新城疫SPF疫苗与普通疫苗免疫效果的比较试验

韩 耘,封柯宇,李洪涛,李叔伟,田 伟,王丽新,陶淑清,庞雅君,郑德富

(哈药集团生物疫苗有限公司,黑龙江哈尔滨150030)

鸡新城疫是禽类主要病毒性传染病之一,对养鸡业的危害极大(蔡宝祥等,1993)。近年来,ND在我国有普遍蔓延的趋势,目前许多鸡场仍将采用接种疫苗的方式来预防该病。对于新城疫疫苗,我国主要是引进国外的一些弱毒株,如V4株、LaSota株和B1株等(严维巍等,2000),由于弱毒苗成本低廉,操作方便等因素,我国许多养鸡场,尤其是肉用鸡场,广泛采用弱毒苗免疫来预防鸡ND。目前用普通鸡胚生产疫苗成本较低,但疫苗质量却比不上SPF胚蛋。用普通鸡胚制造疫苗存在主要问题是外源病原的污染,这种污染既有细菌、支原体,也有病毒的可能性。为了摸清SPF胚蛋和普通胚蛋在疫苗生产方面所存在的差异,本试验对这两种胚蛋生产疫苗在现地应用中抗体效价的差别,进一步说明禽用疫苗SPF化的重要性,对提高疫苗的纯净度,减少疫苗质量本身带来的防疫隐患;提升疫苗生产行业的实力;增强国产生物制品的国际竞争力有重要的理论与现实意义。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF鸡胚,7日龄商品雏鸡200只,由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供,21日龄现地商品蛋雏鸡10 000只,某养殖场。200日龄产蛋鸡8 000只,某鸡场。

1.2 试验用药 SPF疫苗:(哈药疫苗)L系活疫苗20090942、20090940,L-H120活疫苗 200943,LH52活疫苗20090911。普通瓶疫苗:(国内某厂家)L系活疫苗,L-H120活疫苗,L-H52活疫苗。枸橼酸钠、ND标准抗原及阳性血清购自中国兽医药品监察所。

1.3 试验设计 将雏鸡、育成鸡、产蛋鸡分别随机分成两组,根据血凝抑制(HI)试验和疫苗病毒半数感染量(EID50)的测定,说明新城疫SPF疫苗和普通疫苗对鸡体免疫效果对比。

1.4 试验方法

1.4.1 雏鸡疫苗效力对比试验 选7日龄商品雏鸡200只,随机分成两组,每组100只,分别使用普通疫苗和SPF疫苗滴鼻免疫,免疫剂量1羽份/只。免疫前随机选取20只雏鸡采血测定基础抗体,HI抗体效价为4.9。免疫后每周随机选取20只检测抗体HI效价,连续检测5周,并计算平均值。

1.4.2 现地育成鸡疫苗效力对比试验 21日龄商品蛋雏鸡10 000只,在相同饲养条件下随机分成两组,每组5 000只。根据孵化场提供免疫程序,分别使用普通瓶疫苗和SPF疫苗在21日龄、42日龄、84日龄分别免疫L系活疫苗、L-H120活疫苗、L-H52活疫苗饮水免疫,免疫剂量2羽份/只。免疫前随机选取20只育成鸡,采血测定母源抗体,HI抗体效价为3.8。免疫后连续10周从每组中随机选取20只鸡采血,测定两组鸡抗体HI效价,并计算平均值。

1.4.3 现地产蛋鸡疫苗效力对比试验 200日龄产蛋鸡8 000只,鸡群状态良好,产蛋率正常。相同饲养条件下随机分成两组,每组4 000只,分别使用普通瓶疫苗和SPF新城疫L系活疫苗进行饮水免疫,免疫剂量2羽份/只。免疫前随机选取20只采血测定基础抗体,HI抗体效价为8.9。免疫后连续10周从每组中随机选取20只鸡采血,测定两组鸡HI抗体效价,并计算平均值。

