禽流感（H9）疫苗免疫间隔期探讨

李 梅 ，赵全兴 ，国 林 ，马建平 ，王 刚 ，刘新喜 ，刁有祥

（1.山东众成健康养殖工程公司，山东 肥城 271600；2.山东农业大学，山东 泰安 271018）

禽流感（AI）又称鸡瘟、真性鸡瘟和欧洲鸡瘟，是由A型流感病毒（AIV）引起的禽类的一种疾病综合症，鸡、火鸡以及鸭、鹅、鵪鹑和海鸥等家禽、水禽、野鸟均可感染，病禽表现为死亡、产蛋量下降、严重的呼吸道疾病、系统综合症或隐性感染等多种病型[1-2]，给养禽业造成巨大的经济损失，并严重威胁着人类公共卫生安全。目前，当流感疫苗免疫接种和严格的生物安全措施相结合仍是预防和控制该病的主要措施。近年来，我们对禽流感实施高密度的免疫接种，通过疫苗免疫可使鸡群得到有效保护，但是过频免疫会产生免疫抑制。为此本试验连续采用三批海兰褐蛋鸡进行全程的AI抗体跟踪，综合分析禽流感抗体动态变化规律，探讨禽流感的免疫间隔，寻找禽流感疫苗的接种规律。

1 材料与方法

1.1 试验动物

1日龄健康海兰褐蛋鸡购于泰安东岳种禽有限公司。

1.2 试验材料

96孔V型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。

禽流感H9亚型血凝抑制试验抗原由中国科学院提供。

禽流感灭活疫苗（H9亚型），鸡新城疫病毒（Lasota株）、禽流感病毒（H9亚型）二联灭活疫苗购于广州市华南农大生物制品有限公司。

1.3 试验动物的处理

连续采用三批1日龄健康海兰褐蛋鸡，每批3000只，第三批鸡随机又分为A、B、C三组，每组1000只，试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂，每批鸡的禽流感免疫程序如下表1、表2、表3，疫苗的接种剂量按照生产厂家的建议剂量进行免疫。30 d之前，采用心脏采血的方法，30 d之后，采用翅静脉采血，每隔3 d随机选取50只鸡采血，分离血清，根据HI法检测鸡只的抗体水平，根据平均值绘制抗体消减曲线。

表1 第一批海兰褐蛋鸡免疫程序

表2 第二批海兰褐蛋鸡免疫程序

表3 第三批海兰褐蛋鸡免疫程序

1.4 抗体水平检测

采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T 18936-2003）。

2 结果

2.1 第一批鸡禽流感免疫间隔期比较

开产后，每隔3～4个月防疫一次禽流感灭活疫苗，抗体水平大都在7 log2以上，抗体滴度平均值在7 log2时大约维持3～4个月。根据图1的抗体消减规律走势，禽流感不同滴度下的抗体维持期如下表4。

2.2 第二批鸡禽流感免疫间隔期比较

表4 禽流感不同水平下的抗体维持期比较

开产后防疫3次禽流感灭活疫苗，抗体水平大都在8 log2以上，且此滴度抗体水平大约维持3个月。根据图2的抗体消减规律走势，禽流感不同滴度下的抗体维持期如下表5。

表5 禽流感不同水平下的抗体持续期比较

2.3 第三批鸡禽流感免疫间隔期比较

禽流感灭活疫苗的首次免疫，无论采用A、B、C组哪种疫苗组合，在哪个时间进行免疫都很难形成良好的抗体水平。45日龄之后免疫禽流感疫苗，抗体水平迅速上升，抗体滴度平均值维持在6 log2以上，产蛋期231日龄再防疫一次禽流感灭活疫苗，抗体滴度平均值6 log2基本上能够维持到产蛋鸡淘汰。根据图3的抗体消减规律走势，禽流感不同滴度下的抗体维持期如下表6。

3 讨论

H9的免疫间隔期与鸡的日龄和油苗的免疫次数密切相关，总体来说鸡得日龄越大，免疫次数越多，免疫抗体维持期越长。

表6 禽流感不同水平下的抗体持续期比较

总体来看：1～50日龄抗体的变化呈现“V”字形曲线，无论是11日龄的新流二联疫苗免疫，还是8日龄的禽流感（H9+H5）二联疫苗免疫和8日龄的新支流三联疫苗免疫，都很难起到良好的免疫效果。既然如此，此阶段的H9疫苗免疫是否可以取消，需要进一步的试验论证。

从禽流感（H9）灭活疫苗20日龄前的免疫可以看出：油苗的过早免疫并不能阻止母源抗体的下降，也不能起到良好的抗体提升作用，更不能阻止免疫空白期的出现。这就要求我们必须加强该阶段的饲养管理和生物安全控制。51～500日龄，该阶段抗体的变化随免疫接种时间而呈弧形变化，出现明显的抗体上升期、平台期、抗体下降期，而且随着免疫次数的增加和鸡群日龄的增大，平台期不断增长。

综合大量的临床试验发现，将鸡群禽流感（H9）抗体持续保持在8 log2的抗体水平是难于做到的，8 log2的抗体滴度免疫持续期相对较短，这就需要增加免疫次数，然而在鸡的整个产蛋期内需要肌肉注射的油苗众多，频繁的油苗注射反而形成鸡体的吸收障碍，使得单次疫苗注射很难形成良好的抗体平台期。因此要靠抗体的维持来杜绝禽流感疾病的发生是不现实的，但目前来说控制H9流行最有效的方法就是疫苗的接种，这就需要寻找一个契合点，即能有效的控制禽流感（H9）的流行又具有现实的可操作性。经过反复试验发现四次禽流感（H9）疫苗的免疫，可以维持整个育成、产蛋期6 log2以上的抗体水平，更为重要的是该抗体水平的鸡群不但生产性能稳定，而且并未出现禽流感疾病的流行。四次时机恰当、搭配合理的禽流感（H9）疫苗免疫基本上能使得95%以上产蛋期抗体维持于7 log2以上。