阿胶泡腾颗粒对小鼠免疫功能的影响*

宋怡敏,毛跟年,康荣荣,毛瑞娟

(陕西科技大学,陕西西安 710021)

阿胶泡腾颗粒对小鼠免疫功能的影响*

宋怡敏,毛跟年*,康荣荣,毛瑞娟

(陕西科技大学,陕西西安 710021)

研究了阿胶泡腾颗粒对小鼠免疫功能的影响。通过免疫器官重量法,考察了阿胶泡腾颗粒对小鼠中枢免疫器官和外周免疫器官发育的影响;通过碳廓清试验,考察了阿胶泡腾颗粒对巨噬细胞吞噬功能的影响;通过迟发型变态反应试验,考察了阿胶泡腾颗粒对小鼠细胞免疫功能的影响。结果表明,阿胶泡腾颗粒能增加免疫抑制小鼠的脾脏、胸腺指数,与空白对照组相比有显著差异;高剂量的阿胶泡腾颗粒能显著增加小鼠的碳廓清指数,与空白对照组相比差异极显著;高、中剂量的阿胶泡腾颗粒能明显增加小鼠的足肿胀度,与空白对照组相比有显著差异。表明阿胶泡腾颗粒能增强小鼠的非特异性免疫和细胞免疫功能。

阿胶泡腾颗粒;小鼠;免疫器官指数;碳廓清试验;迟发型变态反应

*通讯作者

阿胶(Colla corii asini)是马科动物驴(Equus asinusL.)的皮经去毛后熬制而成的胶块,又名驴皮胶、付致胶,其与人参、鹿茸并称“中药三宝”[1]。阿胶的主要成分为胶原蛋白[2]。临床上常治疗血虚萎黄、眩晕心悸、虚风内动、吐血尿血等[3]。阿胶还可用于生产阿胶枣、阿胶奶酪[4]等保健品;已经有口服液、颗粒剂等多种剂型[5],如氨基葡萄糖阿胶制品[6]、阿胶保健口服液等。现代药理研究表明,阿胶对血液、造血系统、钙代谢、免疫系统及肿瘤方面均有明显作用,且有增强记忆、抗疲劳、耐缺氧等作用[7]。阿胶泡腾颗粒是阿胶经过特殊工艺加工而成的制剂,目前还没有阿胶泡腾颗粒药效研究的相关资料。本文通过动物试验研究了阿胶泡腾颗粒对机体免疫功能的影响,以便为其在实际中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试样品 阿胶泡腾颗粒,陕西科技大学生命学院生药实验室提供。

1.1.2 试剂 环磷酰胺,Alfa Aesar公司提供,用生理盐水配制成7.5 mg/mL的溶液;无水乙醇、氯化钠、碳酸钠等均为分析纯试剂。

1.1.3 40 mL/L、200 mL/L的鸡血红细胞混悬液将加有抗凝剂的鸡血,经2 000 r/min离心 10 min,弃去上清液,沉淀的红细胞用生理盐水轻轻吹打,经2 000 r/min离心10 min,反复洗涤3次后,再用生理盐水分别配制成40 mL/L、200 mL/L的鸡红细胞混悬液。

1.1.4 实验动物 昆明种小鼠,体重18 g～22 g,西安交通大学医学院动物中心提供,合格证号:SCXF(陕)2007-001。

1.1.5 仪器 TDL-40B型电子天平,上海精密科学仪器有限公司;752型紫外分光光度仪,上海光谱仪器有限公司;游标卡尺。

1.2 方法

1.2.1 免疫器官重量法 参照文献[8]的方法进行试验。取小鼠48只,雌雄各半,随机分成 4组,空白对照组、环磷酰胺组、环磷酰胺+阿胶泡腾颗粒组、阿胶泡腾颗粒组,每组12只。阿胶泡腾颗粒组、环磷酰胺+阿胶泡腾颗粒组小鼠灌胃2.8 g/kg体重的阿胶泡腾颗粒,给药体积0.2 mL/20 g体重;空白组、环磷酰胺组小鼠灌胃等体积的生理盐水。各组小鼠每天清晨空腹灌胃1次,连续10 d。在灌胃至第8天、9天、10天时,环磷酰胺组、环磷酰胺+阿胶泡腾颗粒组小鼠均腹腔注射75 mg/kg体重的环磷酰胺溶液,每天1次。末次灌胃24 h后,称量各组小鼠体重,然后将小鼠脱臼处死,摘取脾脏、胸腺,称重,计算胸腺指数、脾脏指数。