1.4.4 疫苗病毒半数感染量(EID50)的测定 将鸡胚孵化至10日龄,以500倍稀释ND种毒,接种鸡胚尿囊腔,继续孵育96 h,其间每 6 h照胚1次,弃去死胚,记录48 h,72 h和96 h死胚总数。在96 h收获活胚尿囊液,测其血凝价和EID50。试验中两种鸡胚生产工艺、操作方法、生产环境和生产时间等方面均保持一致。

2 结果与分析

结果分析:由表1和图1结果显示新城疫SPF瓶疫苗在免疫后抗体效价明显高于普通瓶疫苗,而且持续期较长。

表1 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫7日龄雏鸡HI抗体效价(log2)

结果分析:由表2和图2结果表明免疫后所有鸡都达到了较高的抗体效价,但是用SPF新城疫弱毒活疫苗免疫鸡产生的抗体效价明显高于普通瓶疫苗,SPF疫苗免疫的鸡产生的抗体更快,HI效价更高。

图1 7日龄雏鸡免疫SPF和普通L系活疫苗后HI抗体消长规律

结果分析:由表3和图3结果表明免疫后所有鸡都达到了较高的抗体效价,SPF新城疫弱毒活疫苗免疫鸡产生的抗体效价明显高于普通瓶 L系疫苗,免疫持续期更长。

结果分析:由图4和表4可知,采用SPF鸡胚生产收获的EID50比普通胚蛋高,是因为SPF鸡胚无新城疫母源抗体和其他抗体存在,避免了抗体的干扰,使得病毒繁殖良好。

3 讨论

3.1 新城疫SPF疫苗与普通疫苗对鸡体抗体效价对比 《规程》中明确规定,对于新城疫HI抗体的检测,要求在免疫后21 d免疫鸡血清中的HI抗体≥6log2,本试验新城疫L系活疫苗HI抗体满足规程。本试验使用新城疫SPF L系活疫苗和普通L系活疫苗对7日龄鸡进行免疫,并于7、14、21、28、35、42日龄检测琼扩抗体,结果显示SPF疫苗在免疫后抗体效价明显高于普通瓶疫苗,而且持续期较长,并且在28日龄抗体效价达到高峰,普通疫苗:ND抗体为6.1log2;SPF疫苗:ND抗体为6.8log2。

表2 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫21日龄雏鸡后的HI抗体效价(log2)

表3 SPF瓶和普通瓶L系活疫苗免疫200日龄产蛋鸡后的HI抗体效价(log2)

图2 21日龄雏鸡免疫SPF和普通L系活疫苗后HI抗体消长规律

图3 产蛋免疫SPF瓶和普通瓶疫苗后的新城疫HI抗体消长规律

表4 疫苗病毒半数感染量(EID50)

图4 新城疫SPF疫苗和新城疫普通疫苗病毒半数感染量对比

对21日龄雏鸡进行免疫,免疫抗体监测表明,在免疫2周后,ND抗体达到了最高,SPF疫苗ND抗体为9.8log2;普通疫苗ND抗体为9log2。SPF疫苗ND抗体在达到高峰后一直持续较高水平,免疫后第10周ND抗体保持较高水平,ND抗体也在7.1log2以上。通过产蛋鸡的疫苗免疫鸡免后15 d～60 d的抗体检测:ND效价＞7.8log2、VA效价＞21.5,主要因为是SPF疫苗是用SPF鸡胚制作的,疫苗具有较高效价,为后代提供母源抗体防止ND对雏鸡的感染。

试验还通过对200日龄的产蛋鸡进行免疫,免疫后三周抗体效价达到最高峰,SPF疫苗ND抗体为10.8log2;普通疫苗ND抗体为10.1log2,结果表明,免疫后所有鸡都达到了较高的抗体效价,但SPF新城疫弱毒活疫苗免疫鸡产生的抗体效价明显高于普通瓶疫苗,免疫持续期更长。

3.2 新城疫SPF疫苗与普通疫苗病毒半数感染量对比 普通胚蛋接毒后死胚率比SPF鸡胚低,其原因是因为普通胚蛋存在母源抗体中和了部分病毒,降低了病毒对鸡胚的致病能力。因此在使用SPF蛋生产疫苗时,针对其母源抗体为零的特征,建议适当增加接毒稀释倍数,通过减小病毒数量来降低致病力,从而降低死胚率和提高生产利用率。

