全面生化反应和血清学检验在沙门菌临床检验中的应用

丛洪财

(白山市中心医院,吉林 白山 134300)

沙门菌,也叫沙门氏杆菌,为一大类寄生于人和动物肠道内的生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌。人一旦进食了感染沙门菌的食物,4～24min就开始恶心、呕吐,继而出现腹痛、腹泻、发热等,大便呈水样,严重时还会脱水、休克。除实施针对电解质紊乱的治疗外,喝一些生理盐水可防脱水[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年7月—2010年7月我院接收的疑为沙门菌的肠热症患者95例,男30例,女65例,年龄22～48岁,平均34.1岁。

1.2 方法

95例患者分为两组,一组为全面生化反应和血清学检验组,50例;一组为常规检验组,45例。

1.3 全面生化反应和血清学检验

1.3.1 样本采集

根据疾病的类型、病情和病程的不同采取不同的样本。

(1)采集血液或骨髓液:肠热症病人,在病程的第1～2周内采集静脉血,在1～3周内不采集骨髓液。

(2)采集粪便和尿液:肠热症病人在病程的第2周以后;胃肠炎病人在急性期、早期采集新鲜粪便,最好在用药前采集;带菌者可用直肠拭子采集直肠表面粘膜。在病程的第2周,肠热症病人亦可采集中断尿或无菌导尿,经3000 r/min离心沉淀后供检验用。

(3)采集呕吐物或食物等:疑为沙门菌食物中毒的病人,除采集粪便外,还应采集呕吐物和可疑食物样本,新鲜肉类用无菌剪刀采取,于无菌器皿内送检[2]。

1.3.2 设备和材料

天平,均质器或乳钵,温箱(36℃±1℃,42℃),显微镜,灭菌广口瓶(500mL,250mL),灭菌吸管(10mL)灭菌平皿(90mm ×15mm),灭菌小试管(内径3mm,长5cm),灭菌毛细管,橡皮乳头,载玻片,酒精灯,灭菌金属匙或玻璃棒,接种棒和镍铬丝,试架和试管篓。

1.3.3 培养基和试剂

(1)所用培养基和配制:缓冲蛋白胨水(BP):氯化镁孔雀绿(MM)增菌液;四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液;亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液;亚硫酸铋琼脂(BS);胆盐硫乳(DHL)琼脂;HE琼脂;WS琼脂;SS琼脂三糖铁(TSI)琼脂;蛋白胨水、靛基质试剂;尿素琼脂(pH7.2);氰化钾(KCN)培养基;氨基酸脱羧酶试验培养基;糖发酵管;“2.3.25”ONPG培养基;半固体琼脂;丙二酸盐培养基“2.3.20”。

(2)沙门菌因子血清:按照26种用于初步分型,57种用于进一步分型,163种用于详细分型进行选用[3]。

1.3.4 最后鉴定方法

主要依赖全面生化反应和血清学两方面的鉴定。

(1)血清学鉴定:先做A～F多价O血清的凝集(95%以上的沙门菌都属于A～F群),然后以6个O群的因子血清定群(O2凝集为A群;O4凝集为B群;O7凝集为C1亚群;O8凝集C2亚群;O9凝集为D群;O10凝集为E群;O11凝集为F群。再用H因子血清第一相和第二相凝集结果综合决定其所属的血清型。

(2)全面生化反应:①从选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落,分别接种TSI琼脂。在 TSI琼脂内,肠杆菌科属种的反应结果。在TSI琼脂内只有斜面产酸又同时硫化氢阴性的菌株可以排除,其他的反应结果均有沙门菌的可能,但同时也均有不是沙门菌的可能;②在接种TSI琼脂抽时,再接种蛋白胨水(作靛基质试验用)、尿素琼脂(pH7.2)、KCN培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各1管,在(36±1)℃培养18～24h,必要时可延长至48h,并判定结果。

2 结果

如表1所示。

表1 检测结果

3 讨论

从表1可以看出,50例全面生化反应和血清学检验组,检验有效49例,检验无效1例,有效率98.00%。45例常规检验组,检验有效35例,检验无效10例,有效率77.78%。可见,全面生化反应和血清学检验在沙门菌疾病中的应用效果良好。

沙门菌所致疾病:①肠热症(伤寒和副伤寒):由伤寒沙门菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起;②食物中毒(急性胃肠炎):由鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起,有发热、恶心呕吐、水样泻,严重者致脱水、休克、肾衰而死亡(主见于婴儿、老人等),但大多2～3天自愈:③败血症:常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起,高热、寒战、贫血等严重症状,多见于儿童及免疫力低下者。

需要引起我们注意的是:沙门菌是肠道重要的致病菌,我们在临床检测时应特别注意阳性对照菌和分离菌可能对操作环境的污染。凡是用过的所有增菌、分离、生化试验、血清凝集试验的器物以及镜检后的玻片等,均应灭菌后方能洗涤。

[1]康艳蓉,袁文英,林青,等.两种培养基的沙门菌检出率比较[J].上海预防医学,2010(07):385-386.

[2]王小红,龚成林.一起乙型副伤寒沙门菌引起的食物中毒[J].中国卫生检验杂志,2010(06):15-36.

[3]侯冬莲,石谊联,苏娟.阿维菌素中毒2例报告[J].中国实用医药,2010(16):195-196.