采用气相色谱法同时测定罗浮山百草油中3种成份的含量研究

廖志钟

采用气相色谱法同时测定罗浮山百草油中3种成份的含量研究

廖志钟

目的 建立罗浮山百草油中樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚的含量测定方法。方法 采用GC法，弹性石英毛细管柱(柱长30 m，内径0.5 mm，涂层厚度1.0μm);氮气为载气，FID检测器，温度250℃，程序升温。结果 在该色谱条件下樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚的分离度和线性关系良好，回收率实验采用高中低三个浓度，平均回收率(n=18)分别为100.85%(RSD=1.89%)、100.13%(RSD=2.03%)、98.81%(RSD=1.86%)。结论 本法简便、快捷，专属性强，线性关系、准确性和重复性良好，适用于罗浮山百草油的质量控制。

气相色谱法;罗浮山百草油;樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚

罗浮山百草油质量标准收载于《部颁中药成方制剂》第20册，该品由两面针、徐长卿、辛夷花、红花、金不换、金线风等68味中草药材及樟脑、水杨酸甲酯、薄荷油、丁香油等11味中药提取物或挥发油共79味组成，具有祛风解毒，消肿止痛之功，主用于感冒头痛，虫蚊咬伤，无名肿毒，舟车眩晕［1］。本品方中含樟脑、水杨酸甲酯、丁香油是挥发性成分，可采用气相色谱法测定含量［2、3］，经预试，本法简便、快捷，专属性强，线性关系良好。

1 仪器与试药

GC-14C气相色谱仪，FID检测器(日本岛津公司)，N2000色谱工作站;GR202电子分析天平(日本A＆D);台式超声清洗器(SK250LHC，上海科导超声仪器有限公司);对照品:樟脑对照品(批号:747-200106，供含量测定用);水杨酸甲酯对照品(批号:110707-200107);丁香酚对照品(批号:725-200009，供含量测定用);均购自中国药品生物制品检定所;供试品:罗浮山百草油样品(由广东罗浮山国药股份有限公司生产);试剂:环己醇(天津市永大化学试剂开发中心;分析纯);丙酮(广州化学试剂厂;分析纯)。

2 色谱条件

弹性石英毛细管柱(柱长30 m，内径0.5 mm，涂层厚度1.0μm)DB-WAX;柱温为程序升温，初始温度90℃，保持3 min，以每分钟15℃的速率升温至164℃，保持5 min，再以每分钟20℃的速率升温至240℃，保持4min;FID检测器(日本岛津公司)，温度250℃，进样口温度230℃，载气为氮气，进样量为1μl;分流比50∶1;理论板数按环己醇峰计算应不低于20000。

3 溶液的制备

3.1 内标溶液 取环己醇适量，精密称定，加丙酮制成每25 mg/ml的溶液，摇匀，即得。

3.2 对照品溶液 分别取对照品樟脑15 mg、水杨酸甲酯125 mg、丁香酚7.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液2 ml，加丙酮至刻度，摇匀，即得。

3.3 供试品溶液 取罗浮山百草油约0.5 g，精密称定，置25 m l量瓶中，精密加入内标溶液2 ml，加丙酮至刻度，摇匀，即得。

4 线性关系考察

4.1 精密称取对照品樟脑91.58 mg、丁香酚150.62 mg、水杨酸甲酯1252.25mg，分别置50ml量瓶中，加丙酮溶解并定容，备用;

4.2 线性关系 ①分别精密量取上述4.1中樟脑、丁香酚溶液各 1，2，5，10，15 m l，置 25 ml量瓶中，加丙酮稀释溶解并定容，摇匀;吸取上述稀释后的5种溶液及4.1中溶液各1μl进样，②吸取上述4.1中稀释后的水杨酸甲酯6种溶液各1 μl进样;记录色谱图，以系列溶液的浓度作为横坐标(X)，对照品峰面积/内标物峰面积的比值作为纵坐标(Y)，进行线性回归;得线性方程:①樟脑 y=0.5236x-0.0065，r2=0.9998;②丁香酚y=1.8651x-0.0124，r2=0.9999;③水杨酸甲酯y=0.3328x-0.0319，r2=0.9997;结果表明，樟脑浓度在0.0733 mg/ml～1.8316 mg/ml的范围内、丁香酚浓度在0.0482 mg/ml～1.2050 mg/ml的范围内、水杨酸甲酯浓度在1.2400 mg/ml～12.4000 mg/m l的范围内，呈良好的线性关系。

5 专属性试验

根据本品处方比例量，①取除樟油、樟脑外的其余药材，按制法制成缺樟油、樟脑阴性样品;②取除水杨酸甲酯外的其余药材，按制法制成缺水杨酸甲酯阴性样品;③取除丁香罗勒油外的其余药材，按制法制成缺丁香罗勒油阴性样品;取上述阴性样品，分别按3.3项下供试品溶液的制备方法制成缺樟油、樟脑的阴性对照溶液、丁香罗勒油阴性对照溶液和水杨酸甲酯阴性对照溶液。依法测定，结果在阴性溶液色谱中，与樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚保留时间相同处无杂质峰干扰，表明方法专属性强;同时，供试品中樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚峰与相邻峰分离度均大于1.5，内标物环己醇与相邻峰分离度大于1.5，符合《中国药典》含量测定的基本要求。见图1～7。

6 精密度试验

取同一份对照品溶液，精密量取1μl进样，重复进样6次，每次测得樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚的峰面积与相应内标峰面积之比的RSD分别为:0.86%、1.57%、1.19%，表明本方法精密度符合规定。

