罗氏COBAS6000全自动电化学发光免疫分析仪性能验证

谭晓辉， 王 勇 (南方医科大学法医系， 广州 5055;重庆市公安局刑警总队技术处)

罗氏COBAS6000全自动电化学发光免疫分析仪性能验证

谭晓辉1， 王 勇2(1南方医科大学法医系， 广州 510515;2重庆市公安局刑警总队技术处)

目的 按ISO15189要求对罗氏COBAS 6000全自动电化学发光免疫分析仪的性能进行验证。 方法 对甲胎蛋白(alpha－fetoprotein，AFP)的精密度、准确度、临床可报告范围(clinical reportable range，CRR)、分析测量范围(analytical measurement range，AMR)、参考区间进行验证实验。 结果 批内精密度变异系数(coefficient variation，CV)高低值分别为3.28%和3.46%;日间精密度CV高低值分别为4.39%和5.13%，均小于厂家提供的CV(10%)。相对偏差为0.862%，小于5%。分析测量范围为0.80－1 200 ng/ml，参考区间为0－20.00 ng/ml，临床可报告范围为0－60 000 ng/ml。 结论 罗氏COBAS 6000全自动电化学发光免疫分析仪的性能与厂家提供的资料基本一致，故可用其进行临床标本的检验工作，所得结果具有可信性。

罗氏COBAS 6000全自动电化学发光免疫分析仪; 甲胎蛋白; 性能验证

罗氏COBAS6000全自动电化学发光免疫分析仪(以下简称6000)是国内医疗检验的大型主力检测系统，它是当今肿瘤标志物检测灵敏度最高的仪器，其出色的检测性能得到国内外实验室的一致认同。依据《医学实验室和能力的要求》(ISO15189)和美国病理家学会(CAP)要求参加其认可的实验室，在开展某一检测项目前，都需要进行精密度、准确度、分析测量范围、参考区间等系统评价，达到要求后才能应用于临床常规检测。按照上述规定，本实验室对罗氏COBAS6000进行了甲胎蛋白(alpha－fetoprotein，AFP)，癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)等检测的方法学评价，现取AFP进行报告。

1 材料

1.1 仪器与试剂 罗氏COBAS6000全自动电化学发光免疫分析仪(德国，罗氏);罗氏原装AFP试剂(批号为:12172)、低值校准品AFP(批号为181641，浓度:5.32 ng/ml)、高值校准品 AFP(批号:181641，浓度:59.53 ng/ml)，质控品为罗氏原装中值质控(TM1:11.200 ng/ml，批号:181461)、高值质控品(TM2:87.241 ng/ml，批号:181462)。

1.2 样本 来源于广州市健康体检人群新鲜血标本120份，选择标准:表面健康人(经健康体检，排除疾病/亚健康状态/不良嗜好及用药史者)，男女各60份。

2 方法

2.1 精密度验证实验

2.1.1 批内精密度 选择 TM1(11.200 ng/ml)和TM2(87.241 ng/ml)两个浓度的质控品，连续测定20次，分别计算其平均值、标准偏差(SD)、变异系数(CV)。

2.1.2 日间精密度 选择TM1和TM2两个浓度的质控品，每天测定一次，连续测定20 d，计算其平均值、标准差(SD)、变异系数(CV)。

2.2 准确度验证实验 以2009年卫生部第一次室间质评回报靶值为标准，用临床实验室上报结果与靶值的相对偏倚计算相对偏移(SE%)，以SE%≤1/2 CLIA88允许总误差(TEa)，即SE%≤5%为可接受范围。

2.3 分析测量范围和线性相关验证实验 分析测量范围(analytical measurement range，AMR)是指患者标本未经任何处理(稀释、浓缩或者其他处理)，由检测系统直接检测得到的可靠的检测范围。按参考文献［1］和美国临床实验室标准NCCLS EP6－A2文件［2］选择低浓度(L)和高浓度(H)患者标本各一份，浓度最好达到给定的上下限，并按照5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H 的比例混合成6 个混合标本，每个浓度的样本重复检测4次。以预期值为X，测定均值为Y，计算回归方程:Y=bX+a，若相关系数R2≥0.975，b在 0.97 －1.03 范围内，a与0无显著性差异。结果为可接受。若b＜0.95，提示可能b和1之间差异有统计学意义［3］。

2.4 参考区间验证实验 参考美国临床实验室标准化研究所 CLSI C28－A2［4］文件，R= 测定结果在参考范围内的例数/总测定例数，≥95%即合格。选择120份体检合格的健康人标本，在检测系统上进行测定，对结果进行统计并与仪器说明书提供的参考区间进行比较。若120份标本的检测结果均在仪器说明书提供的参考区间内或仅有≤5%的值超出，则验证通过。否则应进行参考区间的确立实验。

2.5 临床可报告范围(CRR)验证 临床可报告范围为患者标本经稀释、浓缩或者其他处理后，向临床所能报告的结果范围。先进行稀释回收试验，确定标本稀释后可靠检测浓度低限。选择AFP浓度在AMR内的高值标本一份，分别对其进行2，5，10，20，50，100倍稀释，连续测定4次，用平均值与预期值比较，计算回收率，按仪器说明书要求，回收率在80%－120%内，结果可以接受。确定其最大稀释度，结合功能灵敏度和临床决定水平确定临床可报告范围［5］。

3 结果

3.1 精密度验证 结果显示，实测CV小于厂家提供的CV，判断标准CV＜10%，见表1。

表1 质控批内精密度与日间精密度Tab 1 The inter-assay precision and between-day precision of Roche COBAS6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer

