结直肠癌患者血清Th 1/Th 2细胞因子水平变化及其临床意义研究

陈远崇，陈竹雨

结直肠癌患者血清Th 1/Th 2细胞因子水平变化及其临床意义研究

陈远崇，陈竹雨

目的 探讨结直肠癌病理分期、组织分型及手术治疗对血清Th1/Th2细胞因子变化的不同影响及其临床意义。方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测45例结直肠癌患者和10例健康体检者 (正常对照组)外周血中干扰素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2、IL－4、IL－10的水平。结果 正常对照组、Dukes'B组、Dukes'C组和Dukes'D组IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比较，差异有统计学意义 (P＜0.01)。其中Dukes'B组、Dukes'C组和Dukes'D组较正常对照组IFN－γ、IL－2明显降低，IL－4、IL－10明显升高，差异均有统计学意义 (P＜0.05);结直肠癌患者随着Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐渐降低，IL－4、IL－10逐渐升高，差异均有统计学意义 (P＜0.05)。腺癌组和黏液性腺癌组IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比较，差异无统计学意义 (P＞0.05)。术后较术前IFN－γ、IL－2明显升高，IL－4、IL－10明显降低，差异均有统计学意义 (P＜0.01)。但术后较正常对照组IFN－γ、IL－2明显降低，IL－4、IL－10明显升高，差异均有统计学意义 (P＜0.01)。结论 结直肠癌患者外周血中Th1、Th2免疫反应失衡，向Th2方向漂移;结直肠癌患者外周血Th1/Th2失衡程度与临床分期呈正相关，与肿瘤的组织分型无关;术后Th1/Th2失衡有可能逆转。

结直肠肿瘤;T淋巴细胞;肿瘤分期;组织分型

结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，严重危害人类健康。临床面对的多为进展期肿瘤，虽然目前治疗水平有了显著进步，但术后转移和复发的比例仍可达40%～70%。现代研究已证实，1型、2型辅助性T淋巴细胞 (Th1、Th2)平衡失调会造成机体免疫抑制状态，与肿瘤的发生、发展、扩散及复发均密切相关。本研究采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)对结直肠癌的病理分期、组织分型及其手术治疗前后细胞因子的变化进行分析，从而了解免疫功能变化情况，以期望有助于指导治疗和判断预后。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取张家口市第五医院和张家口市第一医院普通外科2005年3月—2010年10月行手术治疗的结直肠癌患者45例为研究对象，其中男23例，女22例;年龄33～62岁，平均年龄 (52.55±13.69)岁;Dukes分期:B期24例，C期17例，D期4例;组织学分型:腺癌39例，黏液性腺癌6例。所切除标本均已经病理学诊断证实。外周血抽取前未经化学治疗或放射治疗。同时收集同时期体检健康者10例为正常对照组，其中男5例，女5例;年龄30～65岁，平均年龄(50.82±13.69)岁。受检者均无免疫系统性疾病。

1.2 试剂 Multiskan MK3酶标仪，美国Thermo公司;干扰素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2和IL－4、IL－10检测试剂盒，上海依科赛生物制品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血清标本的采集 正常对照组及结直肠癌患者手术前后各采取外周静脉血2 ml，3 000 r/min，离心5 min，收集血清，－20℃储存备用。

1.3.2 细胞因子的检测 采用ELISA检测试剂盒，严格按照试剂盒说明书操作，检测血清中 IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析，计量资料采用(±s)表示，采用t检验和方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常对照组和不同病理分期结直肠癌血清细胞因子水平比较 正常对照组、Dukes'B组、Dukes'C组和Dukes'D组IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。其中Dukes'B组、Dukes'C组和Dukes'D组较正常对照组IFN－γ、IL－2明显降低，IL－4、IL－10明显升高，差异均有统计学意义 (P＜0.05);结直肠癌患者随着Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐渐降低，IL－4、IL－10逐渐升高，差异均有统计学意义 (P＜0.05，见表1)。

