高效液相色谱法测定精制冠心颗粒中芍药苷的含量

米英姿

精制冠心颗粒的处方由丹参、赤芍、川芎、红花、降香五味中药组成。本品为棕褐色的颗粒；味微甜、微苦，具有行气活血，化瘀通脉的作用。用于气滞血瘀，胸痹，心痛，舌赤瘀斑，脉弦；冠心病，心绞痛，心肌梗死属上述证候者。该品种质量标准收载在2010版中华人民共和国药典（一部），但没有含量测定指标，通过试验研究与参考有关文献[1]，本文进行了精制冠心颗粒中芍药苷的含量测定的方法学研究，为该产品提供更严格的质量控制方法。

1 材料与方法

1.1 仪器 岛津LC－10A高效液相色谱仪，检测器：SPD－10A紫外检测器。工作站：依利特EC2003色谱工作站。色谱柱：Hypersil C18（5μm，250 mm×4.6 mm），带前置保护柱。

1.2 试剂 芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736－201035）；精制冠心颗粒（市售品：吉林益民堂制药有限公司，批号：Z20055438）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

1.3 方法 取芍药苷对照品溶液在200 nm～400 nm作波长扫描，结果对照品在230 nm有最大吸收，参照文献[1]，检测波长定为230 nm。色谱条件与系统适用性可定为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－水（15∶85）为流动相；检测波长为230 nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于5 000。精密称取芍药苷对照品35.52 mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别精密量取对照品溶液2.0 mL、3.0 mL、4.0mL、5.0mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、10.0mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品进样量与其峰面积进行线性回归，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程y＝762.27 X＋96.113。

1.3.1 供试品溶液的制备方法 取装量差异项下的本品内容物，研细，取10 g，精密称定，置锥行瓶中，加盐酸－甲醇、流动相、甲醇各40mL，超声处理（功率250 W，频率30 Hz）40 min，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用各自相应的溶剂适量洗涤容器和滤器，洗液并入同一量瓶中，加各自相应的溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取10μL，注入液相色谱仪。

1.3.2 精密度试验 精密吸取芍药苷对照品溶液（177.6μg/mL）10 L，分别重复进样6次，按上述色谱条件测定，考察精密度。

1.3.3 重现性试验 对同一批样品（批号：20055511）分别制备6份供试品溶液，各吸取10μL注入液相色谱仪。

1.3.4 溶液的稳定性 经密吸取供试品溶液10μL，每隔一定时间进样测定一次，结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。

1.3.5 加样回收试验 取已知含量（批号：20055511，0.7718 mg/g）的样品5 g，精密称定，置锥行瓶中，加甲醇40mL，超声处理（功率250 W，频率30 Hz）40 min，放冷，滤过，滤液置50 mL量瓶中，用甲醇适量洗涤容器和滤器，洗液并如同一量瓶中，精密加入对照品溶液（3.864 2 mg/mL）1 mL，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，置锥行瓶中，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图并进行计算。

2 结 果

2.1 芍药苷线性关系（见表1） 芍药苷在0.710 4μg～3.522 0 μg的范围内时，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r＝0.999）。

表1 含量测定方法的线性结果

2.2 不同提取溶剂比较 盐酸－甲醇、流动相、甲醇提取溶剂测定结果分别为0.56 mg/g，0.52 mg/g，0.77 mg/g。用三种最常用的溶剂提取样品，甲醇比其他另外两种溶剂提取较完全，因此选择供试品溶液用甲醇提取来制备。

2.3 含量测定精密度试验结果（见表2） 结果表明本试验精密度良好。

表2 含量测定精密度试验结果

2.4 含量测定重现性试验（见表3） 结果表明本试验重复性良好。

表3 含量测定重现性试验结果

2.5 含量测定溶液稳定性试验结果（见表4） 结果表明本试验稳定性良好。

表4 含量测定溶液稳定性试验结果

2.6 含量测定方法加样回收试验（见表5） 加样回收率符合 要求。

表5 含量测定方法加样回收试验

3 讨 论

我们通过文献检索[1]和试验研究比较，最终确定以测定赤芍中芍药苷的含量作为精制冠心颗粒各药物组成含量测定的控制指标之一。样品前处理方法通过实验确定为：样品加甲醇超声处理（功率250 W，频率30 Hz）40 min，放冷，滤过，滤液置50mL量瓶中，用甲醇适量洗涤容器和滤器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。含量测定色谱条件确定为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈－水（15∶85）为流动相；检测波长为230 nm。取样品，分别以甲醇、流动相、盐酸－甲醇为提取溶剂，依法测定。结果以后两者为提取溶剂的提取效果相近，提取物较少，本实验证明甲醇的提取物多，故选用甲醇作提取溶剂。本实验结果证明芍药苷在0.710 4μg～3.522 0μg的范围内时，进样量与峰面积呈良好的线性关系。供试品溶液和对照品溶液中芍药苷峰保留时间一致，与其他组分达到基线分离；阴性样品溶液中在与对照品溶液中芍药苷峰相应位置处未出现相应的峰，阴性样品溶液不干扰样品中芍药苷的测定。稳定性试验表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。本实验结果显示，平均回收率为99.07%，RSD值为1.1%（n＝5），加样回收良好，该方法准确性较高。实验证明，该方法可以更好的对精制冠心颗粒的产品质量进行有效检测控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：147－148.