文拉法辛临床疗效与γ-氨基丁酸β2受体基因的相关分析

刘善明 韦锦学 刘祥 林鄞 王英成 李涛 马小红

目前对抑郁症的治疗主要是药物治疗，但10%～30%的患者对抗抑郁治疗无效［1］或者部分有效，而疗效的确定有时最长需6周［2］。近年来的研究表明，个体的不同遗传背景是药物疗效在个体间与种族间存在差异的重要原因［3］。γ-氨基丁酸能(Gamma-aminobutyric Acid，GABA)系统是中枢神经系统中主要的神经递质抑制系统，在抑郁症研究中一直都备受关注［4］。抑郁动物模型的研究显示，GABA能药物有抗抑郁作用，推测抑郁症患者存在GABA能的功能不足［5］。近来有研究提示，抑郁症患者枕叶皮质GABA浓度较正常人明显偏低，而抗抑郁药治疗后GABA浓度明显上升［6］。因此，GABA能基因的多态性可能是抗抑郁药疗效差异的候选基因。其中，γ-氨基丁酸 β2受体(Gamma-aminobutyric Acid Receptor Subunit beta-2，GABRB2)基因是GABA系统中的重要亚型基因，在不同的脑部区域广泛表达，既往研究发现该基因与精神疾病可能相关［7］。故本研究选取GABRB2作为候选基因，寻找可能与抗抑郁药疗效相关的遗传学因素。

1 对象和方法

1.1 研究对象 来自2006年至2007年四川大学华西医院心理卫生中心的住院和门诊的抑郁症患者。入组标准:①符合第四版美国精神障碍诊断与统计手册(DSM-IV)中重性抑郁障碍的诊断标准;②17项汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)评分大于18分;③既往未接受过抗抑郁治疗或停药2周以上;④未接受过电抽搐治疗。排除标准:①患有严重躯体疾病;②最近1月内使用过单胺氧化酶抑制剂(MAOI);③正在接受激素治疗;④怀孕妇女。所有的疾病诊断均由高年资的精神科主治医师完成，诊断一致性良好(Kappa=0.91)。共有151例符合标准的患者入组，男69例，女82例，均为汉族，年龄18～64(36.5±13.2)岁。在详细解释了研究内容后，入组者都签署了书面知情同意书。本研究获得四川大学华西医院伦理委员会的审查批准。

1.2 方法

1.2.1 临床治疗 采用临床自然入组法，患者入组后给予文拉法辛单一药物治疗，观察6周。文拉法辛起始剂量为75 mg/d，根据个体治疗反应于2周内达到225 mg或患者出现症状改善的剂量。不合并使用其它抗抑郁剂和抗精神病药;可使用苯二氮卓类药物，但不得连续使用超过7天;禁用电抽搐治疗。

1.2.2 疗效评定 采用HAMD分别在入组时和治疗2、3、4、5、6周后进行症状评估。将治疗 6周后 HAMD总分≤7界定为临床治愈。对临床治疗中可能出现的副反应采用副反应量表(Treatment Emergent Symptom Scale，TESS)评定。评定人为参加研究的高年资精神科医生，评定一致性良好(Kappa=0.87)。

1.2.3 基因型检测 入组后即采集受试者2 mL外周静脉血，使用酚氯仿法提取DNA。基因型检测在Illumina BeadStation 550检测仪上使用Illumina定制芯片完成。选取5号染色体上的GABRB2基因，根据Hap-Map 计划所公布的数据(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)，结合既往文献报道和单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)在基因中的功能位置，共选取29个标签SNPs(TagSNPs)。

1.2.4 统计分析 运用Plink 1.07软件进行29个独立位点和单倍型与药物疗效的相关分析。在独立位点的相关分析中，最小等位基因频率小于0.05和Hardy-Weinberg平衡小于0.001的位点被排除在外。多重检验采用Bonferroni Correction方法进行校正。运用Haploview 4.2软件完成单倍型分析，采用窗口移动方式(sliding-window)，对所有连续的2～6个SNPs组合所构成的单倍型与药物疗效的相关性进行分析。检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 治疗6周末结果完成至少6周治疗的151例患者，在治疗观察结束时，达到临床痊愈标准的患者77例(男35例，女42例)，非痊愈患者74例(男34例，女40例)，性别之间的差异无统计学意义(χ2=0.01，P＞0.05)。痊愈组患者的年龄为18～62(35.6±12.9)岁，非痊愈组为18～64(37.5±13.5)岁，两组之间的差异无统计学意义(t=1.74，P＞0.05)。治疗中151例患者有41例次报告不适反应，主要包括:口干10例(6.6%)，恶心呕吐8例(5.3%)，出汗5例(3.3%)、便秘5例(3.3%)等。

