猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病三种疫苗不同组合同时分点免疫效果观察与分析

任宇斓 ，于厚军 ，蒋文生 ，骆志强 ，袁 超 ，郑朝峰 ，托建东

（1.新疆兵团农三师图木舒克市畜牧兽医工作站，新疆 图木舒克 843901；2.新疆兵团农三师44团兽医站， 843806）

前言

近年，国家对牲畜口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病均实施了强制免疫措施，对于有效防控重大动物疫病起到了关键作用。在生产、实践中为不影响疫苗免疫效果，各方均强调疫苗单独使用，且要求多重免疫须有一段间隔期，这不仅加大了人力、物力的投入，而且，免疫时产生的应激反应及频繁打扰养殖户，使养殖业主不快，防疫工作的开展受阻；其次随着生猪生产节奏的加快，商品代生猪5个月即可出栏，若严格按多重免疫注苗的间隔期，则可能有的疫苗未使用，一批猪就已出栏，造成疫苗报废与疫情隐患。本试验旨在探索新的科学免疫接种方法，确定合理有效的免疫程序。以减少生猪的疫苗接种次数及应激反应，提高防疫工作效率，确保免疫效果。试验如果推广实施将对防疫工作具有较好的指导意义：一是大大节约防疫工作中人力，物力的投入；二是有效降低应激反应给生猪生产养殖带来的损失；三是为提高防制猪类重大动物疫病的能力和水平更上新台阶，为养猪业健康、稳定、和谐发展打下基础。

1 材料

1.1 供试疫苗

猪口蹄疫O型灭活疫苗（OZK/93株+OR/80株），生产批号：0132003，生产日期：2010.01.10，有效期至2011.01.09；生产厂家：金宇保灵生物药品有限公司。

政府采购猪瘟活疫苗（脾淋源），生产批号：1006023-2，有效期至2011.06.01，生产厂家：齐鲁动物保健品有限公司。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1—R株），生产批号：2009030，有效期至 2011.05.06，生产厂家：扬州威克生物工程有限公司。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1—R株）专用稀释液，生产批号：100315，生产日期：2010.03.15，有效期至2012.03.14，生产厂家：扬州威克生物工程有限公司。

1.2 实验仪器及器械

低速离心机LC-800，科大创新股份有限公司中佳分公司。

定温恒温干燥箱NDO-400，日本东京理化器械（株）上海工程制造。

伯乐550酶标仪，合普机电工程（天津）有限公司。

ZW-A微量振荡器，常州国华电器有限公司。

20ml金属注射器，耳标钳，耳标，0.9号的兽用采血器，猪保定器，等。

1.3 实验试剂

猪瘟正向血凝抗原，生产批号：100524，猪瘟正向稀释液，生产批号：100512，生产厂家：中国农科院兰州兽医研究所。

口蹄疫O型正向血凝抗原，生产批号：101010，口蹄疫正向稀释液，生产批号：100918，生产厂家：中国农科院兰州兽医研究所。

高致病性猪蓝耳病抗体检测ELISA试剂盒，生产批号：100810，生产厂家：武汉科前动物生物有限公司。

1.4 试验动物

新疆生产建设兵团农三师44团某规模养猪场：饲养条件一致，健康状况良好，体重25～30 kg育肥猪。

2 试验方法

2.1 安全性预试验

随机抽取40头健康状况良好，饲养条件一致的体重25～30 kg育肥猪，分成四组，分别为A组猪口蹄疫（FMD）+猪瘟（HC）组，B 组猪口蹄疫（FMD）+高致病性猪蓝耳病（PRRS）组，C组猪瘟（HC）+猪高致病性蓝耳病（PRRS）组，D 组猪口蹄疫（FMD）+猪瘟（HC）+高致病性猪蓝耳病（PRRS）组。每组10头。根据分组各试验样本猪同时分点免疫注射相应疫苗，接种剂量严格按说明书操作。并加施免疫标识。注苗后每2 h测量一次体温，测两次，同时观察注射局部的反应和全身反应。对免疫副反应强烈的样本猪及时肌肉注射肾上腺素脱敏。筛选出免疫副反应较弱的搭配组继续试验。

