血管紧张素转换酶基因多态性与纤溶系统的关系

王景明

近年来，凝血、纤溶系统与动脉粥样硬化及其引发事件的关系倍受关注，尤其在缺血性心脑血管疾病方面。研究发现血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与心脑血管发病高度相关［1～3］，但ACE基因多态性在凝血及纤溶中的作用以及其与纤溶的关系，查新尚未见的报道。因此，我们应用PCR技术和遗传学方法测定了疾病组和对照组的ACE基因多态性，测dD、PT、Fg、TT、APTT各值。旨在探讨ACE基因多态性与纤溶系统之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 疾病组:126例，男76例，女50例，选自2001年1月至2009年10月间住院患者，病例均符合WHO关于冠心病、高血压病的命名和诊断标准，年龄(62.76±8.5)岁﹙52～77岁﹚。其中单一疾病:冠心病22例，高血压20例;合并疾病:冠心病合并高血压者20例，高血压合并冠心病者24例。对照组:选择经病史、体检、实验室检查、X线及心电图检查，排除各类心脑血管疾病、糖尿病和肝肾功能不良者及无高血压病史者66例，男40例，女26例，年龄53～76岁，平均年龄(63.28±8.8)岁。均按ACE基因型分为Ⅱ、ID和DD基因型三组。

1.2 方法 受试者均禁食12 h以上，晨间取肘静脉血，用酶法测D-二聚体(dD)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)，Fg采用Follin酚法。

ACE基因检测及多态性:取肘静脉血5 ml，肝素抗凝，酚-氯仿法抽提基因组DNA，应用PCR方法扩增DNA片段。参照 Rigat设计引物［4］，上引物 5'-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3';下引物 5'-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3'。扩增程序:94℃ 变性 1 min，58℃ 退火 1 min，72℃延伸1 min，共30个循环。取PCR产物10 μl，采用2%凝胶电泳(含溴乙锭 0.5 μl/ml)，经100V 60 min，在紫外光下观察、镊影。可见ACE基因有190bp(D)和490bp(I)两个基因片段(附图)，三种基因型:DD、ID和Ⅱ型。

附图 ACE多态性基因图

2 结果

2.1 正常对照组与疾病组ACE基因多态性频率见表1。疾病组ACE基因DD型频率38.1%和D等位基因频率54.4%明显高于正常人的19.7%和34.1%(χ2分别为6.63、8.94，P＜0.05、P ＜0.05)。

2.2 临床资料及 dD、PT、Fg、TT、APTT指标见表2。疾病组中，dD、Fg水平明显高于对照组(P ＜0.05)，而 PT、TT、APTT水平明显低于对照组(P＜0.05)。将疾病组和对照组按ACE基因型分组，分别进行比较。在三种基因型患者中，ACE基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P＜0.05)，相比有显著性差异;ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702，P 值均 ＜0.01);与 PT、TT、APTT 浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653，P ＜0.01)。

表1 正常人与疾病组的ACE基因型和等位基因频率

表2 各组临床资料和 dD、PT、Fg、TT、APTT指标

3 讨论

3.1 ACE基因多态性研究范围的扩大 近年来，编码ACE基因多态性被认为是冠心病、高血压病的侯选易感基因之一，与维持及修复心血管结构密切相关［4-6］。而我们研究发现ACE基因多态性与凝血及纤溶系统关系密切。与凝血和纤溶系统中的dD、PT、Fg、TT、APTT等指标密切相关，疾病组中dD、Fg水平明显高于对照组(P ＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于对照组(P＜0.05)。将疾病组和对照组按ACE基因型分组，分别进行比较。在三种基因型患者中，ACE基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P＜0.05)，相比有显著性差异;ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702，P ＜0.01);与 PT、TT、APTT 浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653，P ＜0.01)。相关分析发现，ACE基因 DD型与 dD、Fg浓度明显正相关，与 PT、TT、APTT明显负相关。结果提示ACE基因尤其DD型可能是影响凝血及纤溶异常的关键，这进一步强调了基因DD型者检测和控制凝血及纤溶异常的重要性。

3.2 凝血与纤溶系统与心脑血管疾病的关系 众所周知，缺血性心脑血管的发病过程中存在着高凝状态，凝血和纤溶系统贯穿在心脑血管病发病的始终，心脑血管疾病已成为死亡与致残最重要的原因。因此，研究治疗和预防心脑血管疾病尤为重要。

多数研究认为［7，8］，dD、Fg水平升高，是冠心病的重要危险因素之一，本文观察发现基因DD型疾病组中，dD、Fg水平升高显著，明显高于其他基因型组(P＜0.01)，而基因DD型对照组中，dD、Fg水平也升高，明显高于其他基因型组(P＜0.05)。纤维蛋白原是血小板聚集的重要介质之一，是血浆中最大的链状蛋白，对血浆及全血粘度影响极大，促进动脉粥样硬化的发生发展，而Fg升高进一步加重缺血性心脑血管的原因之一。另外，血浆中dD过多，促进局部炎症细胞特别是单核细胞合成并释放某些细胞因子，导致凝血亢进，增加血栓形成的倾向，这也是缺血性心脑血管病中，dD、Fg升高的原因所在。PT、TT、APTT是反应凝血的重要指标。PT、TT、APTT缩短，除了少数因为凝血因子Ⅷ或Ⅻ的活性特别高存在高凝状外;还存在于缺血性心脑血管等疾病中，单独测PT临床上意义不大，与TT、APTT同时检测不但可扩大筛选因子活性范围，而且提高对肝素类物质检测的敏感性。在缺血性心脑血管疾病中，PT、TT、APTT各值缩短。本研究示，ACE基因DD型疾病组，PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组，相比差异有统计学意义(P＜0.05)。相关分析发现，与PT、TT、APTT明显负相关。

研究表明，dD、PT、Fg、TT、APTT 异常除与环境因素有关外，还与ACE基因等遗传因素有关。随着分子生物学研究的不断发展和范围的不断扩大，检测ACE基因多态性在凝血及纤溶中的作用，对心脑血管疾病的治疗和预防起了积极地作用，对抗栓和溶拴药物的应用起良好的指导作用。

［1］ 王景明，吕秀云，陈亮，等.血管紧张素转换酶基因多态性与血脂及纤维蛋白原的关系.中华航海医学与高气压医学杂志，2002，9(4):204-206.

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