康成贴膏对昆明小鼠镇痛作用的实验研究

潘 坚 王禹斌 周慧英 王 婧 周正宇 黄 猛 薛智谋*

（1 苏州大学实验材料供应中心，江苏 苏州 215123；2 苏州大学医学部，江苏 苏州 215123）

疼痛是人类疾病中发生率最高的症状之一。导致疼痛的原因较多，组织或器官功能损伤均可导致疼痛。2001年国际疼痛研究会定义为：“疼痛是实际或潜在组织损伤相关联的不愉快的感觉和情绪体现”[1]。传统中医药在治疗疼痛方面积累了丰富的经验。中医通过内治、外治、针刺三个途径实现辨证施治：一是内治法，使用经典的，传统认为可抑制疼痛或促进疼痛消除的药物单方或复方施治；二是外治法，是在疼痛局部或特定腧穴敷贴特制药膏，或涂抹特制药液；三是针刺或针药结合，达到“协同增效”目的[2]。

康成贴膏是由活血化瘀、消肿止痛的中药组成的复方贴剂，本实验通过扭体法和热板法实验，外敷施用康成贴膏，观察其对小鼠的镇痛作用，以期为康成贴膏的临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

康成贴膏：苏州康成医药有限公司产品，3.95克生药/片，批号：060401。临用前用医用凡士林（天津市大茂化学试剂厂，500g/罐，批号：20051121）配制成三种浓度的药膏即每g药膏分别含生药0.66g、1.32g、2.64g。阳性对照药：云南白药膏，云南白药集团无锡药业有限公司，国药准字Z20073015，10cm×6.5cm，批号：070749。脱毛膏：上海诗碧化妆品有限公司，60mL/支，卫妆特字：（2002）第0043号，批号：50060001。昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，清洁级，由苏州大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证：XCYK（苏）2002～0008，实验动物使用许可证：SYXK（苏）2002～0037。

1.2 实验方法

热板法：实验用雌性昆明种小鼠，小鼠两侧后肢均用脱毛膏脱毛。用RCY-2型热板测痛仪（55±0.5）℃检测小鼠热板反应潜伏期（自小鼠放入热板至出现舔后足或跳跃所需要时间即为该小鼠的痛阈值），保留反应潜伏期在5～30s的雌性小鼠，＜5s或者＞30s的小鼠剔除，选取50只，随机分为五组，分别为空白对照组，高、中、低剂量组，云南白药膏组，每组小鼠各10只。以两次测痛的平均热板痛阈值作为基础痛阈值，空白对照组不给药，各实验组小鼠每日在后肢脱毛处敷贴药膏1次，每次保持10 h，连续给药3d，第4天给药后1h，除去贴膏，60min、120min、180min后测定小鼠痛阈值，如超出60s无反应者则取出，按60s计。

扭体法：小鼠50只，雌雄各半，随机分为五组，分别为空白对照组，高、中、低剂量组，云南白药膏组，空白对照组不给药，各实验组小鼠每日在背部脱毛处贴敷药膏1 次，每次保持10 h，连续给药3d，第4天给药后1h后腹腔注射1%冰乙酸溶液（0.1mL/10g），腹腔注射10min后，以小鼠出现腰部肌肉反复收缩，腹部内凹，躯干与后肢伸张、臀部抬高等为扭体反应阳性。观察并记录10min内各组小鼠扭体反应次数。以下列公式计算痛觉抑制率，痛觉抑制率＝（正常对照组扭体数－给药组扭体数）/正常对照组扭体数×100%。

2 实验结果

2.1 小鼠热板反应

小鼠热板反应实验结果表明，各组动物给药前无统计学差异（P＞0.05），康成贴膏给药4d（停止给药）后的120min，可见高剂量组小鼠痛阈较空白组明显提高（P＜0.01），且优于阳性对照。给药4d后的180min，高、中、低剂量组小鼠痛阈均明显提高（P＜0.01，P＜0.05），高剂量组优于阳性对照。提示，康成贴膏可提高小鼠对热板反应的疼痛阈值，具有抑制疼痛作用，见表1。

