HPLC-ELSD法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量

李艳荣，李 强，洪 霞，潘海峰

（1.承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.宽城县医院）

HPLC-ELSD法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量

李艳荣1，李 强2，洪 霞1，潘海峰1

（1.承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.宽城县医院）

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD）测定穿山龙中薯蓣皂苷元含量的方法。方法:使用Agilent Eclipse C18(150×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-水(95：5），柱温：40℃，流速1.0ml/min；蒸发光检测器以N2为载气，载气压力3.5bar，漂移管温度为70℃。结果:薯蓣皂苷元在2.04-0.255mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9996），方法重复性好，平均回收率为98.9%(RSD=1.4%）。结论:该方专属性强、灵敏、准确，可作为穿山龙的质量控制方法。

穿山龙；薯蓣皂苷元；高效液相色谱法；蒸发光检测器

穿山龙是薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Mak)的根茎，具有活血舒筋、消食利水、祛痰截疟之功效，用于治疗风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤等[1]。民间多用穿山龙浸酒或煎服，治疗筋骨麻木和腰酸腰痛。近年的研究证明，穿山龙有调节免疫、改善心血管功能、镇咳、祛痰、平喘等多种药理作用，治疗类风湿性关节炎、冠心病心绞痛、慢性气管炎、慢性布鲁菌病、脂肪瘤等，疗效较好[2]。穿山龙中的薯蓣皂苷元是合成甾体激素的主要原料之一，药用价值日益受到人们的重视[3]。薯蓣皂苷元为街烯醇，无共扼结构，只在低波长处有紫外吸收，因此采用常用的紫外检测器定量灵敏度较低。本研究应用蒸发光散射检测器测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，灵敏、专属性强，明显提高了含量测定的准确度。

1 仪器与试药

美国Agilent 1200型液相色谱仪，Agilent G 4218A蒸发光散射检测器，四元泵，自动进样器，Agilent Chemstation工作站；美国梅特勒-托利多AG245电子分析天平。穿山龙药材(产于承德地区，见表1），由承德医学院植化教研室赵春颖副研究员鉴定；薯蓣皂苷元对照品(批号：1539-200001），中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯），美国Fisher试剂公司；纯净水，娃哈哈；其余试剂均为分析纯。

表1 穿山龙药材样品来源

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱，Agilent Eclipse C18柱(150mm× 4.6mm，5μm）；柱温：40℃；流动相：甲醇-水(95：5）；ELSD漂移管温度：70℃；以N2做载气，载气压力：3.5bar；Gain7，Filter值：1；进样量：10μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备：精密称定薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成2.04mg/ml的溶液，作为对照品储备液。取对照品储备液稀释成1.02mg/ml的对照品溶液。2

.2.2 供试品溶液的制备：精密称定穿山龙药粉1g，置250ml圆底烧瓶中，加入含3mol/L盐酸的60%甲醇水溶液和石油醚(60-90℃）各50ml于沸水浴中加热回流提取6h。反应结束后过滤，静置分层，冷却后，取上层石油醚相，下层再用石油醚萃取3次(每次50ml）合并萃取液，浓缩至干，用甲醇溶解并定容至5ml，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性范围考察：精密吸取薯蓣皂苷元对照品储备液(2.04mg/ml），分别配制成含薯蓣皂苷元2.04、

1.52、1.02、0.51、0.255mg/ml的对照品溶液。各吸取10μl注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样浓度(mg/ ml)的自然对数(X)为横坐标，峰面积的自然对数(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程为：Y=1.162X+3.393（r=0.9996）。表明薯蓣皂苷元在2.04-0.255mg/ml范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度试验：取薯蓣皂苷元对照品溶液，重复进样5次，记录薯蓣皂苷元的峰面积，得RSD为1.2%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验：取同一穿山龙供试品溶液(滦平县），分别于制样0、2、4、6、8、12h进样，记录薯蓣皂苷元的峰面积，得RSD为1.4%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.3.4 重复性试验：取同一穿山龙样品细粉(滦平县）5份，按2.2.2的方法制备供试品溶液，测定薯蓣皂苷元的含量，得RSD为1.8%，表明实验重复性良好。

2.3.5 回收率试验：取同批穿山龙药材(滦平县）6份，每份约0.5g，精密称定，分别加入薯蓣皂苷元对照品5.1mg，按2.2.2的方法制备供试品溶液，测定薯蓣皂苷元的含量，计算样品回收率，结果见表2，表明回收率结果符合分析方法的要求。

2.4 样品含量测定 按2.1色谱条件，分别测定不同产地穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，进样量10μl，结果见表3。

表3 不同产地穿山龙中薯蓣皂苷元含量测定结果(mg/g）

3 讨论

本研究检测承德市不同地区穿山龙药材中薯蓣皂苷元的含量，结果发现不同地区穿山龙中薯蓣皂苷元的含量虽有一定差异，但差别不大，表明承德市穿山龙药材的质量比较稳定，在临床用药上有较好的可控性。

以往文献[4-5]多采用高效液相色谱-紫外检测器测定薯蓣皂苷元的含量，但薯蓣皂苷元属于紫外末端吸收，多选择203-210nm的紫外末端作为检测波长，在紫外末端检测时流动相带来的干扰会使检测的灵敏度降低。本研究选用蒸发光散射检测器作为检测手段，对穿山龙中薯蓣皂苷元进行分析，克服了在紫外末端检测时流动相带来的干扰，所得图谱基线平直，灵敏度高，与杂质有很好的分离度，提高了方法的专属性，测定结果更为准确。

[1]国家药典委员会.中国药典I部[S].北京：化学工业出版社，2005.188-189.

[2]丁晓林，李卿.中药穿山龙的研究进展[J].重庆中草药研究，2003，48(2)：55-57.

[3]陈延镛.甾体皂甙元的生产现状[J].医药工业，1985，1(1)：32-37.

[4]韩菊，魏福祥，高晓霞，等.反相高效液相色谱法测定穿山龙中的薯蓣皂甙元[J].分析试验室，2009，28(4)：63-66.

[5]杜庆鹏，田金改，魄秀荣.高效液相色谱法测定穿山龙中薯菠皂昔元的含量[J].药物分析杂志，2006，26(1)：14-16.

DETERMINATION OF DIOSGENIN CONTENT IN DIOSCOREA NIPPONICA MAKINO BY HPLC-ELSD

LI Yan-rong, LI Qiang, HONG Xia, et al
(Institude of Chinese Materia, Chengde Medical College, Hebei Chengde, 067000)

Objective:To establish a testing method for determination of diosgenin content in Dioscorea nipponica Makino by PHLC-ELSD.Methods:Agilent Eclipse C18(150mm×4.6mm, 5μm)column and evaporated light scattering detector (N2as carrier gas, pressure: 3.5bar, drift tube temperature: 70℃) were used in this study. Mobile phase was methanol-water (95:5) at 40℃, flow rate was 1.0ml/min.Results:Diosgenin had better linear rate at 2.04-0.255mg/ ml (r=0.9996), the average recovery was 98.9% (RSD=1.4%); and this PHLC-ELSD method had better repeatability.Conclusions:This method for detecting diosgenin content in Dioscorea nipponica Makino by PHLC-ELSD is specific, sensitive and accurate, can be acted as effective method for quality control of Dioscorea nipponica Makino.

Dioscorea nipponica Makino; Diosgenin; HPLC; Evaporated light scattering detector

R917

A

1004-6879(2011）02-0126-03

2010-11-29）