土家族药独蒜兰的化学成分研究

刘新桥，袁桥玉，邵群梅

(1中南民族大学药学院，武汉430074;2武汉职业技术学院生物工程学院，武汉430074;3武汉生物化学制药有限公司，武汉430223)

独蒜兰Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe为兰科植物独蒜兰的干燥假鳞茎(又名怀抱子、鸡心七)，为常用土家药.土家医认为其辛、甘、凉，止血，用于肺热咳血、支气管炎、鼻出血(碾末吹鼻)、风湿疼痛、咳嗽，外用治外伤出血、无名肿毒等［1］.独蒜兰也是中药山慈菇来源之一，药典记载其性甘、微辛，凉，具有清热解毒、化痰散结的功效，主要用于痈肿疔毒、瘰疬痰核，淋巴结结核，蛇虫咬伤等症［2］.20世纪90年代期间对其所含化学成分有过研究，主要以二苯乙烯类成分为主［3，4］.为寻找其抗肿瘤活性成分，采用MTT法，跟踪发现其乙酸乙酯可溶部位具有显著的抗肿瘤活性.基于此，作者对其化学成分进行了系统研究，本实验中利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20、Pre-HPLC等方法从乙酸乙酯部位中分离得到的了6个化合物并利用1HNMR、13C-NMR等波谱技术鉴定了化学结构.

1 仪器、药材及试剂

VARIAN INOVA 500MHz核磁共振波谱仪;制备液相色谱(日本丰光公司，Pu-1580 intelligent HPLC Pump;RI-1530 intelligent RIdetector);柱色谱硅胶和薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂);Sephadex LH-20(Pharmacia);独蒜兰Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe于2005年8月购自河北安国美威中药材有限公司，经天津大学药物科学与技术学院高文远教授鉴定为独蒜兰Pleione bulbocodioides(Franch.)Rolfe的干燥假鳞茎.

2 提取与分离

取独蒜兰的干燥假鳞茎35 kg，粉碎，用体积分数95% 和60%的乙醇分别回流提取2次，3 h/次，合并滤液，减压回收得乙醇浸膏，加入适量水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇进行萃取，得石油醚萃取物350 g，乙酸乙酯萃取物500 g，正丁醇萃取物1.5 kg.取乙酸乙酯提取物500 g，加硅胶适量拌样，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，根据薄层色谱分析，合并组分相同的流分，得到fr1～10，其中fr2、fr4、fr5、fr7再经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20、ODS-HPLC反复纯化，得到了化合物1(15 mg)、化合物2(10 mg)、化合物3(40 mg)、化合物4(12mg)、化合物5(8 mg)、化合物6(7 mg).

3 结构鉴定

化合物1:淡黄色油状物，ESI-MS显示分子离子峰 (negative mode) ［M-H］－m/z363.2，1H-NMR(CDCl3，500 MHz): δ7.17(1H，t，J=8.0 Hz，H-5＇)，6.96(2H，d，J=8.5 Hz，H-2″，H-6″)，6.73(1H，dd，J=8.0 Hz，J=2.5 Hz，H-4＇)，6.69(1H，overlap，H-6＇)，6.68(2H，d，J=8.5 Hz，H-3″，H-5″)，6.61(1H，br.s，H-2＇)，6.34(1H，d，J=2.5 Hz，H-4)，6.30(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，3.91(2H，s，― CH2―)，3.77(3H，s，3 ―OCH3)，3.75(3H，s，3＇― OCH3)，2.78(2H，m，―CH2― CH2―)，2.65(2H，m，― CH2― CH2―);13C-NMR(CDCl3，125 MHz) δ159.6(C-3)，159.0(C-3＇)154.7(C-5)，153.3(C-4″)，143.5(C-1＇)，142.7(C-1)，133.8(C-1″)，129.3(C-5＇)，129.1(C-2″，C-6″)，120.8(C-2)，119.7(C-6＇)，115.0(C-3″，C-5″)，114.1(C-2＇)，111.3(C-4＇)，108.1(C-6)，97.0(C-4)，55.7(3 ― OCH3)，55.2(3'― OCH3)，37.3(― CH2― CH2―)，35.1(― CH2― CH2―)，29.8(― CH2―);以上数据与文献［3］报道的bulbocol数据基本一致，确定化合物1为bulbocol，其化学名称为3，3'-dimethoxy-5-hydroxy-2-(p-hydroxybenzyl)bibenzyl.