2.2 免疫效力及免疫持续期试验

2.2.1 试验动物筛选及分组

另随机抽取250头饲养条件一致健康状况良好，体重25～30 kg的育肥猪，采全血分离血清进行口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病抗体监测，口蹄疫、猪瘟抗体监测采用正向间接血凝实验。高致病性猪蓝耳病抗体监测采用酶联免疫吸附实验。选取同时满足口蹄疫、猪瘟抗体效价小于4 log2，高致病性猪蓝耳病监测为阴性的猪150头为试验样本。 随机分成5组，分别为A组猪口蹄疫（FMD）+猪瘟（HC）组，B组猪口蹄疫（FMD）+高致病性猪蓝耳病（PRRS）组，C 组猪瘟（HC）+猪高致病性蓝耳病（PRRS）组，D组猪口蹄疫（FMD）+猪瘟（HC）+高致病性猪蓝耳病（PRRS）组。和E组即三种疫苗间隔免疫对照组（高致病性猪蓝耳病一周后猪瘟一周后猪口蹄疫），每组30头。

2.2.2 试验动物免疫注苗

常规饲养一周，所有样本猪根据分组于不同部位注射相应疫苗，注苗方案如表1。免疫剂量严格按说明书操作，并加施免疫标识。观察注射局部的反应和全身反应，对应激反应强烈的仔猪及时注射肾上腺素脱敏。并记录注苗日期，时间及注苗后反应。

表1 各组样本猪免疫注苗方案

2.2.3 免疫抗体监测

2.2.3.1 采血方案 对照组E组接种猪瘟疫苗时四个试验组免疫一周，四个试验组样本猪进行第一次采血，根据分组编号记录。对照组E组接种口蹄疫灭活苗时四个试验组免疫两周，四个试验组所有样本猪进行第二次采血，根据分组编号记录，对照组E组接种口蹄疫灭活苗一周时四个试验组免疫三周，全部试验样本猪采全血。以后每7天，进行一次全面采血监测至免疫抗体水平增长缓慢或基本不增长时，五个试验组样本猪均进行与首免同方案同剂量同批次疫苗的加强免疫。加强免疫后仍以7 d为周期全面采血监测。直至免疫抗体效价达到峰值并保持相对稳定之后。以21 d为周期全面采血监测至免疫抗体效价达不到农业部规定的标准（5 log2）[1]。

2.2.3.2 监测方法 分离血清进行口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病抗体监测，口蹄疫、猪瘟抗体监测采用正向间接血凝实验。高致病性猪蓝耳病抗体监测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）。试验过程按国家农业部《高致病性禽流感等14种动物疫病防治技术规范》[2]及ELISA监测试剂说明书操作。并对各组每次抗体效价进行比较，测算合格率。

3 结果与分析

3.1 安全性预试验结果及分析

本试验中各组样本猪均无明显免疫副反应，此项结果与相关文献[3，5-9]报道的一致。

3.2 免疫效力及免疫持续期试验结果及分析

3.2.1 判定标准

根据国家农业部动物疫病强制免疫及监测实施方案的规定运用正向间接血凝监测猪口蹄疫和猪瘟免疫抗体效价达到5 log2为合格。免疫抗体合格率全年保持在70%以上[1]。

3.2.2 口蹄疫免疫抗体监测结果

用正向间接血凝监测A、B、D、E组猪口蹄疫免疫抗体效价及合格率结果见表2。

表2 口蹄疫“O”型正向间接血凝监测免疫抗体合格率及平均抗体效价

3.2.3 猪瘟免疫抗体监测结果

用正向间接血凝监测A、C、D、E组猪瘟免疫抗体效价及合格率结果见表3。

3.2.4 高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测结果

3.2.5 各组比较与分析

表3 猪瘟免疫抗体正向间接血凝监测合格率及平均抗体效价

从图1、2可以看出，猪口蹄疫免疫抗体28 d监测的平均抗体效价与35天监测的平均抗体效价基本保持一致，所以在生产实践中应选择首免后28～30 d进行口蹄疫加强免疫，这与国家农业部动物疫病强制免疫计划实施方案中要求口蹄疫免疫一个月后进行加强免疫不谋而合。但在本试验中由于监测结果的时间差，于首免35 d时，各试验组进行了与首免同方案同剂量同批次疫苗的加强免疫。

猪口蹄疫免疫抗体对数增长期为首免后14～21 d，42～49 d，经加强免疫于63 d免疫抗体效价达到峰值。首免后35 d，免疫合格率达到70%，刚刚达到国家农业部的要求，经加强免疫后于49～84 d免疫合格率达到100%。并持续近30 d。群体免疫抗体合格率达到70%以上持续至105 d。

