HPLC法同时测定复方甲硝唑西咪替丁乳膏中甲硝唑和氯霉素的含量*

刘晓军

(天津市南开医院， 天津 300100)

复方甲硝唑西咪替丁乳膏为本院制剂，是由甲硝唑、西咪替丁、氯霉素和林可霉素等制成的乳膏剂，用于治疗痤疮酒渣样皮炎等，本实验采用高效液相色谱法同时测定该制剂的主药甲硝唑和氯霉素的含量，为建立该制剂的质量控制方法提供依据。

1 仪器与试药

岛津SPD-10A紫外检测器，LC-10AT压力泵，AUTO SCIENCE AT-330 柱温箱，岛津 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；试剂均为色谱纯，实验用水为娃哈哈饮用纯净水。甲硝唑(批号100191-200305)和氯霉素(批号130555-200501)对照品均购自中国药品生物制品检定所。复方甲硝唑西咪替丁乳膏为本院制剂(批号20100411和20100520)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为岛津 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：1%庚烷磺酸钠的溶液(取1%庚烷磺酸钠溶液500 ml与二甲基甲酰胺5 ml、冰醋酸0.5 ml，混匀)-乙腈(73∶27)；检测波长为288 nm；流速1.0 ml/min；柱温30 ℃；进样量10 μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取甲硝唑对照品与氯霉素对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml中含甲硝唑100 μg、氯霉素25 μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备 精密称取本品约0.5 g，置100 ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上加热溶解，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，冰浴中冷却2 h以上，取出，立刻滤过，取续滤液放置至室温，即得。

2.2.3阴性溶液的制备 取基质适量，不加甲硝唑和氯霉素，按本乳膏剂制法制备阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。按“2.1”项下色谱条件进行测定，可使供试品中大部分色谱峰得以充分分离，且峰形良好，色谱图见图1。

1.甲硝唑 2.氯霉素

2.3标准曲线的制备 分别精密称取甲硝唑和氯霉素对照品适量，加甲醇配制成对照品系列溶液，其中甲硝唑质量浓度分别为23、46、69、92和138 μg/ml；氯霉素质量浓度分别为12、24、36、48和72 μg/ml。分别按“2.1”项下色谱条件测定，以峰面积(Y)对其相应浓度(X)做线性回归，得到甲硝唑回归方程：Y=12 344X+105 885(r=0.999 0)，表明甲硝唑在23～138 μg/ml范围内线性关系良好；得到氯霉素回归方程Y=15 459X+ 61 475(r=0.999 5)，表明氯霉素在12～72 μg/ ml范围内线性关系良好。

2.4进样重现性 取甲硝唑和氯霉素对照品混合溶液(甲硝唑100 μg/ml，氯霉素25 μg/ ml)，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，测定峰面积值，得甲硝唑峰面积RSD为1.12%；氯霉素峰面积RSD为1.05%。

2.5重复性试验 取同一批样品，精密称取5份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，得甲硝唑含量RSD为1.41%；氯霉素含量RSD为1.25%，表明本法重复性良好。

2.6稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6和8 h按“2.1”项下色谱条件进行测定，得甲硝唑峰面积RSD为1.37%；氯霉素峰面积RSD为1.42%，表明样品在8 h内稳定性良好。

2.7回收率试验 取已知含量的样品5份，精密加入一定量的甲硝唑和氯霉素对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果甲硝唑平均回收率为99.18%，RSD为0.93%；氯霉素平均回收率为99.59%，RSD为1.30%。结果见表1和表2。

表1 甲硝唑回收率试验(n=5)

表2 氯霉素回收率试验(n=5)

2.8样品含量测定 分别取2批样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行测定，结果见表3。

表3 样品含量测定(n=2)

3 讨论

根据2005版《中国药典》[1]氯霉素的含量测定方法来进行流动相与检测波长的选择，流动相确定为1%庚烷磺酸钠的溶液(取1%庚烷磺酸钠溶液500 ml与二甲基甲酰胺5 ml、冰醋酸0.5 ml，混匀)-乙腈(73∶27)，检测波长确定为288 nm，结果表明，在该液相条件下，分离效果更佳，测定值准确度高，适用于该制剂的质量控制。

1 中国药典.一部.2005:776