2.2 不同组织分型结直肠癌血清细胞因子水平比较 腺癌组和黏液性腺癌组IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比较，差异无统计学意义 (P＞0.05，见表2)。

2.3 手术前后结直肠癌血清细胞因子水平比较 术后结直肠癌患者较术前IFN－γ、IL－2明显升高，IL－4、IL－10明显降低，差异均有统计学意义 (q值分别为4.15、5.63、4.96和6.92，P＜0.01)。但术后较正常对照组IFN－γ、IL－2明显降低，IL－4、IL－10明显升高，差异均有统计学意义 (q值分别为6.21、7.48、5.26和6.69，P＜0.01，见表3)。

表1 正常对照组和不同病理分期结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

表1 正常对照组和不同病理分期结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

注:IFN－γ=干扰素γ，IL－2=白介素2

IL－2 IL－4 IL－10正常对照组 10 151.83±18.13 121.68± 9.63 43.71± 9.11 12组别 例数 IFN－γ 0.13±13.51 Dukes'B组 24 105.82±23.12 89.66±20.15 75.91±21.06 158.47±20.87 Dukes'C组 17 80.17±18.37 73.17±17.44 97.03±18.83 198.15±17.90 Dukes'D组 4 44.58±13.93 42.98±10.03 120.55±15.47 211.62±15.39 F 0.000 0.000 0.000 0.000 37.202 25.708 24.587 46.782 P值值

表2 不同组织分型结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

表2 不同组织分型结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

.43±23.21黏液性腺癌组 6 95.13±13.20 78.68±12.78 98.79±12.03 193.13±13.22 t IL－2 IL－4 IL－10腺癌组 39 89.83±28.13 83.52±21.63 104.15±20.91 187组别 例数 IFN－γ 1.319 1.289 1.295 1.303 P值值0.163 0.184 0.192 0.176

表3 手术前后结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

表3 手术前后结直肠癌血清细胞因子水平比较(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

IL－2 IL－4 IL－10正常对照组 10 151.83±18.13 121.68±9.63 43.71± 9.11 12组别 例数 IFN－γ 0.13±13.51术前 45 91.54±14.54 81.72±8.22 101.94±10.28 189.31±15.73术后 45 130.82±17.65 113.29±11.35 68.42± 8.19 157.28±14.66 F 92.616 141.699 236.795 107.037 P值值0.000 0.000 0.000 0.000

3 讨论

辅助性T淋巴细胞 (Th)根据分泌细胞因子及效应的不同分为两类:Th1和Th2。Th1细胞分泌IFN－γ和IL－2等，主要介导细胞免疫应答，能够增强免疫杀伤细胞的细胞毒性作用，激发迟发型超敏反应;Th2细胞分泌IL－4、IL－10等，主要介导体液免疫，促进抗体的产生［1］。机体处于正常状态时，Th1/Th2类细胞因子处于平衡状态。一旦Th1/Th2平衡失调，将会造成机体各种疾病，如过敏性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等。

随着肿瘤的进展，患者均会出现免疫抑制状态，其机制十分复杂，最主要的原因是肿瘤细胞本身造成的。机体的抗肿瘤免疫以Th1细胞介导的细胞免疫为主。当Th1/Th2平衡失调，Th1向Th2漂移时，便会造成肿瘤免疫功能严重减弱，促使肿瘤细胞能够逃避免疫系统的攻击，从而大量增殖［2－4］。

结直肠癌的诊治强调早期诊断、早期治疗，但其在早期常无明显症状，只能依靠患者的主动筛查发现。因此，临床上面对的多为进展期肿瘤。本研究中，经病理证实研究对象的结直肠癌病理分期多为Dukes'B期和C期。从组织分型上来讲多为腺癌。与正常对照组比较，结直肠癌患者血清中Th1细胞因子 (IFN－γ、IL－2)水平下降，而Th2细胞因子 (IL－4、IL－10)水平显著升高;并且，Dukes病理分期之间存在差异，随着病情加重，Th1细胞因子下降幅度增加，Th2型细胞因子逐渐上升。另外，腺癌组与黏液腺癌组之间未见明显差异，可见组织分型对细胞因子的表达无影响。

