2007—2010年河北省猪蓝耳病病毒隐性感染情况调查

韩庆安 ，翟 刚 ，李天艳 ，汝国林 ，董维亚 ，张德亮 ，韦景平 ，轩秋艳

（1.河北省动物疫病预防控制中心，河北 保定 071000；2.青龙满族自治县青龙镇兽医站，河北 青龙 066500；3.河北省迁安市镇政府，河北 迁安 064400；4.唐山市开平区农林畜牧水产局，河北 唐山 063021）

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的以母猪发热、流产，断奶前后仔猪死亡率升高，不同年龄猪呼吸障碍等为临床特征的一种传染病[1-2]。1991年，荷兰学者Terpstra等人在感染猪体内分离到欧洲型PRRSV，命名为Lelystad病毒（LV）[1，3]；同年，美国学者 Benfield 等人分离到美洲型PRRSV，命名为VR-2332[4]。我国学者郭宝清等（1996）首次从国内疑似感染猪群中分离出PRRSV，从而证实本病在国内的存在[4]。我国流行的PRRSV为美洲型毒株，当前又称为经典PRRSV（classical PRRSV，C-PRRSV）。高致病性猪蓝耳病是由高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（highly pathogenic porcine reproductive and respiratory ryndorme virus，HP-PRRSV）引起的猪的一种急性传染病，是PRRSV的变异株，其显著特点是高发病率和高死亡率，仔猪发病率可达100%，死亡率可达50%以上，母猪流产率可达30%以上，也可致育肥猪发病死亡。该病于2006年的6-8月份集中发生于我国的江西、湖南、湖北等南方少数省份发生，由于当时确定不了病因，但所有发病猪只均出现高热症状，故称为“高热病”。 随后该病毒逐渐扩散和蔓延到相临省份以及我国大部分养猪省份和地区。截至2007年7月份，我国农业部通报全国已有26个省、市发生了高致病性猪生殖与呼吸综合征，疫点309个，防控形势相当严峻。该疫情在全国范围内广泛流行，导致生猪大批死亡和淘汰，给养猪生产造成了严重损失[5]。后来经过中国动物疫病预防控制中心证实，猪“高热病”的主要致病病原为Nsp2缺失30个氨基酸的高致病性PRRSV[6]。本研究利用PRRSV鉴别RT-PCR检测方法对2007—2010年采自全省11个地市样品进行检测，旨在了解PRRSV不同毒株在我省猪群中的隐性感染情况，为PRRSV的综合防制提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

检测样本采自全省11个地区272个县级屠宰场（4年分别为40个、65个、87个和80个）商品猪的肺脏或肺门淋巴结，共计2159份（4年分别为108份、383份、958份和710份）。

1.2 主要仪器及试剂

Heraeus台式高速冷冻离心机：美国热电公司生产；Biometra PCR基因扩增仪：英国Whatman公司生产；UVP紫外凝胶成像处理系统：美国UVP公司生产；Tanon EPS100型电泳仪：北京六一仪器厂生产；DNM-9602型酶标分析仪和DNX-9620电脑洗板机由北京普朗新技术有限公司生产。PRV PCR检测试剂盒、PCV-2 PCR检测试剂盒、CSFV RT-PCR检测试剂盒均由北京爱德士元亨生物科技有限公司生产。PRRSV鉴别 RT-PCR检测试剂盒由中国动物卫生与流行病学中心监测室提供。

1.3 方法

对所采集的样品先进行PRRSV病原学检测，然后对检测出的HP-PRRSV和C-PRRSV阳性样品再分别进行CSFV、PRV和PCV-2病原学检测。具体检测方法按检测试剂盒规定的要求进行。

2 结果

2.1 病原学检测结果

PRRSV病原学检测场总体阳性率为38.97%，4年场阳性检出率分别为72.50%、44.62%、28.74%和28.75%（见表1）；样品总阳性率为11.90%，4年样品阳性检出率分别为44.44%、15.93%、8.77%和9.01%。HP-PRRSV病原学检测样品总阳性检出率为9.77%，4年样品阳性检出率分别为40.74%、12.01%、7.31%和7.18%（见表2）；C-PRRSV病原学检测样品总阳性检出率为2.13%，4年样品阳性检出率分别为3.70%、3.92%、1.46%和1.83%（见表3）。

表1 屠宰场PRRSV场阳性率

表2 HP-PRRSV检测样本阳性率

表3 C-PR R SV检测样本阳性率

2.2 多病原混合感染情况

PRRSV同CSFV、PRV和PCV-2混合感染所占的总比率为55.64%（143/257）；HP-PRRSV同其他病原体混合感染所占的总比率为58.76%（124/211），C-PRRSV同其他病原体混合感染所占的总比率为41.30%（19/46）。不同年度多病原混合感染情况见表4。

