瓜蒌薤白汤对大鼠肺纤维化形成阶段造模后(14d～28d)下丘脑、海马DA、NE、5-HT的干预作用*

宋建平，谢忠礼，李 伟，李瑞琴，张 瑞，杨美凤

肺间质纤维化简称肺纤维化，是多种弥漫性肺间质疾病的不良病理转归，目前西医治疗常用糖皮质激素等，但仅对部分病人有效且极少达到长期缓解;另一方面应用以上药物可引起代谢紊乱、免疫抑制、继发感染等不良反应。近年来，中药治疗肺纤维化报道较多，已被列入中华医学会肺纤维化防治方案中。但在以往运用肺纤维化疾病模型进行中药防治实验研究时，很少对疾病模型不同病变阶段的中医病机进行探讨，往往从始至终使用相同的治法和方药，未能注意体现“辨证论治”这一中医特色;另一方面，从胶原代谢、细胞因子等方面研究中药作用机制较多，而从神经、内分泌与免疫系统整体调节方面研究中药作用机制较少。

我们在前期研究工作中发现，瓜蒌薤白汤能减轻大鼠肺纤维化模型不同阶段(造模后7d、28d)肺泡炎及纤维化的程度，并能影响肺组织 NE、DA、5-HT含量［1-2］。本课题通过观察瓜蒌薤白汤对肺纤维化模型形成阶段(造模后14d～28d)下丘脑、海马NE、DA、5-HT的影响，了解肺纤维化形成阶段神经系统功能变化及瓜蒌薤白汤对其的干预作用，为肺纤维化中药防治研究提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 普通级健康雌性Wistar大鼠，体重200g±20g，由河南省动物实验中心提供，饲养于河南中医学院动物实验中心，室温22℃ ±2℃，相对湿度60%，常规饲料喂养，饮水量不限。

1.1.2 主要实验药品 平阳霉素:哈尔滨博莱制药有限公司产品(批号07010203)，规格:8mg/支，按3mg/kg体重给药，使用时用生理盐水配制成3mg/ml，按0.1ml/100g气管内给药。瓜蒌薤白汤颗粒剂:三九医药公司产品，栝楼1g/袋(相当于饮片10g，批号 0612051);薤白 1g/袋(相当于饮片10g，批号0502151)，均购于河南中医学院三附院。栝楼与薤白比例为2∶1，参照动物与人体的体表面积折算系数，计算动物每日用药量为栝楼2.04g/kg体重，薤白1.02g/kg体重，用蒸馏水配制药液后按1.5ml/100g体重灌胃给药。

泼尼松片:浙江仙琚制药股份有限公司，批号070608。用药量为4mg/kg体重，用蒸馏水配制成0.267mg/ml药液，按 1.5ml/100g 灌胃给药。

多巴胺标准品:阿法埃莎(天津)化学试剂有限公司(批号10097602)。5-羟色胺标准品:阿法埃莎(天津)化学试剂有限公司(批号10119987)。去甲肾上腺素标准品:阿法埃莎(天津)化学试剂有限公司(批号10131292)。正丁醇:天津化学试剂一厂(批号20070406)。浓盐酸:洛阳昊华化学试剂厂(批号20060208)。正庚烷:天津化学试剂一厂(批号20050828)。邻苯二甲醛:天津化学试剂一厂(批号20060403)。

1.1.3 主要实验仪器 F-4500荧光分光光度计，日立(HITACHI)。752N型紫外可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品。

2 方法

2.1 动物分组

实验大鼠正常饲养3d后，按体重随机分为正常组、模型组、瓜蒌薤白汤组、泼尼松西药对照组，每组动物12只。

2.2 造模与用药

2.2.1 造模 本实验除正常组正常饲养不作任何处理外，模型组及用药组按文献方法造模，以水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取仰卧固定位，常规消毒，行颈正中切口，钝型分离暴露气管，经气管软骨环间隙向心端穿刺注入平阳霉素生理盐水溶液0.1ml/100g(平阳霉素3mg/kg体重)，立即将动物直立并行旋转，使药液在肺内分布充分、均匀，缝合皮肤，待动物自然清醒后置笼内常规饲养。

2.2.2 用药 从造模后第14天开始，用药组分别灌胃药液1.5ml/100g体重，模型组灌入等量蒸馏水。每天给药1次，1周后复查动物体重调整给药量，各组于造模后第28天处死。

