肺癌肿瘤抑制物－1基因在肾腺癌伴骨转移组织的表达及临床意义

陈剑锋，陈安民，郭风劲，赵文斌，袁雪峰，王茂朋，张 帆

肺癌肿瘤抑制物－1基因在肾腺癌伴骨转移组织的表达及临床意义

陈剑锋，陈安民，郭风劲，赵文斌，袁雪峰，王茂朋，张 帆

目的 探讨肺癌肿瘤抑制物－1(TSLC1)基因在肾腺癌伴骨转移组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学 (SP)法检测TSLC1在54例肾腺癌无骨转移患者的癌组织标本，10例肾腺癌伴骨转移患者的癌组织标本及10例正常肾组织中的表达。结果 TSLC1蛋白在肾腺癌无骨转移患者的癌组织中阳性表达率为53.7%(29/54)，在肾腺癌伴骨转移患者的癌组织中阳性表达率为2/10，在正常肾组织中的阳性表达率为10/10，三组间差异有统计学意义 (P＜0.05)。TSLC1蛋白在肾腺癌病理分级Ⅰ～Ⅱ级中阳性表达率为54.0%，在Ⅲ级中阳性表达率为21.4%，差异有统计学意义 (P＜0.05);在肾腺癌伴发骨转移患者的癌组织中阳性表达率为20.0%，在无骨转移患者的癌组织中阳性表达率为61.1%，差异有统计学意义 (P＜0.05)。结论 TSLC1基因可能与肾腺癌伴发骨转移的发生、发展有关，可能对肾腺癌伴发骨转移的早期诊断及预后评估具有重要意义。

肾腺癌;肺癌肿瘤抑制物－1;免疫组织化学;骨转移

肾细胞癌 (renal adenocarcinoma，RA)亦称肾腺癌，占所有成人肿瘤的3%。RA是成年人中最常见的一种肾脏肿瘤，同时也是泌尿系肿瘤中最致命的恶性肿瘤，常伴发骨转移［1］。研究新的抑癌基因对RA伴发骨转移的作用及其生物学特性的改变，对于阐明肾腺癌伴发骨转移的发病机制，并指导临床治疗具有重要意义。抑癌基因肺癌肿瘤抑制物－1(tumor suppresser in lung cancer 1，TSLC1)属于免疫球蛋白超家族，位于人染色体11q23.2［2］。TSLC1编码的蛋白质参与细胞间黏附、细胞运动、信号转导及免疫调节［3］。目前关于TSLC1基因在肾腺癌伴发骨转移的报道很少，本研究旨在观测TSLC1基因在肾腺癌及伴骨转移组织中的表达情况，为肾腺癌伴发骨转移的早期诊断和治疗提供临床依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源 为2008年8月—2009年10月华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科手术治疗患者手术切除的病理组织，其中肾腺癌无骨转移患者的癌组织标本54例，肾腺癌伴骨转移患者的癌组织标本10例。按照2004年WHO肾腺癌的病理分级标准，其中Ⅰ～Ⅱ级50例，Ⅲ级14例。患者均经临床、实验室检查及病理检查确诊。64例患者中男38例，女26例，年龄28～72岁，平均54.7岁。对照组为正常肾组织标本 (来源于因肾腺癌行扩大切除术的标本，所取组织肉眼观察距肿瘤边界至少1 cm以上)，共10例。

1.2 主要试剂和仪器 鼠抗人TSLC1单克隆抗体及SP试剂盒 (北京中山生物技术公司产品)，双目显微镜及BH－2显微照相系统，HPIAS－1000高清晰度彩色病理图文分析系统(武汉千屏影像技术有限公司)。

1.3 实验方法 对所选的标本进行免疫组织化学 (SP)法染色，将标本经甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋。4 μm厚连续切片，石蜡切片65℃烘烤、脱蜡。3%的过氧化氢封闭10 min，0.1%的柠檬酸微波修复抗原，室温孵育30 min，滴加一抗，于4℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3×5 min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3×5 min;滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS冲洗3×5 min;DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木精复染，常规脱水，透明，干燥，封片，光镜下观察。

1.4 结果判定 TSLC1蛋白表达定位于细胞质中，以细胞质中出现明显的棕黄色颗粒为阳性。根据切片中阳性细胞率及阳性细胞质中颗粒数及颗粒大小分为如下级别:细胞不着色或阳性染色细胞＜25%为阴性 (－)，25% ～50%为弱阳性 (+)，51% ～75%为阳性(++)，＞75%为强阳性 (+++)，采用半定量法进行评分。