采用SPF鸡胚生产收获的毒液血凝价和EID50比普通胚蛋高,主要原因是SPF鸡胚无新城疫母源抗体和其他抗体存在,避免了抗体的干扰,使得病毒繁殖良好。采用SPF鸡胚所生产的疫苗质量高,不仅免疫效力较高,而且有效地避免了鸡白血病,支原体等病原的传播。

3.3 新城疫SPF疫苗与普通疫苗比较 SPF疫苗与普通疫苗相比,其生产工艺过程完全一致,主要区别在于疫苗的内在质量。

种蛋来源生产SPF疫苗原材料采用SPF种蛋生产,SPF鸡种蛋不含有鸡新城疫、鸡传染性腔上囊病等近20种疫病抗体,种蛋纯净,适于培养病毒(吴长新等,2003),从根本上剔除了多种特定抗体或病原的干扰;用SPF鸡胚,可杜绝母源抗体的干扰,获得在非SPF鸡胚中达不到的病毒滴度,提高了单胚抗原的产出量,不仅保证疫苗的纯净,而且生产过程中可大大提高疫苗的效力。原材料不带有多种特定病源微生物和寄生虫,而且在疫苗生产过程中,增加了抗原超滤工艺,去除了抗原中的杂质和异体蛋白,从原材料和生产工艺双重环节进行监管,提高纯净度,减少应激反应,让产品使用更安全。

疫苗检验上的要求按照农业部2000年版《兽用生物制品规程》的规定要求,对生产疫苗的原材料(动物、组织、胚胎、细胞培养物)需做外源病毒检验。而用SPF动物的组织、胚胎、细胞培养物制备的疫苗可不做外源病毒检验。根据疫苗生产所用种蛋来源看,普通种蛋很难保证不含外源病毒,SPF种蛋无杂菌污染,因此普通疫苗不如SPF疫苗纯净(靖宁,2007)。

质量上的区别从以上所述可以看出,普通疫苗很难根除外源污染,动物的一些传染病,如禽类的鸡白痢、鸡支原体病、禽白血病、禽脑脊髓炎、网状内皮增生综合征、禽腺病毒病、产蛋下降综合征等可经蛋传播,如果这些病原不根除,很有可能经蛋带入疫苗而传染给接种疫苗的鸡群。而SPF疫苗所含有的抗原纯净。在疫苗接种鸡群后,普通苗的免疫要受到外源病毒的干扰而产生部分免疫抑制,影响免疫效果,这样就需要反复强化免疫;SPF疫苗可以避免外界病毒干扰,免疫效果好,达到免疫防病的目的。

虽然接种普通疫苗的鸡群可能不出现明显的症状,即便是普通疫苗病毒产量高或抗体增长高,但如果有携带外源病毒可在鸡群中缓慢传播,对鸡群的生长、发育不利,也会影响正常的疫苗免疫接种,从而造成恶性循环,一代影响一代,导致整个鸡群饲料报酬过高,增加饲养成本,影响整个养禽业的发展。而使用SPF疫苗,正好可以解决这些问题,也有利于根除某些传染病的流行,使养禽业健康发展。

价格比较,因饲养SPF鸡条件要求很高,所以SPF疫苗比普通疫苗成本要高,但SPF疫苗无特定外源病原干扰,纯净度高,免疫效果好,可据监测减少免疫次数,同时减少治疗药物使用的成本,达到理想的养殖生产性能,从总体上看,使用SPF疫苗还是比普通疫苗性价比更高。

[1]蔡宝祥,殷震,谢三星,等.动物传染病诊断学[M].南京:江苏科学技术出版社,1993:177-180.

[2]严维巍,王永坤,田慧芳,等.一株鸡副粘病毒的分子特性研究[J].扬州大学学报:自然科学版,2000,3(1):27-31.

[3]吴长新,梁惠良,文其已,等.应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断鸽新城疫[J].中国畜禽传染病,1998,20(5):313-314.

[4]靖宁.SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖鸡新城病毒的比较试验[J].试验研究,2007,129(4):7-8.