2.3 下丘脑和海马NE、DA、5-HT含量测定

实验结束时快速断头取全脑，在经冰冻处理的玻片上分离出下丘脑和海马，置于聚丙烯管中于-80℃保存直至测定，采用荧光分光光度法检测。操作程序见文献［3］。

2.4 统计学处理

数据采用 SPSS 13.0统计软件包处理，双侧检验，取α=0.05，对服从正态分布的计量资料数据以(珋x±s)表示，组间差异性判断采用单因素方差分析，方差齐时用LSD法，方差不齐时用Dunnett T3检验。

3 结果

3.1 下丘脑 NE、DA、5-HT 比较

表1显示，各组下丘脑NE值由大到小为:泼尼松组＞模型组＞瓜蒌薤白汤组 ＞正常组，模型组与正常组、瓜蒌薤白汤组差异有统计学意义(P＜0.05);DA值由大到小为:模型组＞泼尼松组＞瓜蒌薤白汤组＞正常组，模型组与正常组及各用药组差异有统计学意义(P＜0.05);5-HT值由大到小为:模型组＞瓜蒌薤白汤组＞正常组＞泼尼松组，模型组与正常组及各用药组差异有统计学意义(P＜0.05);瓜蒌薤白汤组与泼尼松组上述指标的差异均有统计学意义(P＜0.05)。

表1 下丘脑NE、DA、5-HT比较(珋x±s)

3.2 海马 NE、DA、5-HT 比较

表2显示，各组海马NE值由大到小为:泼尼松组＞模型组＞正常组 ＞瓜蒌薤白汤组，模型组与各用药组差异有统计学意义(P＜0.05);DA值由大到小为:模型组＞正常组＞泼尼松组＞瓜蒌薤白汤组，模型组与各用药组差异有统计学意义(P＜0.05);5-HT值由大到小为:模型组＞瓜蒌薤白汤组＞泼尼松组＞正常组，模型组与正常组及各用药组差异有统计学意义(P＜0.05);瓜蒌薤白汤组与泼尼松组上述指标的差异均有统计学意义(P＜0.05)。

表2 海马NE、DA、5-HT比较(珋x±s)

4 讨论

现代医学认为，神经系统、内分泌系统与免疫系统互相调控，形成了一个复杂的神经-内分泌-免疫网络。在许多疾病过程中存在神经内分泌免疫网络功能的紊乱，研究神经、内分泌、免疫系统信息传递物质在疾病过程中的变化和相互影响具有重要意义。

下丘脑是皮质下内脏活动中枢，调节交感神经和副交感神经以维持机体适宜的内环境，是中枢神经系统中能使机体内环境平衡的最重要部位。下丘脑不仅是调节内分泌系统的重要中枢，对外周的单胺能神经系统也具有调节作用，是执行神经内分泌免疫调节的高级中枢。海马是边缘系统的重要结构，对海马下神经元具有调节作用。下丘脑和边缘系统作为神经内分泌和自主神经系统的调控中心，组成神经免疫调节的重要解剖基础。NE、DA和5-HT是参与神经、内分泌与免疫系统调节的重要物质，以往对 DA、NE、5-HT与神经、精神系统生理、病理关系的研究较多，近年来人们开始关注上述物质与其他系统生理、病理关系的研究。如有人研究发现，神经系统在肝纤维化的发生与发展过程中发挥重要作用，NE能促进肝纤维化的发生发展［4］。

本研究发现，模型组下丘脑NE、DA和5-HT含量均高于正常组(P＜0.05)，提示下丘脑去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经活动在肺纤维化形成阶段可能发生了变化;瓜蒌薤白汤组 NE、DA、5-HT均明显低于模型组，提示瓜蒌薤白汤可能影响肺纤维化形成阶段去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经在下丘脑的活动变化;瓜蒌薤白汤组NE、DA明显低于泼尼松组，而 5-HT高于泼尼松组，泼尼松组DA、5-HT低于模型组，NE高于模型组但差异无统计学意义，提示瓜蒌薤白汤与泼尼松对肺纤维化形成阶段，去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经在下丘脑的活动变化影响不完全相同。瓜蒌薤白汤减轻肺纤维化形成阶段肺部病理改变的作用机制可能与调节下丘脑去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经活动有关。