1.2.2 小鼠碳廓清试验 参照文献[9]的方法进行试验。取小鼠48只,雌雄各半,随机分为 4组,空白对照组、阿胶泡腾颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。阿胶泡腾颗粒低、中及高剂量组小鼠分别灌胃1.4、2.8、5.6 g/kg体重的阿胶泡腾颗粒,给药体积0.2 mL/20 g体重;空白组灌胃等体积的蒸馏水。各组小鼠每天清晨空腹灌胃1次,连续10 d。末次灌胃2 h后,各组小鼠均尾静脉注射用生理盐水稀释5倍的墨汁0.01 mL/g体重,立即计时,分别于注射墨汁后2 min、15 min时从尾静脉采血0.05 mL,移入到含2 mL 1 g/L Na2CO3溶液的试管中,混匀后测定光吸收度,计算碳廓清指数K(carbon expurgation)。

式中:A1为2 min所采血样的吸光值;A2为15 min所采血样的吸光值;t1为2 min,t2为15 min。

1.2.3 小鼠迟发型变态反应试验 参照文献[10]的方法,小鼠分组、给药方法、给药剂量和时间同“小鼠碳廓清试验”。在灌胃至第6天时,各组小鼠均腹腔注射40 mL/L的鸡红细胞混悬液0.2 mL/只,进行致敏,在灌胃第10天,各组小鼠于左后足跖部皮下均注射200 mL/L的鸡红细胞混悬液200 μL/只,进行攻击。同时,于攻击前及攻击后24 h测量各组小鼠左后足跖同一部位厚度,采用足跖增厚法计算迟发型变态反应值(delayed type hypersensitivity,DTH)。

1.2.4 数据处理 试验结果用平均值±标准差表示,各组间数据用t检验进行分析。

2 结果

2.1 阿胶泡腾颗粒对小鼠免疫器官指数的影响

用环磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型,计算小鼠胸腺指数和脾脏指数,结果见表1。

表1 阿胶泡腾颗粒对小鼠免疫器官指数的影响Table 1 Effect of E-jiao effervescent granules on immune organ indexes in mice

由表1可见,无论是否灌胃阿胶泡腾颗粒,腹腔注射环磷酰胺后,各组小鼠的免疫器官指数均明显降低,说明造模成功。与空白对照组相比,各组小鼠脾脏指数均表现出显著差异(P＜0.05),环磷酰胺组、环磷酰胺+阿胶泡腾颗粒组小鼠胸腺指数有极显著差异(P＜0.01),阿胶泡腾颗粒组小鼠胸腺指数则表现出显著差异(P＜0.05)。对环磷酰胺型免疫抑制模型小鼠灌胃阿胶泡腾颗粒后,小鼠的免疫器官指数均明显回升;与环磷酰胺组相比,环磷酰胺+阿胶泡腾颗粒组小鼠脾脏指数及胸腺指数无显著差异(P＞0.05),阿胶泡腾颗粒组小鼠脾脏指数及胸腺指数有极显著差异(P＜0.01)。表明阿胶泡腾颗粒能使环磷酰胺免疫抑制小鼠的免疫器官指数有所回升。

2.2 阿胶泡腾颗粒对小鼠碳廓清指数的影响

用紫外-可见分光光度仪,选取波长680 nm,测血样光吸收度,计算小鼠碳廓清指数,结果见表2。

由表2可见,灌胃阿胶泡腾颗粒后,虽然各组小鼠的碳廓清指数均有所升高,但与空白对照组相比,阿胶泡腾颗粒低、中剂量组小鼠碳廓清指数无显著差异(P＞0.05),而高剂量组小鼠碳廓清指数则表现出极显著差异(P＜0.01)。表明高剂量的阿胶泡腾颗粒能显著提高小鼠的碳廓清指数。

表2 阿胶泡腾颗粒对小鼠廓清指数的影响Table 2 Effect of E-jiao effervescent g ranules on the clearance of carbon particle in mice

2.3 阿胶泡腾颗粒对小鼠足肿胀度的影响

用游标卡尺测定足跖厚度。按照上述方法试验后计算小鼠DTH值,结果见表3。

表3 阿胶泡腾颗粒剂对小鼠DTH值的影响Table 3 Effect of E-jiao effervescent granules on DTH in mice

