高效液相色谱法测定注射用头孢替唑钠的含量*

于 和，林 宏，林 澜

(1．天津市儿童医院，天津 300074； 2.天津新丰制药有限公司,天津 300457)

头孢替唑钠(ceftizoxime sodium)是第一代头孢菌素抗生素，作用机制为抑制细菌细胞壁的合成而发挥其抗菌活性。对革兰阳性菌，包括产青霉素酶和不产生青霉素酶的金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌等皆比较敏感，对某些革兰阴性菌呈中度敏感，如大肠杆菌、克雷白菌属等。本文介绍HPLC法对注射用头孢替唑钠的含量测定及其方法学的系统研究。

1 仪器与试药

Waters液相色谱系统(Waters515型高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器)。注射用头孢替唑钠(规格0.5 g，批号080901、080902、080903)和对照品均由天津新丰制药有限公司提供。乙腈为色谱纯；枸橼酸为化学纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为YMC Pack ODS-A C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为枸橼酸溶液(取枸橼酸3 g，加水溶解并稀释至900 ml)-乙腈(9∶1)；流速1 ml/min；柱温40 ℃；检测波长为254 nm；进样量20 μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液制备 精密称取头孢替唑对照品50 mg，置200 ml量瓶中，以磷酸盐缓冲液(pH 7.0，0.1 mol/L)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取对照品储备液10 ml至100 ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH 7.0)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2样品溶液制备 精密称取注射用头孢替唑钠适量，按“2.2.1”项下方法，制得250 μg/ml样品储备液及25 μg/ml的样品溶液。

2.3线性试验 分别精密量取对照品储备液8、9、10、11及12 ml，各置于100 ml量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH 7.0)稀释至刻度，制得浓度为20、22.5、25、27.5及30 μg/ml的 对照品溶液，分别依法进样，记录峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程为Y=4.18×104X+1.51×104(r=0.999 6)，结果表明，头孢替唑钠在20～30 μg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.4准确度试验 采用加样回收试验方法，精密量取样品储备液(250 μg/ml)5 ml置100 ml量瓶中，共9份。分别精密加入对照品(88.7%)储备液(250 μg/ml) 4、5、6 ml各3份，用磷酸盐缓冲液(pH 7.0)稀释至刻度，摇匀，依法进样测定。计算回收率，平均加样回收率100.6%，RSD为0.7%。见表1。

2.5精密度试验 取同一份样品依法测定头孢替唑钠含量，平行测定6次，计算保留时间、峰面积，峰高的相对标准偏差(RSD%)分别为0.75%、0.56%和0.31%，均小于1.0%。

2.6稳定性试验 取样品溶液常温下放置，分别于0、1、2、3、4、5、6、8、10及12 h进样测定，计算峰面积的相对标准偏差(RSD%)为0.66%，故样品溶液在12 h内测定含量结果稳定。

表1 注射用头孢替唑钠加样回收率试验结果

2.7检测限和定量限

2.7.1检测限 按照信噪比为3∶1，比较已知浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号，计算能被可靠检出的最低浓度是0.05 μg/ml，故定量检测限为1 ng。

2.7.2定量限 按照信噪比为10∶1，比较已知浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号，计算能被可靠检出的最低浓度是0.20 μg/ml，故定量限为4 ng。

2.8含量测定 在上述色谱条件下，精密称取3批样品适量，用磷酸盐缓冲液(pH 7.0)溶解并稀释制成每1 ml中含头孢替唑25 μg的溶液，精密量取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢替唑对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中头孢替唑的含量，见表2。

表2 样品中头孢替唑含量测定结果

3 讨论

3.1色谱柱的影响 选择4个厂家、4种填料、2种柱长的色谱柱按照含量测定方法对样品进行检测，结果表明：不同色谱柱对含量测定结果无明显影响。

3.2溶剂的影响 选择3种不同牌号的国产乙腈和进口Fisher乙腈，配制流动相，测定样品含量、溶剂变化对含量测定的影响，结果表明：乙腈溶剂的变化对含量测定结果无明显影响。

3.3流动相的影响 不同流动相比例[枸橼酸缓冲液(枸橼酸3 g，加水900 ml溶解)-乙腈的比例为60∶40、70∶30、80∶20、85∶15及90∶10]，结果表明流动相比例为90∶10得到的主成分峰与溶剂峰能良好分离，理论塔板数最高，峰型最优。

3.4柱温和流速的影响 柱温变化(30、35、40 ℃)、选择不同流速(0.5、1.0和1.5 ml/min)对色谱分离的影响。结果表明柱温在40℃、流速为1.0 ml/min的条件下得到的色谱峰保留时间适中、峰型最好。

研究表明，建立的HPLC法测定注射用头孢替唑钠含量，省时、准确、灵敏度高，回收率好，可用于产品质量控制。

1 中国药典.二部.2005：附录172

2 胡昌勤.分离分析方法对抗生素产品质量的影响.中国抗生素杂志，2005，30(1)：20