万宁广藿香青枯病菌生物变种和生理小种调查＊

杨春雨 ，魏建和 ，，张 争 ，冯锦东 ，甘炳春

(1.中国医学科学院药用植物研究所海南分所·海南省南药资源保护与开发重点实验室，海南 万宁 571533;2.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193)

广藿香是重要的南药之一，是唇形科植物广藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.，以叶、梗入药，味辛，性微温，归脾、胃、肺经，功能芳香化湿、和胃止吐、祛暑解表，主治湿阻中焦之脘腹痞闷、食欲不振、呕吐、泄泻，外感暑湿之寒热头痛，湿温初起的发热身困、胸闷恶心，鼻渊，手足癣[1]。青枯病是广藿香的毁灭性病害。为更好地防治广藿香青枯病，我所对该病原菌的生物变种和生理小种分布进行了深入的调查研究，现报道如下。

1 材料

广藿香青枯病原菌为青枯(茄)假单胞杆菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.[2]，海南省万宁市广藿香种植区采样(表1)，分离培养、鉴定获得。样本采集1～3级的新鲜病株，常规处理样本。病株的分级标准:病害叶片少于10%为1级，11% ～20%为 2级，21% ～50%为3级，51% ～80%为4级，大于81%(至死亡)为5级。实验苗木有芭蕉(二倍体香蕉)、贡蕉(三倍体香蕉)、烟叶、茄子、番茄、马铃薯、广藿香等，育苗获得。实验室设备为常规设备。

表1 病原菌编号及采样点(海南省万宁市)

2 方法与结果

2.1 生物变种鉴定

广藿香青枯病原菌生物变种鉴定方法参考文献[3]进行。如果接种菌株能利用“三糖三醇”，产酸时菌种培养液颜色比对照浅，产碱时菌种培养液颜色比对照深;如果接种菌株不能利用“三糖三醇”，则菌种培养液颜色与对照相同。生物变种鉴定表见表2。参考文献[3]，配制Ayers培养基;分别加入乳糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露醇、山梨醇、卫茅醇，消毒;加入按要求配制的菌液，装管，培养3～4周。将不接种的培养液设为对照。结果编号为1－8的每支试管菌种培养液颜色都比对照管浅，表明广藿香青枯病原菌8个菌株都能利用“三糖三醇”产酸，都属于青枯菌生物变种Ⅲ。

表2 青枯菌生物变种鉴定表[3]

2.2 生理小种鉴定

青枯菌生理小种鉴定表[2－4]:见表3。

致病性鉴定[2－3]:采用输液接种法，将在KBA培养基上培养24～48 h的菌苔稀释为1×107～1×108个/mL的菌种悬浮液，用0.55×20型静脉输液针头导入植物体内。寄主为广藿香、二倍体香蕉(芭蕉)、三倍体香蕉(贡蕉)、烟叶、茄子、番茄、马铃薯;茄子、番茄、马铃薯、广藿香等苗木均为10～15 cm，二倍体香蕉和三倍体香蕉主干20～25 cm。田间温度30～32℃，相对湿度85% ～90%，土壤相对湿度15% ～18%。1～2周后观察结果。以无菌水代替菌种悬浮液，设为对照。结果见表4。可见，编号1－8的菌株对广藿香、番茄、茄子、烟叶、马铃薯等致病力较强，但对二倍体香蕉和三倍体香蕉无致病力，表明8个菌株都是青枯菌生理小种1。

表3 青枯菌生理小种鉴定表

表4 广藿香青枯病原菌生理小种寄主致病性鉴定结果

烟叶过敏试验:采用1×107～1×108个/mL的菌种悬浮液，以注射针头注入烟叶的支叶脉，每点间距0.01～0.03 cm，1～2周后观察结果。结果编号1－8的菌株对烟叶都有较强的致病力，接种点都出现坏死斑，表明8个菌株都是青枯菌生理小种1。

黑色素反应检测:将 L－酪氨酸培养基铺成平板后，分别接种各菌株，1周后观察结果。结果培养1周后，尽管编号1－8的菌株产生黑色素的多少略有差异，出现时间迟早也略有不同，但总体上都能产生大量黑色素，故8个菌株都鉴定为生理小种1。

3 讨论

在海南省万宁市各种植区，广藿香青枯病原菌都为青枯(茄)假单胞杆菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.生物变种Ⅲ、生理小种1;广藿香青枯病原菌生物变种和生理小种的种类单一，可能与各种植区的苗木来源相同有关。本研究采用的是随机采样法。该法自有其合理性，但与全面采样法相比仍存在差异。

[1]中医药管理局《中华本草》编辑委员会.中华本草(7册)[M].上海:上海科学技术出版社，1999:130－134.

[2]文衍堂，郑小波.海南岛广藿香、沙姜青枯病病原鉴定[J].热带作物学报，1984(2):113－120.

[3]任欣正.植物病原细菌的分类和鉴定[M].北京:中国农业出版社，1999:16－17，142－143.

[4]邹 阳，肖崇刚.重庆地区烟草青枯病菌生理小种的初步鉴定[J].烟草科技，2008(5):60－64.