A组与E组相比，A组口蹄疫平均免疫抗体效价远远低于E组，合格率虽都能达到100%，但A组峰值维持时间较E组短，经统计分析差异极显著（P＜0.01）。

B组与E组相比，B组口蹄疫平均免疫抗体效价低于E组，但较A组稍高一些；合格率虽都能达到100%，但B组峰值维持时间较E组短。经统计分析差异显著（0.01＜P＜0.05）。

D组与E组相比，D组口蹄疫平均免疫抗体效价较E组稍低一点。合格率同时达到100%，且峰值维持时间基本保持一致，差异不显著（P＞0.05）。

各组相比不难看出猪口蹄疫免疫效果由强到弱的顺序为E组≥D组＞B组＞A组。合格率D组与E组相同。

从图3、4可以看出，猪瘟免疫抗体未出现加强免疫临界点，分析有两种可能，一是猪瘟免疫可能不需要加强免疫，但这种可能性比较小；二是据本试验由于监测结果的时间差，于首免35 d时，各试验组进行了与首免同方案同剂量同批次疫苗的加强免疫。说明猪瘟加强免疫时间恰恰是首免后35 d，这与国家农业部动物疫病强制免疫计划实施方案中要求猪瘟免疫35 d后进行加强免疫不谋而合。所以应当排除第一种可能。

猪瘟免疫抗体对数增长期为首免后7～14 d。经加强免疫于42 d免疫抗体效价达到峰值，峰值持续近30 d。首免后21 d，免疫合格率达到70%～80%，经加强免疫后于42 d免疫合格率达到100%。并持续近两个月。群体免疫抗体合格率达到70%以上持续至147 d。

A组与E组相比，A组猪瘟平均免疫抗体效价远远低于E组，合格率虽都能达到100%，但A组峰值维持时间较短，经统计分析差异极显著（P＜0.01）。

C组与E组相比，C组猪瘟平均免疫抗体效价低于E组，但较A组稍高一些；合格率虽都能达到100%，但C组峰值维持时间较E组短。经统计分析差异显著（0.01＜P＜0.05）。

D组与E组相比，D组猪瘟平均免疫抗体效价较E组略高。合格率同时达到100%，且峰值维持时间基本保持一致，经统计分析差异不显著（P＞0.05）。

各组相比不难看出猪瘟免疫效果由强到弱的顺序为D组≥E组＞B组＞A组，合格率D组与E组相同。

从图5可以看出，高致病性猪蓝耳病抗体未出现加强免疫临界点，本试验由于监测结果的时间差，于首免35 d后，各试验组进行了与首免同方案同剂量同批次疫苗的加强免疫。说明高致病性猪蓝耳病加强免疫时间是首免后35 d。高致病性猪蓝耳病抗体对数增长期为首免后14～21 d。经加强免疫于56 d达到峰值，峰值持续近7 d。免疫阳性率达到70%～73.3%。刚刚达到国家农业部的要求。

B组与E组相比，B组高致病性猪蓝耳病抗体阳性率略高于E组，经统计分析差异显著（0.01＜P＜0.05）。

C组与E组相比，C组高致病性猪蓝耳病抗体阳性率略低于E组，经统计分析差异显著（0.01＜P＜0.05）。

D组与E组相比，D组高致病性猪蓝耳病抗体阳性率与E组相同。

各组相比不难看出高致病性猪蓝耳病免疫效果由强到弱的顺序为B组＞E组=D组＞A组。

试验数据整理与分析得到以下结论：1.各组平均免疫抗体效价及群体合格率在一定时期均能达到国家规定的合格标准；2.各组间相较免疫效力及免疫持续期均存有差异；3.通过分析比较采用猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病三种疫苗同时分点注苗组与三种疫苗间隔免疫组的免疫效果最佳，但较之省时省力建议采用猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病三种疫苗同时分点注苗的方法免疫。

4 讨论

4.1 安全性试验

本试验中设计了安全性预实验，旨在降低试验风险与成本。在本试验中各组样本猪均未出现明显免疫副反应，可能与日龄、品种、个体差异、气候环境等因素有关，在以后的实际工作中是否会出现免疫副反应有待进一步考究。