化合物2:淡黄色油状物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.99(1H，d，J=9.0 Hz，H-5)，6.61(2H，m，H-6，H-8)，6.38(1H，d，J=2.5 Hz，H-3)，6.29(1H，d，J=2.5 Hz，H-I)，3.80(3H，s，4-OCH3)，2.61(4H，m，H-9，H-10);13C NMR(CD3OD，125 MHz): δ157.7(C-4)，156.1(C-2)，154.6(C-7)，140.4(C-10a)，139.1(C-8a)，128.6(C-5)，124.8(C-5a)，115.4(C-4a)，113.6(C-8)，112.2(C-6)，106.9(C-I)，97.9(C-3)，54.5(4-OCH3)，30.4(C-10)，29.8(C-9).以上数据与文献［5］报道一致，确定化合物2为coelonin，其 化 学 名 称 为 4-methoxy-9，10-dihydrophenanthrene-2，7-diol.

图1 化合物1、2结构式Fig.1 Chemical structure of compounds 1，2

化合物 3:白色粉末，1H-NMR(C5D5N，500 MHz):δ0.65(3H，s，CH3)，0.92(3H，s，CH3)，0.86(3H，s，CH3)，0.88(3H，s，CH3)，0.98(3H，s，CH3)，0.84(3H，s，CH3)，4.06(1H，m，H-3)，5.35(1H，br s.H-6)，5.05(1H，d，J=7.5 Hz，H-1＇)，3.59-4.57(7H，m，3-H 和糖上 6个 H);l3C-NMR(C5D5N):δ12.3(C-29)，12.5(C-18)，19.4(C-21)，19.6(C-19)，19.8(C-26)，20.3(C-27)，21.6(C-13)，23.8(C-28)，24.9(C-15)，26.8(C-23)，28.9(C-16)，29.8(C-25)，30.6(C-2)，32.4(C-8)，32.5(C-7)，34.6(C-22)，36.7(C-10)，37.3(C-20)，37.8(C-1)，39.7(C-4)，40.3(C-12)，42.8(C-13)，46.4(C-26)，50.7(C-9)，56.6(C-17)，57.2(C-14)，63.2(C-6＇)，72.1(C-4＇)，75.7(C-2＇)，78.5(C-5＇)，78.8(C-3)，78.9(C-3＇)，102.9(C-1＇)，122.2(C-6)，141.3(C-5)，以上波谱数据与文献［6］报道一致，确定化合物3为β-胡萝卜苷.

化合物 4:白色粉末，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.48(1H，dd，J=1.5 Hz，J=8.0 Hz，H-4)，7.43(1H，dd，J=1.5 Hz，J=2.5 Hz，H-2)，7.26(1H，t，J=8 .0 Hz，H-5)，6.99(1H，m，H-6)，l3C-NMR(CD3OD，125 MHz):δ168.8(CO)，157.5(C-3)，132.0(C-1)，129.3(C-5)，120.7(C-6)，119.9(C-4)，116.0(C-2)，以上数据与文献［7］报道一致，确定化合物4为间羟基苯甲酸.

化合物 5:油状物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ 9.54(1H，s，CHO)，7.38(1H ，d，J=4.0 Hz，H-3)，6.58(1H ，d，J=4.0 Hz，H-4)，4.61(2H，s CH2OH)，13CNMR(125 MHz CD3OD，125 MHz):δ178.2(CHO)，162.0(C-2)，152.7(C-5)，123.6(C-3)，109.7(C-4)，56.5(CH2OH).以上数据与文献［8］报道一致，确定化合物5为5-羟甲基糠醛.

化合物 6:油状物，1H-NMR(CD3OD，500 MHz): δ7.06(1H，t，J=8.0 Hz，H-5)，6.66(3H，m，H-2，4，6)，2.83(2H，t，J=7.5Hz，H-7)，2.59(2H，t，J=7.5Hz，H-8)，13C NMR(125 MHz CD3OD，125 MHz): δ173.9(CO)，157.4(C-3)，142.3(C-1)，129.3(C-5)，119.3(C-6)，114.9(C-2)，113.0(C-4)，35.4(C-8)，30.7(C-7)以上数据与文献［9］报道一致，确定化合物6为3-羟基苯丙酸.

4 结语

通过对独蒜兰的系统分离，得到了6个化合物，分别鉴定为bulbocol(1)、coelonin(2)、β-胡萝卜苷(3)、间羟基苯甲酸 (4)、5-羟甲基糠醛 (5)、3-羟基苯丙酸 (6)，其中化合物3、4、5、6为首次从该植物中分离得到，该类化合物的发现为进一步研究该药物奠定了一定的基础.

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