清肺饮颗粒对家兔实验性耳痤疮影响的研究

郑慕雄，王建中，郭义龙，陈玉兴

痤疮是临床的常见病、多发病。中药复方清肺饮是以枇杷清肺饮为基础方，用于治疗痤疮，临床应用表明其疗效确切。为进一步研究其治疗痤疮的相关机理，我们进行了清肺饮颗粒对煤焦油所致家兔耳痤疮影响的实验性研究，以期阐明清肺饮颗粒治疗痤疮的药理效应及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 家兔，体重2.0～2.5 kg，雌雄兼用，雌性未孕[(广东省医学实验动物中心提供，许可证号为SCXK（粤）2008-0002、粤监证字2008A049)]。本实验设施使用许可证号：动物实验室SYXK（粤）2005-0059。

1.1.2 药物与试剂 清肺饮颗粒[(桑白皮、枇杷叶、生地、赤芍、黄芩、公英、连翘、浙贝、夏枯草、天花粉、桔梗等），汕头市皮肤性病防治院，批号Y081120]；解毒痤疮丸（江西汇仁药业有限公司，批号0804001），煤焦油（江门市恒健药业有限公司，批号081101）。

1.2 试验方法

1.2.1 痤疮模型建立 取成年未孕家兔36只，单笼饲养。参照文献方法[1,2]，家兔均于左耳内侧面耳管开口处3.0cm×3.0 cm范围内，涂浓煤焦油溶液0.5 ml 1次/d，连续2周，对照组家兔于同一位置处涂抹等剂量的橄榄油。

1.2.2 分组灌药 成年未孕家兔36只随机均分成对照组、模型实验组、解毒痤疮丸组[3]，清肺饮颗粒高、中、低剂量组，每组6只，家兔按解毒痤疮丸[4,5]0.84g/kg，清肺饮颗粒高剂量1.12 g/kg、中剂量0.56 g/kg、低剂量0.28 g/kg（分别相当于4倍、2倍、1倍临床等效剂量[4,5]）灌胃给药，给药容积为10 ml/kg，正常对照组、模型实验组同法灌胃等容积的蒸馏水，1次/d，连续2周。

1.2.3 取材及观察 痤疮模型建立及灌药2周末次给药1h后肉眼观察耳廓皮肤变化，包括耳厚度、硬度、粗燥程度、毛囊口有无黑色角栓等。用直径12.0 mm打孔器取家兔左右耳内侧面耳管开口处同一位置耳片（左耳片处涂有浓煤焦油），称重，计算左右耳片重量差值[6]；取涂有浓煤焦油的左耳组织，中性甲醛固定后，常规石蜡切片、HE染色，光镜下观察耳廓组织炎性病变。

1.2.4 病理组织学判定标准 病理组织学判定标准：（-）为无痤疮；（+）为毛囊轻度角化，皮脂腺轻度增生或无明显增生；（++）毛囊面积轻度扩大，漏斗部可见中等量的角化物质，皮脂腺轻度增生；（+++）毛囊面积明显扩大，内有大量的角化物质，皮脂腺直径明显增大。

1.2.5 统计学处理 采用SPSSl5.0软件进行统计学分析，所有计量（定量）资料以均值加减标准差（）表示，多组间均数的比较采用单因素方差析（One-Way ANOVA），等级资料采用秩和检验，α=0.05。

2 结果

2.1 肉眼观察

正常家兔耳朵菲薄、柔软，毛细血管清晰可见，耳管开口处毛囊口排列整齐（图1）。模型实验组涂煤焦油部位的兔耳皮肤在1周后即干燥、粗糙且增厚、变硬；毛囊口有黑色角栓，部分毛囊口隆起呈丘疹状；表面可见煤焦油厚痂，结痂粘连着表皮，难以揭去（图2）。各给药组灌胃治疗后，兔耳黑色角栓、丘疹状隆起等症状明显减少（图3-6）。

2.2 组织病理观察

正常家兔耳表皮较薄，只有1层颗粒层，2～4层棘细胞层，毛囊、真皮、表皮交界清楚可见（图7）；模型实验组可见表皮角化过度，表皮和毛囊上皮的颗粒层增厚，棘层肥厚，部分相邻扩张的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部充满角化物质，并向皮脂腺延仲，毛囊口被角质栓堵塞，毛囊漏斗部充满角化物质并扩大呈壶状，真皮上皮毛细血管扩张，毛囊周围散在炎细胞浸润（图8）；用药后各组可见表皮增厚减轻明显，毛囊口扩张程度减轻，其内角化物质疏松、减少，部分已接近正常组织（图9-12）。清肺饮颗粒对家兔实验性痤疮组织病理学分级比较见表1。

表1 清肺饮颗粒各剂量组对家兔实验性耳痤疮组织病理学的影响

2.3 家兔左右耳片重量差观察

方差分析显示，各组家兔左右耳片重量差异有统计学意义（P＜0.01）。进一步比较，解毒痤疮丸组、清肺饮颗粒各剂量组与正常对照组及模型实验组之间存在差异，但清肺饮各剂量组间差异无统计学意义（表2）。

表2 清肺饮颗粒对家兔左右耳片重量差值的影响(±s，n=6)

表2 清肺饮颗粒对家兔左右耳片重量差值的影响(±s，n=6)

