小多孢菌菌丝体中化学成分的研究

杨晓军

(延安大学化学与化工学院，陕西 延安 716000)

小多孢菌(Micropolysporasp.)是一种放线菌。针对放线菌细胞内外次生代谢产物通常不同这一特点[1]，作者在研究小多孢菌发酵液化学成分的基础上[2]，对其菌丝体甲醇提取部分化学成分进行了研究，从中分离到5个单体化合物，并对其进行了鉴定。

1 实验

1.1 材料

小多孢菌，自行从陕西省靖边县沙漠中分离得到。

1.2 提取与分离

将发酵96 h的发酵液以3000 r·min-1离心，菌丝体部分用蒸馏水洗涤后，于50℃烘箱中烘干。取4.5 kg干菌丝体分别用丙酮和甲醇超声提取，将丙酮和甲醇提取液减压浓缩，其中甲醇提取浸膏15.5 g，将其用200 mL水溶解，溶解部分用1.5 L正丁醇分3次萃取。合并正丁醇萃取液，蒸干得7.2 g粗提物 。上硅胶柱，用氯仿∶甲醇=95∶5洗脱并分段收集得样品A 54 mg、B 68 mg、C 32 mg。样品A、B和C继续上Sephadex LH-20凝胶柱，用甲醇∶水(1∶1)洗脱，各流分以TLC检测，相同组分合并，从A中分离得到化合物Ⅰ(10 mg)、化合物Ⅱ(13 mg)；从B中分离得到化合物Ⅲ(9 mg)、化合物Ⅳ(7 mg)；从C中分离得到化合物Ⅴ(6 mg)。

2 结果与讨论

化合物Ⅰ:白色粉末，m.p.337～ 339℃。ESI(+)-MS：(m/z) 285 [M+H]+；从元素分析得知碳、氢的含量分别为67.52%、4.31%，确定化合物的分子式为C16H12O5，不饱和度为11。IR(KBr),νmax,cm-1：3406(酚羟基)，2832、1615(α，β-不饱和羰基)，1577、1556、1520(苯环骨架伸缩振动)，1273(芳香醚C-O-C伸缩振动)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ, ppm：8.29(1H，s，H-2)，7.43 (1H，s，H-5)，7.38 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.95 (1H，s，H-8)，6.81(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，3.88 (3H，s，-OCH3)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ, ppm：174.2(C-4)，157.09 (C-4′)，152.8 (C-7)，152-4 (C-8a)，151.6 (C-2)，146.8 (C-6)，129.9 (C-2′，6′)，122.8(C-3)，122.7 (C-1′)，116.1 (C-4a)，114.8 (C-3′，5′)，104.69 (C-5)，102.7 (C-8)，55.7 (-OCH3)。以上数据与文献[3～5]基本一致，故鉴定化合物Ⅰ为4′，7-二羟基-6-甲氧基异黄酮。

化合物Ⅱ：白色粉末状固体，m.p.121～123℃。ESI(+)-MS：(m/z) 239 [M+H]+，261[M+Na]+；从元素分析得知碳、氢的含量分别为60.46%和5.62%；确定化合物的分子式为C12H14O5。IR (KBr)，νmax，cm-1：3209～2546(-OH)，1684(C=O)，1608、1505、1449 (苯环骨架伸缩振动)，1286、1125(β-C-H)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：12.16 (1H，brs，COOH)，7.63 (1H，d，J=16.2 Hz，H-7)，6.37 (1H，d，J=16.2 Hz，H-8)，6.82 (2H，s，H-2，6)，3.92 (6H，s，3，5-OCH3)，3.90 (3H，s，4-OCH3)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：169.6(COOH)，153.2 (C-3，5)，145.3(C-7)，139.8(C-4)，130.4(C-1)，117.7(C-8)，105.4(C-2，6)，60.2(4-OCH3)，55.5(3，5-OCH3)。以上数据与文献[6，7]基本一致，故鉴定化合物Ⅱ为3，4，5-三甲氧基肉桂酸。

化合物Ⅲ：无色针状晶体，m.p.198～200℃。ESI(+)-MS：(m/z) 155 [M+H]+，331 [2M+Na]+；从元素分析得知碳、氢的含量分别为54.62%和3.87%；确定化合物的分子式为C7H6O4。IR (KBr)，νmax，cm-1：3485～2492(-COOH)，1672(C=O)，1610、1528、1451 (苯环骨架伸缩振动)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：12.24 (1H，brs，COOH)，7.35 (1H，s，H-3)，6.64 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.27 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：167.3 (COOH)，151.3(C-4)，145.4(C-2)，122.2(C-6)，121.7(C-5)，116.5(C-1)，115.0(C-3)。以上数据与文献[8]基本一致，故鉴定化合物Ⅲ为2，4-二羟基苯甲酸。

化合物Ⅳ：无色针状晶体，m.p.204～206℃。ESI(+)-MS：(m/z)155[M+H]+，177[M+Na]+；从元素分析得知碳、氢的含量分别为54.58%和3.90%；确定化合物的分子式为C7H6O4。IR (KBr)，νmax，cm-1：3395～2467(-COOH)，1678(C=O)，1605、1532(苯环骨架伸缩振动)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6),δ，ppm：7.44(1H，d，J=1.5Hz，H-2)，7.42 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6)，6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-5) ；13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：170.2 (COOH)，151.4(C-4)，146.1(C-3)，123.9(C-1)，123.1(C-6)，117.6(C-2)，115.8 (C-5)。以上数据与文献[9]基本 一致，故鉴定化合物Ⅳ为3，4-二羟基苯甲酸。

化合物Ⅴ：无色针状晶体，m.p.165～167℃，味甜，易溶于水。IR (KBr)，νmax，cm-1：3285(-OH)，1419、1279、1080、1016(C-O) 。将该化合物与甘露醇标准品点于同一硅胶G板上，用醋酸乙酯-吡啶-水(7∶2∶1)展开，取出晾干后用浓硫酸显色，样品与标准品Rf值完全一致。且样品与标准品混合物熔点不降低。故鉴定化合物Ⅴ为甘露醇。

3 结论

通过对小多孢菌菌丝体的甲醇提取部分进行化学成分研究，从中分离到5个化合物，经波谱数据分析，鉴定其结构为4′，7-二羟基-6-甲氧基异黄酮、3，4，5-三甲氧基肉桂酸、2，4-二羟基苯甲酸、3，4-二羟基苯甲酸、甘露醇，5个化合物均为首次从该菌中分离得到。

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