由表3可见,灌胃阿胶泡腾颗粒后,各组小鼠的DTH虽然均有所升高,但与空白对照组相比,阿胶颗粒低剂量组小鼠DTH未见显著性差异(P＞0.05),中、高剂量组小鼠DTH值均表现出显著差异(P＜0.05)。表明阿胶泡腾颗粒能不同程度的提高小鼠的足肿胀度。

3 讨论

阿胶为传统中药,在我国的应用已经有2 500多年的历史。阿胶中含有胶原蛋白、多肽、氨基酸、硫酸皮肤素及硒、锌等多种微量元素。现代医学研究已经证明,阿胶具有补血、抗疲劳、提高机体免疫功能等多种功效。阿胶泡腾颗粒是以传统阿胶为主要原料,经过现代工艺技术研制而成的一种新剂型。为了明确阿胶泡腾颗粒对机体免疫功能的影响,本文以成人每日推荐的阿胶使用量为基础,根据阿胶泡腾颗粒中阿胶的实际含量,换算出小鼠的等效剂量为中等剂量,扩大两倍或缩小两倍为高剂量及低剂量,分组对小鼠进行灌胃。

胸腺为中枢免疫器官、脾脏为外周免疫器官,这些免疫器官指数的高低在一定程度上能够反映机体免疫机能的强弱。环磷酰胺是一种免疫抑制剂,能使实验动物胸腺萎缩、脾脏变小,抑制机体的免疫功能。对环磷酰胺免疫抑制小鼠灌胃阿胶泡腾颗粒,结果显示小鼠的胸腺指数和脾脏指数均有所增加,表明阿胶泡腾颗粒能够促进中枢和外周免疫器官发育,提高机体的免疫功能。

碳廓清试验是检测机体非特异性免疫功能的常用方法之一。颗粒状异物(如碳粒)静脉注射进入血液循环后,能迅速被巨噬细胞吞噬,若将异物量恒定,测定异物在血液中的消除速率,可以反映巨噬细胞的吞噬功能[11]。碳廓清试验结果显示,给小鼠灌胃阿胶泡腾颗粒后,小鼠的碳廓清指数有所增加,提示阿胶泡腾颗粒能提高小鼠巨噬细胞的吞噬能力,增强机体非特异性免疫功能。

鸡血红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应是由特异性致敏效应T细胞介导的细胞免疫反应,其中的T细胞在排斥自身免疫和肿瘤免疫等方面起着关键作用,是检测细胞免疫功能的常用方法之一。迟发型变态反应结果显示,给小鼠灌胃阿胶泡腾颗粒后,能不同程度的提高小鼠的DT H值,提示阿胶泡腾颗粒能够激发小鼠T细胞介导的细胞免疫应答,增强小鼠的细胞免疫功能。

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Effect ofColla Corri AsiniEffervescent Granules on Immune Function in Mice

SONG Yi-min,MAO Gen-nian,KANG Rong-rong,MAO Rui-juan

(Shaanxi University of Science and Technology;Xi＇an,Shaanxi,710021,China)

The effect ofColla corri asinieffervescent granules on immune function was studied.The development of central immune organs and peripheral immune organs with E-jiao effervescent granules was inspected by immune organ weight method;the test of carbon clearance was applied to determine the effect ofColla corri asinieffervescent granules on macrophage phagocytic function;through the test of delayed hypersensitivity,the effect ofColla corri asinieffervescent granules on cellular immune function was studied.The results showed that theColla corri asinieffervescent granules could increase spleen index and thymus index of the immunosuppressive mice,which had a significant difference comparing with the blank control group;the high doses of the E-jiao effervescent granules could obviously enhance the clearance of carbon particle in mice,which had a very significant difference comparing with the blank control group;the high and middle doses of E-jiao effervescent granules could enhance the paw swelling in mice obviously,which had a significant difference comparing with the blank control group.These results indicated thatColla corri asinieffervescent granules could enhance the nonspecific immunity and cellular immunity in mice.

E-jiao effervescent granules;mouse;immune organ index;carbon clearance test;delayed type hypersensitivity test

S859.7

A

1007-5038(2011)09-0073-03

2011-06-13

宋怡敏(1986-),女,山西临汾人,硕士研究生,主要从事药物新材料研究。