表4 多病原混合感染情况

3 分析与讨论

从全省11个地区的样本中均检测到PRRSV，且4年样本的场阳性检出率均较高，说明PRRSV在河北省的猪群中普遍存在，污染面积较大。由于不同地区同一年度样本场阳性率差别不大，表明样本的阳性率高低与样本来源地的地理位置、当地的猪只存栏量的多少无明显的相关性。

从PRRSV鉴别检测结果分析，HP-PRRSV对猪群的危害相对较大，C-PRRSV对猪群的危害相对较轻。从样本阳性率四年变化趋势方面分析，HP-PRRSV基本呈逐年下降趋势，且下降趋势明显，尤其是2009年和2010年，阳性率已经低于8%。该结果基本反映了河北省近年来HP-PRRSV的发病情况。河北省HP-PRRS流行始于2006年9月，传播途径是从南向北，从平原向山区逐步扩散，到2007年底，HP-PRRS疫情得到有效的遏制，此后疫情基本稳定，未出现大的疫情发生。C-PRRSV从2006年至2008年对猪群的危害程度虽然略呈逐年上升趋势，但四年的样本阳性率均比较低，且后三年的样本阳性率差别不大。

对4年来检测的PRRSV阳性的样品分别进行CSFV、PRV和PCV-2病原学检测，结果表明多病原混合感染比较普遍。从病原体数量上分析，混合感染多以二重和三重感染为主，没有出现了4重感染现象；从病原体种类上分析，HP-PRRSV多与PRV和PCV-2混合感染为主，与CSFV混合感染现象出现较少，尤其是在2007年。没有检测的HP-PRRSV和CSFV混合感染的样品。根据资料报道，HP-PRRSV与其他病原体混合感染已非常普遍。王连想（2009）等[7]研究结果表明，PRRSV变异株同CSFV、PRV、PCV2混合感染阳性率分别为5.35%、0.89%、15.6%，25个场（群）存在病毒二重和三重混合感染，其中与PCV2混合感染比率较高；鞠厚斌（2010）等[8]、高许雷（2009）等[9]认为混合感染主要以二重感染为主。他们的结论与我们的进行结论相符。范仲鑫（2008）等[10]用RT-PCR的方法对采集湖南的3个市级定点屠宰场50份猪肺门淋巴结进行高致病性猪蓝耳病病毒的检测，结果阳性率为 16%（8/50）；高许雷（2009）等[9]对2008—2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒（HP-PRRSV）RT-PCR检测，结果表明，屠宰场的检出率平均44%；而我们相同年度的检测结果分别为12.01%（46/383）和 8.65%（116/1341），他们的检测结果相对较高。

在调查中我们发现，在同一份样品中不能同时检测到HP-PRRSV和C-PRRSV，这表明HP-PRRSV和C-PRRSV不能同时感染同一头猪。检测结果同时也表明，在河北省猪群中存在HP-PRRSV和C-PRRSV共同感染现象，增添了对PRRS防治的难度，这就要求养殖户在以后控制PRRS时考虑对HP-PRRSV和C-PRRSV进行区别，采取不同的措施应对PRRSV的感染。

4 小结

C-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中一直较低，但其略呈上升的趋势；而HP-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中呈逐年下降趋势，但其污染面积较大，应值得高度重视。

[1]Wensvoort G，Terpstra C，Pol JM，et al.Mystery swine disease in The Netherlands：the isolation of Lelystad virus[J].Vet Q，1991，13（3）：121-130.

[2]姜平，陈溥言，姜志华，等.我国两个不同地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列比较[J].病毒学报，2000，16（3）：70-72.

[3]Albina E.Epidemiology of porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRS）：an overview[J].Vet Microbiol，1997，55（1-4）：309-316.

[4]郭宝清，陈章水，刘文兴，等.从疑似PRRS流产胎儿分离 PRRSV 的研究[J].中国预防兽医学报，1996，2（2）：1-5.

[5]马静云，李浩波，王玲玲，等.高致病性PRRSV的分离及其Nsp2和ORF5基因的序列分析[J].中国兽医科学，2008，38（8）：650-657.

[6]侯丽丽，赵铁柱，遇秀玲，等.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查[J].中国兽医学报，2009，29（6）：667-682.

[7]王连想，马静云，谢青梅，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株与猪瘟病毒等混合感染的调查与分析[J].中国兽医杂志，2009，45（10）：3-5.

[8]鞠厚斌，曹火仁，张维谊，等.近年来上海地区病死猪主要病毒感染状况调查 [J].中国动物传染病学报，2010，18（1）：40-44.

[9]高许雷，吴发兴，朱紫祥，等.我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析[J].动物医学进展，2009，30（11）：32-36.

[10]范仲鑫，刘道新，何世成，等.湖南高致病性猪蓝耳病隐性感染情况调查 [J].中国动物检疫，2008，25（12）：34-36.