7 重现性实验

7.1 重复性试验 取同一批供试品6份，分别按3.3项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算RSD值，分别为:樟脑1.16%、水杨酸甲酯1.69%、丁香酚2.82%。

7.2 中间精密度试验 取同一批供试品，分别由A、B、C三人，在不同的时间，用同一台设备，分别按3.3项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算RSD值，分别为:樟脑2.32%、水杨酸甲酯1.65%、丁香酚2.52%。表明本法重现性良好。

8 稳定性实验

精密吸取取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、8、16、18 h后进样1μl，测定樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚峰面积，按对照峰面积与内标峰面积之比计算 RSD值，分别为:樟脑0.31%、水杨酸甲酯1.76%、丁香酚0.10%。结果表明，供试品溶液在18 h内稳定性良好。

9 回收率实验

9.1 内标溶液的制备 精密称取环己醇12504.00 mg，置500 ml量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。

9.2 回收率用对照品溶液制备 分别精密称取对照品①樟脑25.10 mg、水杨酸甲酯 333.43 mg、丁香酚14.65 mg;②83.95 mg、水杨酸甲酯676.05 mg、丁香酚39.08 mg;③樟脑142.89 mg、水杨酸甲酯770.00 mg、丁香酚110.61 mg;分别置50 m l量瓶中，加丙酮溶解并定溶，摇匀，即得。

9.3 回收率用供试品溶液的制备 精密称取已知含量的供试品(含樟脑32.7 mg/g、水杨酸甲酯270.7 mg/g、丁香酚14.7 mg/g)54份，分为9组，其中①取样量分别为樟脑含量限度40%、100%、400%的50%的3组，每组6份;②取样量分别为水杨酸甲酯含量限度的80%、100%、120%的3组，每组6份;③取样量分别为丁香酚含量限度70%、100%、600%的50%3组，每组6份;分置25 ml容量瓶中，精密加入回收率用对照品溶液①、②、③相对应的樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚对照品溶液，各精密加入内标溶液2 m l，以丙酮稀释至刻度，摇匀，即得。

9.4 回收率试验结果 精密吸取上述供试品溶液各1μl注入气相色谱仪，测定结果，分别计算樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚的回收率。结果表明，低、中、高三个浓度回收率及RSD分别为:樟脑是 100.51%、102.93%、99.10%;RSD 为1.68%、1.84%、2.15%，总 RSD为1.89%;水杨酸甲酯是99.84%、100.64%、99.90%，RSD 为 2.62%、1.48%、1.98%，总 RSD为 2.03%;丁香酚是 96.55%、98.60%、101.28%，RSD为 1.20%、1.13%、3.25%，总 RSD为1.86%。结果见表1。

表1 回收率实验结果

10 讨论

10.1 程序升温研究 曾试过初始温度60℃、90℃、100℃三种;升温速度:以13℃/min、15℃/min的速率升温至113℃、164℃，保持3min、5 min，再以15℃ /min、20℃ /min、30℃ /min的速率升温至 220℃ /min、230℃ /min、240℃ /min，保持 3 min、4 min、5 min;最后确定以初始温度 90℃ /min，保持 3 min，以15℃/min的速率升温至 164℃，保持 5 min，再以20℃/min的速率升温至 240℃，保持 4 min分离度最为理想［4］。

10.2 分流比曾筛选过 40:1、42:1、43:1、44:1、45:1、46:1、47:1、50:1;最后以进样口温度为230℃、检测器柱温度为250℃、分流比为50:1时最理想。

10.3 不同稀释溶媒的研究 根据樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚和环己醇的理化性质，文献多采用无水乙醇、丙酮、石油醚(60℃ ～90℃)等作为溶媒［5］。本试验选用无水乙醇、丙酮、石油醚(60℃ ～90℃)作为溶媒进行试验。结果以乙醇为溶剂时，基线稍有漂移，以石油醚(60℃ ～90℃)为溶剂时，拖尾因子偏大，丙酮为溶剂色谱峰干扰最少;故本试验选择丙酮为溶剂。

10.4 不同色谱柱的研究 经对DB-WAX毛细管柱(安捷伦)、毛细管柱Rtx(R)-5色谱柱进行考察，结果使用DBWAX毛细管柱(安捷伦)时，各峰保留时间短，分离度好，理论板数等均符合要求。使用毛细管柱Rtx(R)-5时，樟脑峰分离度不好，整体上保留时间延长。故本试验选用DB-WAX毛细管柱(安捷伦)。

10.5 不同进样口温度的研究 调整不同进样口温度为210℃、220℃、230℃、240℃，按方法测定，进样口温度变化对测定结果无明显影响。

10.6 罗浮山百草油方中含有多种易挥发成份，本文建立了气相色谱法同时测定其樟脑、水杨酸甲酯、丁香酚的含量，方法的简便，重现性好，专属性强，用于罗浮山百草油的质量控制，具有可行性。

［1］中华人民共和国卫生部.《药品标准》(中药成方制剂第二十册)，1998，20:179-180.

［2］杨晶晶，郭坚固，刘献阳.GC法测定麝香祛风湿膏中薄荷脑、丁香酚等组分的含量.食品与药品，2008，10(9):51-53.

［3］刘吉金，黄服喜，熊英.毛细管气相色谱法同时测定活络油中7种成分的含量.中国实验方剂学杂志，2006，12(10):16-18.

［4］段莲华，冯速捷，李玉丽.气相色谱程序升温法测定风油精成分含量.热带农业工程，2004，2:27-28.

［5］刘吉金，黄服喜，熊英.气相色谱法测定红花油中水杨酸甲酯和丁香酚含量的方法改进.药品检测，2002，11(7):54.

516133 广东罗浮山国药股份有限公司