3.2 准确度实验 结果表明，实测平均偏差为0.862(见表2)，少于用临床实验室上报结果与靶值的相对偏倚计算相对偏移(SE/%)，SE≤5%为可接受范围。

表2 准确度实验结果Tab 2 The accuracy of Roche COBAS6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer

3.3 分析测量范围和线性相关实验结果 结果显示，实验实测值与预期值成线性关系(见图1)，a=11.538，b=0.985 6，R2=0.999 6，结果符合统计学要求。

3.4 参考区间实验结果 本实验测定正常人结果所提供的参考范围的比率R=96.7%≥95%。标本的项目结果均在厂家提供的生物参考区间范围内(0－20.00μg/L)或者《全国临床检验操作规程》第3版提供的生物参考区间内，即:可以直接引用厂家提供的参考区间作为这些检测指标的参考区间。

图1 甲胎蛋白分析测量范围Fig 1 Analytical measurement range of alpha－fetaprotein

3.5 临床可报告范围 本项目最大稀释度为1∶50，以线性最高浓度1 200 ng/ml计算，本项目可报告的最高浓度为60 000 ng/ml，最终结果表明，本实验系统的可报告范围0－60 000 ng/ml为可接受，见表3。

表3 回收率实验结果Tab 3 Results of recovery test

4 讨论

虽然电化学发光法检测AFP采用罗氏的封闭检测系统，试剂和耗品都来自于原厂，但其说明书提供的所有参数都是厂家在最佳条件下完成的，而实验室间的条件存在较大的差异，因此每个实验室都必须按各自的检测系统建立和验证方法学参数，本次AFP的批内 CV分别为3.46%和3.28%;日间CV分别为5.13%和4.39%，均低于厂家说明书提供的参数，同时偏倚是明显小于卫生部或者CLIA88提供的偏倚，说明本实验室的检测系统是可以用于临床检验诊断研究的。

目前国内大部分实验室都采用说明书提供的分析灵敏度作为该方法的最低检测限，这可能存在系统差异，更可能存在着引用错误，按最新的观点，功能灵敏度才是该方法的最低检测限，因此每个实验室应该建立自己的功能灵敏度，不宜直接引用厂家提供的参数［5］。功能灵敏度是以日间重复变异系数(CV)为20%时对应检测限样品具有的平均浓度，确定为检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值。通过对某些定量测试项目的灵敏度评价，评估该检测系统可检测最低分析物浓度，为分析测量范围和临床可报告范围的低限值确定做参考。线性验证的目的是验证该方法的最高检测值和高、低检测值之间是否呈线性关系［6］。分析测量范围验证实验所得到的结果在坐标图上呈现良好的线性趋势，得直线回归Y=bX+a。a=11.538，b=0.986，R2=0.999 6 则可判断该测定方法分析测量范围在厂家给定的高、低限浓度之间，是满足临床实验要求结果。

参考区间尽管验证结果得出“可以直接引用厂家提供的参考区间作为这些检测指标的参考区间”的结论，但由于时间的紧迫和取样的片面性、局限性，同时标本数目偏少，所得出的结果不能完全反映当地实际的情况，在国内也出现过厂家提供的参考区间不符合实验室使用的例子。所以这样的结果不能真实、完全地反映当地的情况，但考虑到成本以及精力，所以就暂时按照厂家给定的参考区间进行临床检验。如果要得出实际的当地人群的参考区间，就需要更加严格的取样人群的标准，采集更多的健康人的标本，依据检测结果的分布情况及临床疾病的诊断标准，选择正确的统计方法进行归纳分析并定期进行评审。

临床可报告范围即定量检测项目向临床所能报告的结果范围，患者标本可经稀释、浓缩或其他处理，由实验结果显示1∶50倍稀释为可接受的范围对应的可报告浓度为0－60 000 ng/ml，该浓度已经可以满足AFP的临床诊断。

国内外研究报道电化学发光免疫分析ECLIA精密度高、灵敏度好、准确度精确、线性范围宽［7－9］，本次实验表明罗氏COBAS6000电化学分析仪的精密度、灵敏度、线性范围的验证结果与厂家提供的数据是相吻合的。综上所述，罗氏COBAS6000电化学分析系统AFP检测的主要分析性能结果与厂家规定的性能一致，符合质量目标要求，可用于临床AFP的检测。

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Performance verification of Roche COBAS6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer

TAN Xiao－hui1，WANG Yong2(1Institute of Forensic Medicine，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China;2Corps of Chongqing Public Security Bureau Criminal Technology Division)

ObjectiveTo test and verify the system performance of Roche COBAS 6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer according to the requirements of ISO15189.MethodsVerification experiments were taken to measure the precision，accuracy，clinical reportable range(CRR)，analytical measurement range(AMR)，reference interval of alpha－fetoprotein(AFP).ResultsThe high and low values of coefficient variation(CV)of inter－assay were 3.28%and 3.46% ，and those of between－day precision were 4.39%and 5.13%，which were all less than the CV provided by the manufacturer(10%).Relative bias was 0.862%.Analytical measurement range was 0.80 － 1 200 ng/ml，the reference interval was 0 － 20.00 ng/ml，and the clinical reportable range was 0 －60 000 ng/ml.ConclusionThe basic performances of Roche COBAS6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer are consistent with the data provided by the manufacturer，so it can be used to inspect the clinical samples and the results are credible.

Roche COBAS6000 automatic electrochemiluminescence immunoassay analyzer; alpha－fetoprotein; performance verification

R318.6

A

1007 －6611(2011)01 －0052 －04

10.3969/J.ISSN.1007 －6611.2011.01.014

谭晓辉，男，1983－07生，硕士，助理实验师，E－mail:newman@fimmu.com.

2010－10－11］