目前，结直肠癌的主要治疗方法仍是以手术为主的综合治疗。尽管医疗水平有了显著进步，但术后5年内，结直肠癌转移和复发的比例仍可达40%～70%。手术只能清除肉眼所见肿块，并不能确保清除所有肿瘤细胞。残留的肿瘤细胞在机体免疫功能正常时能被机体杀死;相反，若机体处于免疫抑制状态，这些肿瘤细胞则能在失去免疫控制的条件下迅速增殖，造成复发［5－7］。另外，手术切除肿瘤的同时，也对机体产生了损伤，不仅导致手术创口的炎症反应，而且引起机体细胞免疫的抑制，包括淋巴细胞数目减少，细胞毒性减弱，细胞因子分泌减少，但对体液免疫的影响较小［8－9］。本研究中，手术切除肿瘤后，解除了大部分肿瘤对Th1细胞的抑制作用，Th1型细胞因子较术前明显升高，但Th1细胞因子水平仍低于正常对照组。Th2细胞因子由于手术创伤的影响，虽比术前降低，但仍明显高于正常对照组。充分说明手术治疗可以逆转Th2型细胞的偏倚。

通过对研究对象的全面分析可知，Th1、Th2细胞因子水平与结直肠癌的发生发展、转移和复发均密切相关。在结直肠癌的发病过程中，可以用免疫治疗方法对Th1/Th2细胞的平衡状态进行干预，也有可能寻找到一个治疗结直肠癌的新靶点。另外，通过对术后细胞因子水平的干预，增强机体抗肿瘤免疫，有可能延缓转移，阻止复发。

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A Study on the Change of Serum Cytokine Levels in Colorectal Cancer Patients and Its Significantce

CHEN Yuanchong，CHEN Zhu－yu.The Fifth Hospital of Zhangjiakou，Zhangjiakou 075000，China

ObjectiveTo investigate the influence of pathological staging，tissue－typing and operation on Th1/Th2 imbalance in colorectal cancer patients and its significance through detecting the serum levels of Th1/Th2 type cytokines.Methods

45 colorectal cancer patients and 10 healthy volunteers(control group)were recruited for the study.Peripheral blood samples were collected，and the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4，IL－10 levels were detected by ELISA kits.ResultsThe differences of the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4 and IL－10 between control group，Dukes'B group，Dukes'C group and Dukes'D group were significant(P＜0.01).Compared with control group，IL－2 and IFN－γ levels of colorectal cancer patients were significantly decreased(P＜0.05)，but IL－4，IL－10 levels were significantly increased(P＜0.05).With pathogenetic condition aggravating，IL－4 and IL－10 levels were increased gradually，while IL－2 and IFN －γ levels were decreased gradually，and the difference was statistically significant(P＜0.05).The cytokine levels were not significantly different between adenocarcinoma patients and mucinous adenocarcinoma patients(P＞0.05).After operation，IL－2 and IFN －γ levels were increased significantly(P＜0.01)，but IL－4 and IL－10 levels were decreased significantly(P＜0.01).After operation，compared with control group，the IFN－γ and IL－2 levels were significantly decreased，while IL－4 and IL－10 levels were significantly increased(P＜0.01).ConclusionThere is response imbalance in Th1 and Th2 in colorectal cancer patients.The imbalanced Th1/Th2 response is correlated with Dukes staging，but uncorrelated with tissue－typing，and can be reversed by operation.

Colorectal neoplasms;T－lymphocytes;Neoplasms staging;Tissue－typing

R 735.3

A

1007－9572(2011)12－4136－03

075000河北省张家口市第五医院 (陈远崇);张家口市第一医院 (陈竹雨)

2011－07－12;

2011－10－13)

(本文编辑:陈素芳)