表1 康成贴膏对小鼠热板反应的影响（±s）（n=10）

表1 康成贴膏对小鼠热板反应的影响（±s）（n=10）

注：*P＜0.05， **P＜0.01，差异显著，与空白对照组比较

组别 剂量g/kg 痛阈值（s）疼痛阈值 给药后60分 给药后120分 给药后180分空白对照 - 14.70±3.06 14.30±3.20 13.30±4.24 14.10±7.09低剂量组 0.66 14.60±3.63 14.70±2.35 16.70±7.21 20.30±4.03*中剂量组 1.32 14.50±4.33 14.80±2.62 17.30±6.06 21.30±2.16*高剂量组 2.64 15.20±3.44 15.60±3.16 23.10±4.65**22.80±5.05**阳性对照 1/30贴 15.30±4.34 15.00±2.58 18.00±4.62* 20.10±4.07*

2.2 小鼠扭体反应

实验结果表明，腹腔注射冰乙酸后，可引起小鼠腹腔疼痛，出现扭体反应。给药后各组小鼠扭体反应次数均明显减少，与空白对照组比较，均达到差异显著（P＜0.01）。低、中、高剂量对痛觉抑制率分别为33.43%、40.29%、60.86%。高剂量组应对疼觉抑制率高于阳性对照。提示康成贴膏具有明显的镇痛作，见表2。

表2 康成贴膏对小鼠扭体反应的影响（±s）（n=10）

表2 康成贴膏对小鼠扭体反应的影响（±s）（n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01，差异显著，与空白对照组比较

组别 剂量(g·kg-1) 扭体数(次数/10分钟) 痛觉抑制率(%)空白对照组 - 35.00±8.92 -低剂量组 0.66 22.33±8.65** 33.43中剂量组 1.32 20.90±5.92** 40.29高剂量组 2.64 13.70±8.83** 60.86阳性对照 1/30贴 16.40±5.23** 53.14

3 讨 论

疼痛是临床最常见的病症之一，可发生于患病机体的任何一个部位，且疼痛可伴随多种疾病，成为常见并发症。目前，疼痛的治疗手段，不局限于采用药物直接治疗，也扩大到外敷、物理刺激等多种疗法[3]。

康成贴膏是由血竭、乳香、没药、当归、川芎、麝香、冰片、牛膝等传统活血化瘀、消肿止痛的中药组成的复方剂，具有补肾健骨、活血止痛的功效。实验证明，川芎能明显提高小鼠血中超氧化物歧化酶的含量，同时减少脂质过氧化代谢产物和血液中的5-羟色胺和组胺[4]，减少外周致痛物质及诱导痛敏物质的分泌。血竭等可使小鼠耳廓细动脉、细静脉扩张，毛细血管开放数量增多，血流速度加快，并降低右旋醣酐血黏度，减轻局部致痛物质的堆积[5]。阿片肽类是公认的内源性镇痛物质。现代研究表明在促进感觉传入的外周末梢也存在性质上与脑内相似的阿片受体，目前已证实在外周受损组织内含有大量的β－内啡肽、脑啡肽及少量强啡肽等内源性镇痛物质。麝香、冰片等可明显提高使用者血浆β－内啡肽含量，增加外周内源镇痛物质的释放[6]。β－内啡肽作为经典内源性镇痛物质，在下丘脑、脑和脊髓中分布广泛，具有很强的镇痛效应。5－羟色胺在外周虽为致痛物质，但在中枢可抑制脊丘束神经元的活动，产生镇痛效应。通过增加以上中枢类镇痛物质，部分中药制剂可产生明显的镇痛效应[7]。

将康成贴膏制成复方剂，通过外敷透皮等方式发挥疗效。热板法实验中，小鼠的爪趾对热刺激非常敏感，其表现为跳跃、缩足和舔后趾，适合于评价中枢镇痛研究药物。扭体试验是通过注射冰醋酸刺激腹膜产生疼痛表现，适合于外周镇痛研究[8,9]。本实验结果表明，康成贴膏能有效提高小鼠对热板反应的疼痛阈值，增大疼痛抑制率，通过热板法和冰醋酸扭体法分别从中枢镇痛和外周镇痛两方面进行药效学的评价，证明康成贴膏具有镇痛作用，为下一步研究提供参考。

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