1.5 统计学方法 实验数据运用SPSS 12.0统计软件分析，TSLC1蛋白阳性率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TSLC1蛋白在肾腺癌及伴发骨转移组织和正常肾组织的表达 TSLC1蛋白阳性表达主要定位于细胞质内，呈棕黄色颗粒状或斑片状，部分阳性表达定位在细胞膜，特别是细胞与细胞的交界处 (见图1～3)。54例肾腺癌无骨转移患者的癌组织中TSLC1蛋白阳性表达29例，阳性表达率为53.7%。而在10例正常肾组织中TSLC1蛋白均呈阳性表达，阳性表达率为10/10。在肾腺癌伴发骨转移患者的癌组织中，2例弱阳性表达，8例阴性表达，TSLC1阳性表达率为2/10。TSLC1在肾腺癌伴骨转移患者的癌组织中的阳性表达率明显低于肾腺癌无骨转移患者的癌组织，差异有统计学意义 (χ2=4.84，P=0.028)，肾腺癌无骨转移患者的癌组织中TSLC1的阳性表达率明显低于正常肾组织，差异有统计学意义 (χ2=6.059，P=0.014，见表1)。

2.2 TSLC1蛋白的表达与临床病理特征的关系 TSLC1蛋白在肾腺癌Ⅰ～Ⅱ级中的表达高于Ⅲ级，在肾腺癌伴发骨转移患者癌组织中的表达低于未转移者，差异均有统计学意义 (P＜0.05);不同年龄、不同肿瘤直径患者其TSLC1阳性表达率间差异无统计学意义 (P＞0.05，见表2)。

表1 TSLC1蛋白在肾腺癌及伴发骨转移组织和正常肾组织的表达 (例)Table 1 Expressions of TSCL1 in tissues of renal adenocarcinoma with or without bone metastasis and normal kidney tissue

表2 TSLC1蛋白在肾腺癌和肾腺癌伴发骨转移组织中的表达与临床病理特征的关系Table 2 Relationship between expressions of TSCL1 in tissuses of renal adenocarcinoma or renal adenocarcionma with bone metastasis and their clinicopathological features

图1 TSLC1在正常肾组织中的表达(SP×400)Figure 1 TSLC1 expression in normal kidney tissue

图2 TSLC1在肾腺癌组织中的表达(SP×400)Figure 2 TSLC1 expression in renal adenocarcinoma tissue

图3 TSLC1在肾腺癌骨转移组织中的表达 (SP×400)Figure 3 TSLC1 expression in tissue of renal adenocarcinoma with bone metastasis

3 讨论

目前相关研究表明TSLC1表达减少或缺失与多种肿瘤不良预后有关。MURAKAMI于2002年通过功能互补方法，转染正常11号染色体长臂DNA片断到非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞株A549，然后将转染细胞注入裸鼠后背，以观察肿瘤是否形成来判断该DNA片断是否包括抑癌基因，结果发现和证实了人染色体11q23.2处的一个崭新的肿瘤抑制基因。该基因能明显抑制肺癌细胞株的恶性生长，命名为 TSLC1基因［4］。Pletcher等［5］通过物理和测序绘图方法，从人工酵母染色体上分离出1.6 Mb片断，转染到NSCLC细胞株A549中，然后将细胞导入裸鼠体内发现其能抑止肿瘤的生长和转移，推测其抑癌作用是通过细胞－亚细胞之间的相互作用。TSLC1在控制肿瘤的恶性进展中起中枢效应器基因的作用，可作为肿瘤诊断的一种基本生物标记，有助于为有高度复发可能的患者制定辅助治疗策略。TSLC1 在许多肿瘤组织如肺癌［2，6］、神经胶质瘤［7］、宫颈癌［8］、食管癌［9］、乳腺癌［10］等肿瘤组织中表现为低表达或缺失，而在成人急性T淋巴细胞性白血病却表达增高［11］。

本研究结果表明，正常肾组织中TSLC1蛋白广泛表达(100%)，肾腺癌无骨转移患者的癌组织中TSLC1蛋白的阳性表达率 (53.1%)降低，在肾腺癌伴发骨转移患者的癌组织中阳性表达率 (20.0%)更低，因而推测TSLC1蛋白的表达减少可能是肾腺癌伴发骨转移的发生机制之一。相关文献也证实TSLC1基因表达可使鳞状上皮紧密连接，从而抑制肿瘤的转移及浸润［12］。研究证实:启动子区5＇－2CpG岛的高甲基化是TSLC1基因失活的主要原因［6］。TSLC1基因失活、抑癌基因沉默与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究结果显示肾腺癌伴骨转移患者癌组织TSLC1蛋白阳性表达率显著低于肾腺癌无骨转移患者的癌组织和正常肾组织，表明TSLC1蛋白可能与肾腺癌伴发骨转移的侵袭有密切关系。TSLC1表达与肾腺癌分级及有无伴发骨转移有关，而与患者的年龄、肿瘤大小无关，该研究结果说明TSLC1可能影响肾腺癌的发生、发展和转移，TSLC1蛋白可以作为判断肾腺癌伴发骨转移恶性程度的一个重要的生物学指标。

根据本研究TSLC1蛋白在肾腺癌伴发骨转移患者的癌组织中表达下调或缺失的结果，推测其在肾腺癌伴发骨转移的发生、发展以及肿瘤浸润、转移的过程中可能发挥相应作用，有望成为肾腺癌伴发骨转移的诊断、恶性进展及预后判断的有效指标，并为肾腺癌伴发骨转移的基因治疗提供理想靶点。

1 刘旭，张东亮，刘文虎.mTOR抑制剂治疗肾细胞癌的研究进展［J］.中国全科医学，2011，14(1):323.

