猪鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

张 琦 付明哲 陈晓霖

（1.陕西出入境检验检疫局，西安 710068；2.西北农林科技大学，杨凌 712100）

1 材料与方法

1.1 实验材料

普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、绵羊脱纤鲜血琼脂平板、普通肉汤、三糖铁斜面、各种糖发酵管均按《兽医微生物学实验实习指导》制备；药敏纸片购自杭州某微生物试剂有限公司；新洁尔灭、84消毒液均购自市场；小白鼠由西北农林科技大学动物医学院实验动物中心提供。

1.2 细菌分离和培养

无菌采取病死猪的肺脏、肝脏、脾脏等病料涂片，革兰染色镜检。然后用采集的病料无菌操作连续划线接种普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、绵羊脱纤鲜血琼脂平板，37℃培养24 h，从中分离到1株可疑细菌，再接种到普通平板、麦康凯琼脂平板，以进一步纯化细菌，经过涂片和革兰染色镜检后接种到普通斜面，37℃培养24 h，4℃保存菌株待用。

1.3 生化和生物学特性试验

生化试验和生物学特性的的测定按参考文献［1，2，3］介绍的方法进行。将普通斜面上的纯细菌分别接种到各种生化试验管及普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板、绵羊脱纤鲜血琼脂平板、普通肉汤。

1.4 抗生素敏感性试验

将37 ℃，24 h肉汤培养物计数，其菌量（含3亿个/ml）；镜检革兰染色观察纯度，再用灭菌棉签将普通肉汤培养物涂抹于普通琼脂平板，将药敏纸片压贴于普通琼脂平板上，4 ℃放置2 h，然后在37 ℃下培养24 h，最后通过测定抑菌圈的大小来判断细菌对药物的敏感性。

1.5 动物致病性试验

将37℃，24h肉汤培养物计数，其菌量（含3亿个/毫升）；镜检革兰染色观察纯度，用纯菌给实验组小白鼠腹腔注射0.2ml/只；对照组小白鼠注射等量肉汤。

1.6 消毒剂灭活试验

分别将新洁尔灭和84消毒液配成1%、3%、5%浓度溶液，再将37 ℃，24 h肉汤培养物计数，其菌量（含3×108亿个/ml）；镜检革兰染色观察纯度，经稀释（含3×107个/ml），接0.1 ml肉汤培养物分别于不同浓度的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min，最后将各浓度消毒剂溶液的细菌接种到普通琼脂平板于37 ℃培养24 h，观察结果。

2 试验结果

2.1 分离菌的生物学特性

革兰阴性，小球杆菌，散在排列，无芽孢，无荚膜，周生鞭毛。普通琼脂平板、麦康凯平板上生长良好。普通琼脂平板上菌落中等大小、圆形、边缘整齐、微凸起、湿润、表面光滑、乳白色；麦康凯平板上菌落中等大小，无色透明，圆形、微凸起、湿润、表面光滑，边缘整齐；绵羊脱纤鲜血琼脂平板上菌落中等大小、白色凸起、不溶血、边缘整齐；在普通肉汤中呈一致混浊性生长；三糖铁琼脂培养基斜面变红，底层产酸产气，沿穿刺线生长，H2S阳性。

2.2 生化试验

详见表1。

表1 分离菌生化试验

2.3 药敏试验

详见表2。从表2可以看出，分离菌对抗生素高度敏感（抑菌环直径≥16 mm）：先锋噻肟、菌必治、呋喃妥因、头孢呋肟、复达欣、环丙沙星、先锋必、阿米卡星、氧氟沙星、氟哌酸、妥布霉素；中度敏感（16 mm＞抑菌圈直径≥3 mm）：头孢拉定、利福平、氯霉素、头孢唑林、卡那霉素、四环素；不敏感（没有抑菌圈或抑菌圈直径＜2 mm）：万古霉素、青霉素G、链霉素、复方新诺明、红霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、苯唑青霉素。

表2 分离菌药敏试验

2.4 动物致病试验

实验组小白鼠注射后24 h后活动减慢，呼吸变快，毛直立，36 h后死亡。从死鼠肝脏分离到感染菌，对照组无死亡。

2.5 消毒剂灭活试验

接0.1 ml稀释肉汤培养物（3×107个/毫升）分别于不同浓度等量的消毒液溶液中，在25 ℃下作用3 min、5 min、10 min后，鼠伤寒沙门氏菌失去活性。

3 小结与讨论

（1）经生化试验、生物学特性观察证实所分离的细菌为鼠伤寒沙门氏菌。先锋噻肟、菌必治、呋喃妥因、头孢呋肟等抗生素临床首选对该菌所引起的猪病进行治疗。化学消毒剂可以在短时间内可以杀死鼠伤寒沙门氏菌。

（2）从此病料还分离出表皮葡萄球菌和革兰阳性芽孢杆菌，再未分离出其他细菌。本实验室未进行厌氧菌的分离培养、病毒的分离培养及寄生虫的检验。是否有其他病原微生物及其他原因引起猪发病死亡，还有待进一步研究。

（3）猪鼠伤寒沙门氏菌通常寄生在动物消化道内，形成健康动物的带菌现象，猪在生长过程中受到其他不利因素的影响，造成抵抗力降低可以发病。沙门菌血清型有2020种以上[4]，用弱毒活苗预防存在着一定的难度且预防效果不理想。建议有条件的研究室用本场分离菌株制成“自家菌”灭活疫苗，如铝胶佐剂灭活疫苗、油佐剂灭活疫苗和蜂胶佐剂灭活疫苗等来预防猪伤寒沙门氏菌病。

（4）猪鼠伤寒沙门氏菌病是人兽共患病，可以引起人类食物中毒[5]，该菌的检出具有流行病学的重要意义。

[1]陆承平.兽医微生物学.北京：中国农业出版社，2009

[2]李六金，李健强.兽医微生物学实验实习指导.西安：陕西科技出版社，1999

[3]陶天申等.原核生物系统学.北京：化学工业出版社，生物·医药出版分社，2007

[4]张耀相等.猪伤寒沙门氏菌的分离与鉴定.黑龙江畜牧兽医.2003

[5]陈溥言.兽医传染病学.北京：中国农业出版社，2008