人参五味子汤和小青龙汤二步序贯治疗对哮喘小鼠肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4水平及气道炎症的影响

董翠香，曲政海，韩征利，刘秀美，周 立

(1临淄区人民医院，山东临淄 255400;2青岛大学医学院附属医院)

支气管哮喘目前尚无有效治疗方法，吸入糖皮质激素也仅仅是减轻气道炎症、延缓气道重塑的对症治疗措施。2010年 4月 ～2010年 5月，我们以人参五味子汤和小青龙汤为基本方，探讨中药二步序贯治疗对哮喘小鼠气道炎症的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 卵清白蛋白(OVA)(美国 Sigma公司)，氢氧化铝干粉(天津市天河化学试剂)，IL-4、INF-γELISA试剂盒(美国 RD生物制药公司)，布地奈德(瑞典阿斯利康公司)，人参五味子汤，小青龙汤。

1.2 方法

1.2.1 中药制备 制备人参五味子汤汁方剂:人参8 g，白术 6 g，茯苓 10 g，炙甘草 3 g，麦冬 10 g，五味子 3 g;药物经冷水浸泡 30 min，陶器砂锅武火煮沸后，文火煎 15 min，过滤，留取药汁;药渣加冷水煮沸后再熬 10 min，留取药汁，2次药汁约 100 ml，1 ml含生药 0.40 g，装入已消毒容器 4℃冰箱保存备用。小青龙汤汁方剂:麻黄、赤芍、防风各 9 g，细辛 3 g，甘草 4 g，半夏 8 g，五味子 3 g，桂枝 6 g;汤汁制备与人参五味子方法相同。

1.2.2 实验方法 健康雌性 SPF级昆明系小鼠 40只，4～5周龄，体质量 16～18 g。随机分为正常对照组、哮喘组、布地奈德组、二步序贯组，每组 10只。各组小鼠于 SPF级实验动物房适应 10 d。①致敏阶段:哮喘组、布地奈德组、二步序贯组分别于 0、7、14 d行腹腔注射 OVA混悬液 0.2 ml，正常对照组以PBS液替代。期间二步序贯组每日予以人参五味子汤 0.4 ml胃饲(含生药 0.160 g)，正常对照组予以生理盐水 0.4 ml胃饲。②激发阶段:在最后 1次腹腔注射结束后 1周，将各组小鼠分别放入 30 cm×40 cm×30 cm自制雾化箱内，电动空气驱动雾化1%OVA，每日 1次，每次 30 min，连续 9 d。正常对照组以 PBS替代。期间布地奈德组于激发前 20 min予以雾化布地奈德约 20 min;二步序贯组于激发前30 min分别予以小青龙汤 0.4 ml胃饲(含生药0.204 g)。③病理检查:最后一次雾化结束后 24 h内处死小鼠，眼球取血;打开胸腔，观察肺脏的大体改变，选取左侧肺脏，经 4%多聚甲醛固定液固定约24 h，脱水，石蜡包埋，制备厚 3μm的标准切片，待病理学检查。

1.2.3 肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4测定及气道组织炎症分级 INF-γ、IL-4测定严格按 ELISA试剂盒说明书进行操作，450 nm波长下测量各组的吸光度，并计算出对应的样品浓度。气道组织炎症分级参照文献[1]评定支气管周围的炎性细胞浸润程度，共分 0～4级。

1.3 统计学方法 采用 SPSS17.0软件，计量资料以±s表示，组间均数差异比较用单因素方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 体征变化 哮喘组、布地奈德组、二步序贯组小鼠激发吸入 1%OVA后出现抓耳挠腮、烦躁不安或俯伏不动、屎尿多，有的出现呼吸加深加快的表现，哮喘组较其它各治疗组症状均较明显。正常对照组雾化 PBS未见上述表现。哮喘组小鼠雾化 3 d后出现皮毛无光泽现象，正常对照组未出现。

2.2 气道组织的肉眼改变 正常对照组小鼠的气道组织颜色呈粉红色，其他组小鼠的气道组织较正常对照组略苍白，其中哮喘组较明显，有的出现黑色斑点或纹理，有的体积有不同程度增大。

2.3 肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4水平测定及小鼠肺部炎症浸润程度 见表1。

表1 各组小鼠气道炎症及肺泡灌洗中 INF-γ、IL-4水平比较(±s)

表1 各组小鼠气道炎症及肺泡灌洗中 INF-γ、IL-4水平比较(±s)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01，△P＜0.05

组别 n炎症细胞浸润(级)INF-γ(ng/L) IL-4(ng/L)正常对照组 10 0.8±0.42 527.01±23.21 152.02±5.93哮喘组 10 3.6±0.52* 272.71±13.71△ 232.85±5.42△布地奈德组 10 1.9±0.74* 374.81±19.63△ 162.44±7.79△二步序贯组 10 2.0±0.82* 510.63±29.16 167.89±4.77△

3 讨论

研究表明，哮喘缓解期患儿存在 Th1/Th2调节失衡[2];进一步研究表明哮喘发作期患儿血清中代表Th1功能的 INF-γ水平降低，代表Th2功能的 IL-4水平明显升高[3];同样在哮喘大鼠肺泡灌洗液、血浆及淋巴液均有 IL-4水平升高及 INF-γ水平的降低[4]。以上说明，Th1/Th2失衡贯穿哮喘发病的始终，是哮喘发生发展的重要机制。

哮喘在中医上也分发作期与缓解期，哮喘证候发作期分寒哮、热哮、风哮和虚哮;缓解期为肺气亏虚、脾气亏虚和肾气亏虚[5]。人参五味子汤出自清代名医陈复正《幼幼集成》，具有益气健脾、固卫养肺之效，主治“久嗽脾虚、中气怯弱、面白唇白”及“咳而久不止”等病症。对人参五味子汤进行现代药理学研究证实，它不仅可以增强单核吞噬细胞的吞噬功能，诱生干扰素，增强机体免疫功能，并有止咳、平喘、祛痰等对症治疗作用[6]。吴振起等[7]认为人参五味子汤能明显改善患儿免疫状态，并增强患儿机体抗感染能力。小青龙汤出自张仲景《伤寒论》一书，是治疗支气管哮喘的有效经典名方。从现代药理学上讲，小青龙汤不仅改善肺部炎症、改善哮喘症状还能调节机体的免疫失衡。张在其等[8]发现小青龙汤可选择性降低哮喘小鼠肺组织内Th1/Th2数量，逆转失衡的 Th1/Th2。张建国等[9]应用小青龙口服液治疗支气管哮喘，临床上收到良好的效果。

本结果显示，布地奈德及二步序贯组在小鼠激发阶段症状较轻，两组间小鼠肺部炎症细胞浸润程度比较无明显差异，且较哮喘组明显降低。各组肺泡灌洗液中 IL-4水平比较，哮喘组显著升高;各组肺泡灌洗液中 INF-γ水平比较，发现各治疗组均较哮喘组显著升高外，二步序贯组同正常对照组差异无统计学意义，提示二步序贯治疗在调节 INF-γ水平有其独特之处。二步序贯治疗可通过调节 Th1/Th2失衡有效地改善气道炎症，治疗效果与吸入布地奈德相似，此为今后哮喘中药序贯治疗提供了理论基础。

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