组别 剂量(g/kg)耳片重量(mg)正常对照组 - 8.28±7.42模型实验组 - 116.23±9.85清肺饮颗粒组 1.12 62.88±13.24 0.56 51.12±9.87 0.28 57.20±34.55解毒痤疮丸组 0.84 61.48±17.32

3 讨论

图1 正常兔耳外观

图2 实验模型组兔耳外观

图3 解毒痤疮丸组兔耳外观

图4 清肺饮高剂量组兔耳外观

图5 清肺饮中剂量组兔耳外观

图6 清肺饮低剂量组兔耳外观

痤疮是一种以粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿为特征的疾病，是青春期和成人期一种常见、多发的皮肤疾患。痤疮的发生与毛囊皮脂腺雄激素受体升高、皮脂腺细胞雄激素敏感性增加，大量脂质分泌[7]和毛囊皮脂腺导管角化栓塞，皮脂淤积在毛囊口有关[8]。因此，痤疮药物治疗的原则是减少皮脂分泌、溶解毛囊角栓和减轻炎症[9]。

兔耳痤疮模型的应用己经超过了半个世纪，故重复性强，是经典的痤疮动物模型。本实验中模型组家兔耳廓肉眼下有黑色角栓、丘疹状隆起、表皮和毛囊上皮增厚、相邻扩张毛囊融合、毛囊口角质栓形成、毛囊漏斗部角化物扩张及毛囊周围炎细胞浸润、耳廓增厚、增重等痤疮特征性病变，与文献一致[10]，提示痤疮动物模型建立成功。给予清肺饮颗粒治疗的兔耳，用药后毛囊角化异常得到明显改善或消失，其组织病理学分级与模型实验组比较，差异有显著意义（P＜0.01），表明清肺饮颗粒可通过纠正毛囊导管的角化异常治疗寻常痤疮，这可能是其治疗痤疮的药理机制之一，但清肺饮颗粒各剂量组之间组织病理学分级比较，差异无显著意义（P＞0.05），说明在临床剂量增加的情况下，其治疗效果并未能提高。

此外，模型实验组动物左右耳耳廓重量差较正常组显著增加，提示在煤焦油刺激下，家兔兔耳毛囊及毛囊周围炎症细胞浸润，产生痤疮的损害，耳廓发生增生性病变；经清肺饮颗粒各剂量组治疗后的家兔左右耳耳廓重量差与模型实验组相比，其差异有显著意义（P＜0.01），提示清肺饮颗粒可以减轻由煤焦油刺激引起的家兔兔耳的炎症性损害，这可能也是其治疗痤疮的药理机制。

图7 正常组兔耳组织学（HE染色×200)

图8 实验模型组兔耳组织病理（HE染色×200)

图9 解毒痤疮丸组兔耳组织病理（HE染色×200)

图10 清肺饮高剂量组兔耳组织病理（HE染色×200)

图11 清肺饮中剂量组兔耳组织病理（HE染色×200)

图12 清肺饮低剂量组兔耳组织病理（HE染色×200)

中医认为痤疮是肺胃有热所致，治宜以清热泻火、凉血解毒为主。清肺饮是由经典方“枇杷清肺饮”为加减而成的协定方，其中桑白皮、枇杷叶清热宣肺泻火为君药；生地、赤芍凉血解毒，黄芩、公英、连翘清泻肺胃，共为臣药；佐以浙贝母、夏枯草、天花粉以清热软坚散结；桔梗排脓并载药上行为使药。诸药合用，共奏清热泻火、凉血解毒的功效。由结果可知，清肺饮颗粒可显著抑制家兔痤疮耳片重量、改善耳廓组织病变，推测纠正毛囊导管角化异常与抗炎作用可能是清肺饮颗粒治疗痤疮的药理机制，但其详细机制尚有待进一步研究。

[1]叶寿山, 韩传环, 王萍, 等. 克痤隐酮凝胶对实验性兔耳痤疮模型等的治疗作用 [J]. 上海实验动物科学, 2002, 22(3):155-158.

[2]宋业强, 王春海. 痤疮饮合剂治疗寻常痤疮临床及实验研究 [J].山东中医药大学学报, 2004, 28(5):348-350.

[3]孟祖东, 杜天平, 黄风云, 等. 解毒痤疮丸联合中药面膜治疗寻常痤疮疗效观察 [J]. 中国现代药物应用, 2010, 4(15):107-108.

[4]陈奇. 中药药理研究方法学 [M]. 1版. 北京:人民卫生出版社,2000:33-34.

[5]王北婴, 李仪奎. 中药新药研制开发技术与方法 [M]. 1版. 上海:上海科学技术出版社, 2001:38-39.

[6]陈玉兴, 黄雪君, 曾晓会,等.不同工艺清热暗疮片治疗家兔耳痤疮的比较研究 [J].中药新药与临床药理, 2009, 20(3):215-217.

[7]鞠强, 沈丹蓓, 夏隆庆. 人皮脂腺细胞与雄激素关素的研究进展[J]. 国外医学•皮肤性病学分册, 2002, 28(6):372-374.

[8]赖小娟, 江光明, 张小青,等. 迟发性痤疮的治疗以及护理观察[J]. 中医药导报, 2007, 13(6):-89-90.

[9]韦无边.痤疮的治疗进展[J].右江民族医学院学报, 2008, 30(3):488-490.

[10]陈德宇, 钟建桥, 许飏. 复方紫金霜对兔耳粉刺模型治疗及P物质的影响 [J]. 中国皮肤性病学杂志, 2007, 21(9):527-530.