模型组海马组织中NE、DA的含量与正常组差异无统计学意义，5-HT明显高于正常组，提示在肺纤维化形成阶段，去甲肾上腺素和多巴胺能神经在海马的活动尚无明显变化，而5-HT能神经活动发生了明显变化;瓜蒌薤白汤组NE、DA和5-HT含量均低于模型组，其中NE与DA含量并低于正常组(P＜0.05)，提示瓜蒌薤白汤对模型海马去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经活动影响较大;瓜蒌薤白汤组NE、DA低于泼尼松组而 5-HT高于泼尼松组，泼尼松组DA、5-HT低于模型组而 NE高于模型组;提示瓜蒌薤白汤与泼尼松对肺纤维化形成阶段去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经在海马的活动变化影响不完全相同。瓜蒌薤白汤减轻肺纤维化模型形成阶段肺部病理改变的作用机制可能与调节海马5-HT能神经活动有关。

上述研究还表明，模型组下丘脑 NE、DA和5-HT含量均高于正常组而海马组织中只有5-HT高于正常组，提示肺纤维化形成阶段下丘脑与海马多巴胺能神经活动变化可能不同;瓜蒌薤白汤组与泼尼松组各组下丘脑与海马组织中 NE、DA、5-HT含量变化趋势基本一致，提示瓜蒌薤白汤与泼尼松各自对肺纤维化形成阶段下丘脑与海马去甲肾上腺素、多巴胺和5-羟色胺能神经活动变化的影响基本一致。

神经组织和各神经系统之间以及神经、内分泌和免疫系统之间存在着复杂的联系及各种相互调控作用。在肺纤维化病变过程中神经、内分泌和免疫系统的变化目前报道较少。我们的实验结果提示，参与神经、内分泌与免疫系统调节的 NE、DA、5-HT等物质在肺纤维化形成阶段发生了变化，但在肺纤维化的形成过程中神经、内分泌和免疫系统之间的相互调节作用和变化以及瓜蒌薤白汤对其的影响及意义有待于进一步研究。

辨证论治是中医特色。近年来，有关中医“证”的客观本质研究取得不少成果，如杨勇等发现热证时交感神经兴奋，肾上腺皮质激素释放增多，虚寒证脑、尿内5-HT偏高，同时肺、胃、肾5-HT含量也偏高，各脏的 NE含量变化不大［5］。我们以往的实验表明，虚寒证模型小鼠脑组织中NE、DA含量降低，热盛胃出血模型组血清 NE、DA、5-HT 升高［6、7］。谢辉等认为，DA这一神经递质在脑内代谢不足导致代谢产物堆积、内环境紊乱，与中医痰证本质有一定的关系［8］。栝楼、薤白是中医经典《金匮要略》治疗胸痹的主要药物，《金匮要略》所论胸痹病机主要为阳虚阴盛、胸阳痹阻，栝楼、薤白宽胸祛痰、通阳散结，用于痰痹胸阳之证。本研究结果提示，肺纤维化形成阶段下丘脑NE、DA、5-HT含量和海马组织5-HT含量发生了变化，瓜蒌薤白汤能影响这些物质的变化。肺纤维化模型的中医证型归属及NE、DA、5-HT变化与中医“证”的关系值得进一步研究。

［1］ 宋建平，李瑞琴，李伟，等.《金匮》不同方药对肺纤维化模型早期阶段的影响(1)［J］.中华中医药杂志，2006，(11):692-694.

［2］ 宋建平，刘方州，潘梦菲，等.栝蒌薤白汤对肺纤维化大鼠肺组织NE、DA、5-HT含量及 BALF中细胞分类计数的影响［J］.北京中医药大学学报，2003，(6):36-38.

［3］ 陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993:207-208.

［4］ 张芳杰，晏维，高啸，等.肝炎平对肝纤维化肝组织中去甲肾上腺素和多巴胺的影响［J］.中西医结合肝病杂志，2006，(2):84-86.

［5］ 梁月华，李薪萍，任 红.寒证热证时中枢、内脏、尿内儿茶酚胺及 5-羟色胺的变化［J］.中医杂志，1991，(12):38-40.

［6］ 宋建平，孙红光，崔姗姗，等.柏叶汤、泻心汤对脾胃虚寒胃出血小鼠脑组织中去甲肾上腺素及多巴胺含量的影响［J］.中医杂志，1998，(10):624.

［7］ 宋建平，等.泻心汤、柏叶汤对热盛胃出血模型血清 NE、DA及5-HT 的影响［J］.中国中医药科技，1998，(3):159.

［8］ 谢 辉，贺又舜.温胆汤及其配伍对大鼠纹状体DA代谢的影响［J］.湖南中医药导报，2004，10(5):70.