602，20080603的样品中雷诺嗪含量分别为标示量的 99.41% ，99.27%，99.50%(n=3)。

3 讨论

通过对乙腈和0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液不同体积配比进行筛选，结果表明，两者同体积配比再加少量三乙胺，系统的灵敏度高、分离度良好、理论板数高，因此采用乙腈和0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50，加0.1 mL三乙胺)作流动相。方法学考察结果表明，该方法准确、灵敏、简便，可用于雷诺嗪原料药含量测定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2010:附录ⅤD.