经HE染色的细胞涂片上再行免疫组化染色法简介

成玉霞，孙 青

胸腹水细胞涂片通常行HE染色诊断，有时需再进行免疫组织化学染色以满足鉴别诊断之用。但由于再次取材受限，往往使工作陷于被动或无法进行。笔者在工作中成功摸索出一种在一张涂片上同时进行多种抗体的免疫组织化学染色，并保留一部分HE染色的方法，现以1例会诊的HE涂片为例介绍如下。

材料和试剂：免疫组化油笔、一抗和试剂盒。方法：将切片放入二甲苯中浸泡，直到盖玻片脱落（封存太久的切片可先将盖玻片加热取下再放入二甲苯中）。溶解掉中性树胶后，经梯度乙醇水化后，放入盐酸酒精（70%乙醇，1%盐酸）中去除HE染色。切片经水洗后，用免疫组化油笔（购自福州迈新公司）圈定3处需要行免疫组化标记的区域（根据原HE染色涂片细胞情况确定），行免疫组化染色，步骤如下：①用0.1%TritonX-100处理 30 min，在细胞膜上打孔；②PBS洗3 min×3次，把TritonX-100彻底洗掉；③3%H2O2处理10 min，去除内源性过氧化物酶；④PBS洗3 min×3次；⑤在3个圈定区域分别加上不同的一抗 （CK5/6、LCA和Calretinin均购自福州迈新公司），室温1 h；⑥PBS洗3 min×3次；⑦加二抗（迈新公司的MaxVisionTM试剂盒编号KIT5020）孵育15min；⑧PBS洗3 min×3次；⑨DAB显色。

显色后的切片用苏木素复染核2 min，脱水透明后，将免疫组化染色部分用小盖玻片封片，加热干燥。然后将盖玻片外部分再行伊红染色，脱水透明的同时将小盖玻片去掉，重新用一大盖玻片封片。如此，1张同时具有3种免疫组化染色，而且保留了部分HE染色结果的细胞涂片成功完成（图1～5）。

图1 3个圈从左到右分别为LCA，CK5/6和Calretinin染色。圈外是保留的HE染色。

图2 CK5/6癌细胞（+）

图3 LCA淋巴单核细胞（+）

图4 Calretinin间皮细胞（+）

图5 保留的HE染色细胞

这种染色方法在取材受限的情况下不失为一种良策，关键是用免疫组化油笔圈定细胞的时候一定得严密，保证抗体之间不能有交叉，以保证结果的可靠性。这种方法同样适用于经过HE染色的组织切片再进行免疫组化染色，只是需根据抗体要求进行修复，不用TritonX-100处理。