广西境内不同产区土茯苓中落新妇苷的含量测定

陈章源 ，李 战，董青松，阮 群 ，白隆华

(1.广西玉林制药有限责任公司，广西 玉林 537001; 2.广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023)

土茯苓为百合科植物光叶菝葜的干燥根茎，具有解毒、除湿、通利关节之功效，临床主要用于梅毒及汞中毒所致肢体拘挛、筋骨疼痛、湿热淋浊、带下、痈肿、瘰疬、疥癣等。2010年版《中国药典(一部)》规定了土茯苓中落新妇苷的含量要求。为全面了解广西地区产土茯苓中落新妇苷的变化差异，笔者采用高效液相色谱法测定了广西区域内不同产区土茯苓中落新妇苷的含量，为有效开发利用广西地区的土茯苓资源和栽培选种提供科学依据，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括四元泵在线脱气、VWD检测器、Aiglent 1200型化学工作站;GR－202型电子分析天平(精确度为十万分之一)。广西境内不同产区土茯苓药材(广西药用植物园提供，并经董青松教授鉴定);落新妇苷对照品(上海中药标准化研究中心，纯度不低于98.0%);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm × 4.6 mm，5μm);流动相:甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:291 nm;进样量:10 μL。在上述色谱条件下，落新妇苷保留时间约为20.6 min，分离良好，分离度达到2.02，且不受药材其他组分干扰，理论板数以落新妇苷计算均不小于5000。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取落新妇苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为0.30 g/L的溶液，作为对照品溶液。取土茯苓粉末(过50目筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声提取30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述各系列溶液各10 μL，按上述色谱条件进样分析，以进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=2580.4 X －5.464，r=0.9998(n=6)。结果表明落新妇苷进样量在0.15～2.40 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液(0.12 g/L)10 μL，分别连续进样6次。结果落新妇苷峰面积的平均值为 3045.8，RSD为0.82%(n=6)，表明方法精密度良好。

稳定性试验:取同一土茯苓(样品号为5，东兴)制备的供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，10 h 时进样测定。结果落新妇苷峰面积的平均值为3073.2，RSD为1.01%(n=6)，表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

重复性试验:精密称取同一土茯苓粉末(样品号为5，东兴)，依法制备供试品溶液并测定含量。结果落新妇苷含量平均值为1.22%，RSD 为 1.24%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取已知含量的同一土茯苓粉末(样品号为5，东兴，含量为1.21%)约0.25 g，精密称取6份，分别精密加入落新妇苷对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 落新妇苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别取不同来源的土茯苓药材粉末(过50目筛)样品约0.5 g，精密称定，依法制成供试品溶液，按上述色谱条件，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算样品中落新妇苷的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

试验中参考有关文献[1－2]，针对含量测定配制供试品溶液的不同提取方法(超声、回流)、不同提取溶剂(甲醇、60%甲醇溶液)、不同溶剂体积(25，50，75，100 mL)以及不同提取时间(30，45，60 min)分别考察。结果以50 mL甲醇超声提取和60%甲醇回流提取所得含量最大，且两者差别不大，仅相差0.05%左右，且超声提取30 min和回流提取30 min已基本可以把落新妇苷提取完全，故选择操作较简便的文中提取方法。

测定波长的选择是参考2010年版《中国药典(一部)》土茯苓中落新妇苷测定项下的波长，选291 nm。在选择流动相时，考察了乙腈－0.05%磷酸溶液(25∶75)、甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)或(39∶61)、甲醇－水、甲醇－0.05%磷酸溶液。结果表明，以甲醇－0.1%冰醋酸溶液(34∶66)为流动相，所得色谱峰峰形较好，分离度能达到2.0以上。

土茯苓为野生药材资源，生长周期较长，随着临床用途的不断增加，其资源匮乏更加严重，故进一步开发利用和引种栽培，显得尤为重要。本试验结果表明，本区域内所有检测样品中落新妇苷含量范围为0.62% ～2.28%，均符合 2010年版《中国药典(一部)》要求，为有效开发利用土茯苓资源和引种栽培提供了科学依据。

[1]李 磊，张宏桂，乔延江.HPLC法测定土茯苓药材中落新妇苷和白芦藜醇的含量[J].药物分析杂志，2007，27(5):654 －656.

[2]陈 幸，李 彬，黎万寿.HPLC法测定土茯苓中落新妇苷的含量[J].药物分析杂志，2004，24(4):437 －438.