硫酸软骨素片含盐酸氨基葡萄糖量的测定

孙华云，张明晶，姜成忠

(哈药集团制药六厂，哈尔滨150056)

盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片由盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素组成，用于关节炎的治疗［1－3］.本文采用HPLC建立了盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片中含盐酸氨基葡萄糖量测定的方法［4－5］.

1 仪器与试药

Waters 515高效液相色谱仪、UV2487检测器;盐酸氨基葡萄糖(中国药品生物制品检定所，140649－200702);盐酸氨基葡萄糖硫酸软骨素片(自制);甲醇色谱纯;其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Hypersil C18，4.6 mm×150 mm);以醋酸钠(6.8 g醋酸钠溶解于700 mL水中，用稀醋酸调节pH值至5.9加水定容至1 000 mL)－甲醇(80∶20)为流动相;检测波长为340 nm;流速为1.0 mL/ min;β－异构体的相对保留时间为1.0，α－异构体的相对保留时间1.5.

2.2 测定法

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸氨基葡萄糖25 mg)，置25 mL量瓶中，加水适量超声溶解并稀释至刻度，摇匀，离心过滤，取续滤液作为供试品溶液;另取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，用水制成每1 mL中含1 mg的对照品溶液.移取100 μL的衍生剂(称取50 mg邻苯二甲醛溶解在1.25 mL无水甲醇中，加入3－巯基丙酸50 μL和0.1mol/L的硼酸缓冲液11.2 mL，混匀，密封放置30 min后使用.

每两天放入10 μL的3－巯基丙酸，密封避光处贮存，在室温条件下两周内可以使用.)和100 μL的标准溶液或供试品溶液，置于含有400 μL 0.1 mol/L的硼酸缓冲液(取四硼酸钠3.815 g溶解于80 mL水中，调节pH值至9.5，转移至100 mL容量瓶，加水定容至刻度，摇匀.)的试管中，混匀，衍生1 min后注入色谱仪10 μL，记录色谱图，按外标法以峰面积计算.

2.3 线性关系考察

取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，精密称定，以水逐步稀释，制成一系列供试品溶液，按含量测定方法进行衍生后，分别进样10 μL，记录色谱图，结果见表1.

表1 盐酸氨基葡萄糖线性关系试验结果

结果表明:盐酸氨基葡萄糖在100～2 000 μg/ mL的质量浓度范围内，质量浓度与峰面积呈良好的线性关系.线性方程为:y=ax+b(a=1.005 898E－003，b=－9.179 708E－003，r=0.999 9))式中y为峰面积，x为样品质量浓度(μg/mL)，r为相关系数.

2.4 回收率试验

分别称取盐酸氨基葡萄糖阴性样品、盐酸氨基葡萄糖对照品9份(相当于分别含两主成分80%、100%、120%3个质量浓度水平各3份)，置100 mL量瓶中，加水超声使溶解加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液进行衍生后，进样10 μL，结果见表2.

表2 盐酸氨基葡萄糖测定回收率试验结果

结果表明:本品回收率偏高，是由于硫酸软骨素原料中含有少量盐酸氨基葡萄糖所引起的.

2.5 溶液稳定性试验

精密称取样品适量，按测定前处理方法制备供试液，室温放置，分别于0、0.5、1、3、4、6 h，进样10 μL，记录峰面积，结果见表3.

表3 盐酸氨基葡萄糖稳定性试验结果

结果表明:供试品溶液室温放置6 h，盐酸氨基葡萄糖峰面积无明显变化，证明样品溶液稳定性良好.

2.6 重复性试验

精密称取样品适量，按测定前处理方法平行配制6份.依法测定，按外标法计算其标示质量分数，结果见表4.结果表明:本法的重复性良好.

表4 盐酸氨基葡萄糖重复性试验结果

3 结语

对于硫酸软骨素片中含盐酸氨基葡萄糖量测定，文献多采用比色法及咔唑法，上述方法专属性不强，且操作繁琐费时.本文建立的衍生化反相高效液相法专属性强、操作简便、快速、准确、可作为硫酸软骨素片中含盐酸氨基葡萄糖量测定方法.

［1］ 陈德生，张志刚，曹 靖，等.盐酸氨基葡萄糖对兔膝骨性关节炎的影响［J］.中国修复重建外科杂志，2010，24(3): 287－291.

［2］ 王文锋.口服盐酸氨基葡萄糖胶囊加中药外敷治疗膝关节骨性关节炎125例［J］.光明中医，2010，25(1):45－46.

［3］ 蔺 超，黄朝梁，常 蕾，等.盐酸氨基葡萄糖及其与甲氨蝶呤联用对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用［J］.中国生物制品学杂志，2009，22(2):168－173.

［4］ 万慧芳，万 欢，汪华杰.盐酸氨基葡萄糖反相高效液相色谱法含量测定方法研究［J］.南昌大学学报:医学版，2010，50(5):96－99.

［5］ 狄平平，劳苑子，赵立平，等.HPLC法测定复方氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖和硫酸软骨素含量［J］.中国药事，2010，24(3):283－286.