2 Kuramochi M，Fukuhara H，Nobukuni T，et al.TSLC1 is a tumorsuppressor gene in human non－small－cell lung cancer［J］.Nat Genet，2001，27:427 －430.

3 Murakami Y.Involvement of a cell adhesion molecule，TSLC1/IGSF4，in human oncogenesis［J］ .Cancer Sci，2005，96:543 －552.

4 Fukami T，Satoh H，Fujita E，et al.Identification of the Tslc1 gene，a mouse orthologue of the human tumor suppressor TSLC1 gene ［J］.Gene，2002，295:7 －12.

5 Pletcher MT，Nobukuni T，Fukuhara H，et al.Identification of tumor suppressor candidate genes by physical and sequence mapping of the TSLC1 region of human chromosome 11q23 ［J］ .Gene，2001，273:181－189.

6 Heller G，Fong KM，Girard L，et al.Expression and methylation pattern of TSLC1 cascade genes in lung carcinomas ［J］ .Oncogene，2006，25:959－968.

7 Houshmandi SS，Surace EI，Zhang HB，et al.Tumor suppressor in lung cancer－1(TSLC1)functions as a glioma tumor suppressor［J］.Neurology，2006，28:1863 －1866.

8 Yang YX，Yang AH，Yang ZJ，et al.Involvement of tumor suppressor in lung cancer 1 gene expression in cervical carcinogenesis［J］ .Int J Gynecol Cancer，2006，16:1868 －1872.

9 Lung HL，Cheung AK，Xie D，et al.TSLC1 is a tumor suppressor gene associated with metastasis in nasopharyngeal carcinoma［J］ .Cancer Res，2006，66:9385－9392.

10 Heller G，Geradts J，Ziegler B，et al.Downregulation of TSLC1 and DAL－1 expression occurs frequently in breast cancer［J］ .Breast Cancer Res Treat，2007，103:283 －291.

11 Dewan MZ，Takamatsu N，Hidaka T，et al.Critical role for TSLC1 expression in the growth and organ infiltration of adult T－cell leukemia cells in vivo［J］ .J Virol，2008，82:11958 －11963.

12 Fujita E，Soyama A，Momoi T.RA175，which is the mouse ortholog of TSLC1，a tumor suppressor gene in human lung cancer，is a cell adhesion molecule ［J］.Experimental Cell Research，2003，287(1):57－66.

Expression and Clinical Significance of TSLC1 Gene in Renal Adenocarcinoma with Bone Metastasis

CHEN Jian－feng，CHEN An－min，GUO Feng－jin，et al.Department of Orthopedics，Affiliated Tongji Hospital of Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

ObjectiveTo discuss the relationship between the expressions of tumor suppresser in lung cancer 1(TSLC1)gene and the clinical and pathological features of renal adenocarcinoma with bone metastasis.MethodsThe expression of TSLC1 were detected by SP immunohistochemical method in 74 samples(54 were from renal adenocarcinoma，10 were from renal adenocarcinoma with bone metastasis and 10 were from normal renal tissues).ResultsThe positive expression rates of TSLC1 were 53.7%(29/54)in renal adenocarcinoma，2/10 in renal adenocarcinoma with bone metastasis and 10/10 in normal renal tissues(P＜0.05).The positive expression rates of TSLC1 were 54.0%in renal adenocarcinoma tissues of pathological gradeⅠ～Ⅱ，and 21.4%in those of pathological gradeⅢ (P＜0.05);positive expression rate were 20.0%in renal adenocarcinoma with bone metastases and 61.1%in those without bone metastases(P＜0.05).ConclusionTSLC1 may be associated with the pathogenesis and development of renal adenocarcinoma and its bone metastasis and might be of great importance in early diagnosis and the prognosis evaluation of renal adenocarcinoma.

Renal adenocarcinoma;Tumor suppresser in lung cancer 1;Immunohistochemistry;Bone metastasis

R 737.11

A

1007－9572(2011)12－4167－03

430030湖北省武汉市，华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科

陈安民，430030湖北省武汉市，华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科

2011－02－26;

2011－11－10)

(本文编辑:王俊懿)