2.2 临床疗效与GABRB2基因独立候选位点的相关分析 将29个候选SNP位点在文拉法辛治疗达到临床痊愈与非痊愈组之间的分布进行分析，结果显示rs10071312和rs4426954的基因型在两组之间的分布差异有统计学意义(P＜0.001)，经多重检验校正后仍具有统计学意义(均 P=0.02)，见表 1。其中，rs10071312位点的A等位基因携带者的治疗痊愈率显著高于G等位基因携带者(OR=4.43)，而rs4426954位点的A等位基因携带者的治疗痊愈率则显著低于G等位基因携带者(OR=0.44)。

表1 文拉法辛临床疗效与候选SNPs的相关分析

2.3 临床疗效与GABRB2基因候选位点单倍型的相关分析 在所有入组样本的单倍型分析中共发现了208个单倍型，其中出现频率≥10%的共103个纳入分析。有3种单倍型在痊愈组和非痊愈组之间的分布差异有统计学意义，分别是A-A-A-A-G-A(rs7724146-rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954)(P＜0.001，总体样本频率36.6%;多重检验校正后P=0.01)，A-A-A-G-A(rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954)(P＜0.001，总体样本频率38.4%;多重检验校正后P=0.02)，A-A-A-G-A-G(rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954-rs3816596)(P＜0.001，总体样本频率35.9%;多重检验校正后P=0.03)。

3 讨论

GABA受体系统包括GABAA、GABAB和GABAC受体三种类型。既往研究显示GABA在抑郁症的发病机制和疗效中均具有重要作用，如脑影像学研究发现抑郁症患者在电抽搐治疗后，其脑内GABA受体的结合能力有明显的改变［8-9］。本研究所选择的GABRB2是GABA受体的一个亚单位，有研究显示双相抑郁患者和精神分裂症患者的前额叶皮质GABRB2基因表达都有变化［10］。近年来在中国人群的样本中，研究者对精神分裂症和双相情感障碍患者死后的脑组织分析，发现患者组GABRB2基因表达明显高于正常对照组，并且单核苷酸rs2546620和rs187269位点的基因多态性与GABRB2基因表达显著相关［11］。在一项对难治性抑郁症的研究中发现，GABRB基因的点突变可能是造成临床治疗困难的原因之一［12］。Benes等［13］等报道精神分裂症和双相情感障碍患者脑中GABA能神经元减少，抗抑郁药可以逆转这种改变，而GABRB2与抗精神病药治疗所需剂量有关，提示GABRB2可能与精神疾病的症状严重度和药物疗效均相关。在本研究的独立位点分析中，结果表明rs10071312和 rs4426954与文拉法辛的疗效相关，而单倍型分析则纳入了更多的可能相关位点。针对精神疾病这种复杂性疾病的遗传学研究，单倍型分析可增加检测效能，有利于发现与疾病或治疗相关的微效基因。结合前述其他研究的结果，提示GABRB2可能是精神疾病发病机制和疗效的一个重要易感基因，也许在复杂的神经网络系统中发挥一些基本功能的作用，影响精神疾病的某些共同生物机制，而非只在某一种疾病中起作用。

综上所述，本研究显示GABRB2基因与抗抑郁药疗效差异存在相关性，支持既往研究显示的GABA在抑郁症的发病机制和疗效中可能均具有重要作用的结果，但本研究也具有一定的局限性。首先，为了尽可能增加样本量，研究采用临床自然入组观察法，最终纳入研究分析的都是完成了至少6周观察治疗的病例，缺少对失访患者的分析。依从性差和药物耐受性不好是失访的重要原因之一，以后研究有必要增加这部分患者的基因型和临床资料。其次，本研究所选择的可能候选基因都是标签SNP，因此尽管发现rs10071312和rs4426954与文拉法辛的疗效相关，但也可能是其它与这两个位点紧密连锁的位点才是与治疗相关的真实位点。因此本研究提示对GABA在精神疾病中的作用有必要进行深入研究。

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