HPLC-ELSD测定消岩颗粒中黄芪甲苷的含量*

薛 坤，贾 凡，金 蕊

(天津中医药大学第一附属医院，天津 300193)

消岩颗粒由黄芪、太子参、夏枯草、生牡蛎等味药组成，具有扶正抗癌，解毒祛瘀的功效。适用于肺癌、乳腺癌、肝癌、消化道恶性肿瘤、妇科恶性肿瘤和恶性淋巴瘤等，配合放、化疗使用，有助于提高化、放疗效果，改善免疫功能，减轻放、化疗不良反应。处方中黄芪为君药 , 黄芪甲苷为其主要有效成分之一。黄芪甲苷的含量测定方法有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法，经参考相关文献[1-4]，采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD) 建立了消岩颗粒中黄芪甲苷的测定方法，结果显示本法准确、可靠、重现性好,可用于消岩颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

1.1仪器 Waters 高效液相色谱仪 600 Pump 2420 ELS Detector Empower数据工作站，梅特勒-多利托AG-135型电子天平 (十万分之一 ) ，超声波清洗器(TCQ-250型，北京医疗设备二厂)。

1.2试剂与试药 黄芪甲苷对照品 (中国药品生物制品检定所，供含量测定用 ，批号110781、200613) ,消岩颗粒本院制剂室提供(批号090702、090730、090731)。乙腈 (色谱纯 ) ，水 (蒸馏水) ，其他试剂均为分析纯 (天津市化学试剂批发公司)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Intertex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)； 流动相：乙腈-水 (33∶67) ；柱温35 ℃；流速1.0 ml/min；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度60 ℃，加热器级别68%雾化气体为高纯氮气 (99.5%)；增益70%。在此色谱条件下 ,黄芪甲苷峰完全达到基线分离 (R> 2) ,理论板数在 6 000以上。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1.0 g，精密称定，精密加甲醇50 ml，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加10 ml水溶解，用水饱和正丁醇振摇萃取3 次，每次20 ml，合并正丁醇液，再用氨试液充分洗涤2次，(30、20 ml)，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解置2 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备 除黄芪外，其余按本品处方比例称取适量，依照制备工艺制成阴性制剂，照“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液20 μl，注入液相色谱仪，色谱图见图1。

1. 黄芪甲苷

2.3线性关系考查 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含1.249 2 mg的溶液，作为储备液，再分别精密量取1、2、3、4和5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述5种浓度的对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件，测定各自峰面积，以对照品浓度(μg/μl)为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得回归方程：Y=1.74X+5.69(r=0.999 9)。结果表明在2.498 4～12.492 μg范围内线性良好。

2.4精密度试验 取消岩颗粒(批号090731)按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl测定，重复进样 6次，测得黄芪甲苷峰面积的RSD为2.18%。

2.5稳定性试验 取消岩颗粒(批号090731)按“2.2.2”方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl, 分别在0、1、2、3、4、5、6、7和8 h测定，测得黄芪甲苷含量值的RSD为2.32%，说明供试品溶液在8 h之内稳定。

2.6 重复性试验 取消岩颗粒(批号090731)样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl测定，结果平均含量为0.756 mg/g，RSD为1.96%。

2.7 回收率试验 取消岩颗粒(批号090731)，共6份，研细，各取0.5 g，精密称定，分别加入黄芪甲苷对照品溶液0.037 86 mg/ml各10 ml，精密加入甲醇40 ml，再按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl测定，计算回收率，结果平均回收率为100.14%，RSD为2.96%，见表1。

表1 回收率试验结果

2.8样品测定 取消岩颗粒(批号090702、090730、090731)，分别按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法及“2.1”项下色谱条件测定，结果3批消岩颗粒中的黄芪甲苷含量分别为0.698、0.766和0.756 mg/g。

3 讨论

在供试品溶液制备时，考查了甲醇、乙醇及水提取，结果显示甲醇的提取率较高，而且提取的杂质较少，因此，以甲醇提取为最佳。用超声30 min、索氏提取5 h、加热回流1 h 3种不同提取方法提取，结果显示，用超声30 min作为提取方法测得的黄芪甲苷含量高，且省时节能源，所以选择超声30 min作为提取方法。

黄芪甲苷的紫外末端吸收较差(λmax=200.8 nm)，如果用紫外检测，受试剂影响很大，检测效果不佳。ELSD检测器为质量型检测器，不受外部环境干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度高，稳定性和重现性好，且操作方便，是检测黄芪及相关制剂中黄芪甲苷的一种有效的分析方法。

1 中国药典.一部.2005：212

2 王明娟,胡昌勤,金少鸿. 蒸发光散射检测器在药物分析及其他方面的应用.中国药事, 2002,16 (7) : 431

3 李涛,徐长根,郝武常.HPLC-ELSD测定桃芪生血胶囊中黄芪甲苷的含量.中成药, 2005, 27(5) : 541

4 杨庆胜,李彩荣,赵雪晖.HPLC-ELSD测定补中益气片中黄芪甲苷的含量.中国中医药信息杂志, 2005, 12 (7) : 47