4.2 免疫效力与免疫持续期

相关文献显示[4]猪口蹄疫在免疫后56 d达到峰值，本试验中免疫后63 d达到峰值，这可能与本次试验监测频率高，使峰值期与持续期更准确。

猪口蹄疫与猪瘟同时分点免疫组与三种疫苗间隔免疫组比较，口蹄疫与猪瘟免疫抗体水平都降低，这是否说明口蹄疫与猪瘟同时分点免疫对口蹄疫与猪瘟抗体产生都具有一定的抑制作用，是否相互拮抗还有待进一步研究。

猪口蹄疫与高致病性猪蓝耳病同时分点免疫组与三种疫苗间隔免疫组比较，口蹄疫免疫抗体水平略有降低。而蓝耳病的抗体阳性率明显升高，这是否说明口蹄疫免疫对高致病性猪蓝耳病抗体产生具有促进作用，还有待考究。据相关文献[7-8]，已有部分地区将此种免疫程序运用到生产实践中。

猪瘟与高致病性蓝耳病同时分点免疫组与三种疫苗间隔免疫组比较，猪瘟和蓝耳病抗体水平均略有降低，这是否说明猪瘟与高致病性猪蓝耳病同时分点免疫对猪瘟与蓝耳病抗体产生都具有抑制作用，是否相互拮抗还有待进一步研究。

猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病三种疫苗同时分点免疫组与三种疫苗间隔免疫组相比较，高致病性猪蓝耳病抗体阳性率基本没有变化。猪瘟免疫抗体效价高于三种疫苗间隔免疫组，其微观机理还有待进一步研究。口蹄疫的平均抗体效价虽略低于三种疫苗间隔免疫组，但两组群体合格率与免疫保护期一致。

4.3 免疫程序

通过本次试验可以确定的是，首免后28～35 d期间必须进行一次加强免疫，否则免疫抗体效价及合格率很难达到理想的效果。

4.4 监测方法

本次试验蓝耳病抗体监测阳性率普遍比较低，原因可能在于目前采用的高致病性猪蓝耳病抗体检测ELISA试剂盒只对猪血清中抗蓝耳病毒N蛋白敏感。且不能定性定量的监测高致病性猪蓝耳病免疫抗体，蓝耳病抗体监测方法还有待改进。

4.5 试验方案

相关文献[3，5-9]进行此类试验均采用了高致病性猪蓝耳病灭活苗，本试验中大胆突破采用了高致病性猪蓝耳病活疫苗。试验结果也比较理想。

本次试验由于试验样本量少，致使合格率测算缺乏精准性。不能充分反应群体保护率。由于试验范围的局限性，不能突破地域差异等因素对免疫抗体的影响，建议在局部小范围内做三种疫苗联合免疫的田间应用试验，以便推广应用。

[1]农业部.2010年国家动物疫病监测计划[Z].兽医发[2010]2号.北京：农业部，2010：2-23.

[2]农业部.农业部关于印发《高致病性禽流感防治技术规范》等14种动物疫病防治技术规范的通知[Z].农医发[2007]12号.北京：农业部，2007.

[3]文萍萍，陈代平，李金海，等.猪瘟脾淋苗、猪O型口蹄疫和猪蓝耳病灭活苗两两联合应用的免疫效果观察[J].四川畜牧兽医，2010，37（1）：21-24.

[4]曾存芳，张榜，赵文举，等.猪瘟口蹄疫蓝耳病免疫抗体消长规律试验报告[J].畜禽业，2010（5）：14-15.

[5]王剑峰，杨宗照，古艺.同时注射猪瘟和蓝耳病疫苗对猪瘟抗体效价的影响试验[J].浙江畜牧兽医，2007，32（1）：33-34.

[6]张长龙，严宝英，贾文孝，等.猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗有效免疫试验初探[J].中国畜牧兽医文摘，2009，30（7）：28-29.

[7]华树明.高致病性蓝耳病疫苗与口蹄疫、猪瘟疫苗同时分点注射对口蹄疫、猪瘟抗体效价的影响试验.浙江畜牧兽医，2008，33（4）：6-7.

[8]李敏玲，王俊玲，郑红霞.猪瘟疫苗（兔源）猪O型口蹄疫疫苗、猪蓝耳病疫苗不同组合免疫的效果[J].畜禽业，2009（1）：55-56.

[9]陆国林，陈伟杰，洪建伟，等.高致病性猪蓝耳病、猪瘟、口蹄疫疫苗分点同时接种免疫效果试验 [J].中兽医医药杂志，2009，28（5）：28-30.