银杏叶提取物对柑橘青霉病菌的抑菌效果

喻林华李晓烈蓝 华彭佳黛何小新

（1.中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南 长沙 410004；2.中南林业科技大学国家级森林植物教学实验示范中心，湖南 长沙 410004）

银杏叶提取物对柑橘青霉病菌的抑菌效果

喻林华1，2李晓烈1蓝 华1彭佳黛1何小新1

（1.中南林业科技大学生命科学与技术学院，湖南 长沙 410004；2.中南林业科技大学国家级森林植物教学实验示范中心，湖南 长沙 410004）

研究银杏叶乙醇提取物（EGb）对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌作用。采用95%乙醇提取银杏叶，用针刺伤柑橘后以青霉病菌菌液和EGb处理柑橘进行药效试验，测试EGb对柑橘青霉病菌的抑菌效果。结果表明，EGb对储藏期柑橘青霉病菌具有较强的抑菌作用，且随着EGb浓度的增大抑菌作用增强，随着储藏时间的延长，EGb的抑菌作用降低。

乙醇；银杏叶提取物；储藏期；柑橘；青霉病菌；抑菌作用

银杏（ginkgo biloba Linn），别名白果、鸭脚子、公孙树、佛指甲、风果等，属裸子植物银杏科（ginkgoaceace）［1］。银杏叶含有200多种药用成分，其中富含黄酮类化合物、银杏内酯、银杏多糖等生理活性物质［2］。银杏提取物（EGb）具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理活性，在功能性食品中有广泛的应用，EGb中银杏酚酸具有强烈的杀虫、抑菌杀菌作用［3－4］。

柑橘储藏期青霉病害常造成采后柑橘严重的损失，传统防治方法采用化学药剂托布津、多菌灵等对柑橘防腐保鲜，但病原菌对这些化学药剂的抗药性越来越大，而且这些化学药剂对人体也有毒害作用。采用天然提取物抑制柑橘霉变的研究开始受到科研工作者们的关注。李倩如等［5］采用平板法研究银杏叶乙醇提取物对柑橘青霉病菌的抑制作用；徐齐云等［6］也采用平板法研究了银杏叶4种提取物对柑橘青霉病菌的抑制作用，同时采用药液浸果法研究了银杏叶石油醚提取物对柑橘青霉病菌的抑菌效果。这两个研究均表明银杏叶提取物对柑橘青霉病菌有一定的抑菌作用，但在平板法中，青霉病菌是生长在培养基中，处于同一温度同一空气湿度，青霉病菌与空气的接触面积也相同的情况下，而实际储藏过程中的柑橘由于堆积的原因，每个地方的温度和空气湿度都不同，每个柑橘与空气接触的面积也不同，而青霉病菌是生长在柑橘的表面，所以平板法不适宜研究银杏叶提取物对储藏过程中的柑橘青霉病菌的抑菌作用。

本试验在前人研究的基础上［5，6］，以乙醇替代石油醚，以不同浓度银杏叶乙醇提取物处理感染了柑橘青霉病菌的柑橘，进行药效试验，测试银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉病菌的抑菌效果，旨在克服化学药剂对人体的毒害作用，提高柑橘果品防腐保鲜效果。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

柑橘：砂糖橘，市售；

青霉菌：本实验室自制。来自长有青霉菌的柑橘，将青霉菌溶于无菌水中配制成青霉菌液；

新鲜银杏叶：采摘于中南林业科技大学校园内；

乙醇（95%）、丙酮：分析纯，安徽安特生物化学有限公司。

1.2 试验仪器

旋转蒸发仪：201B，郑州长城科工贸有限公司；

水浴锅：DK－98－1型，天津市泰斯特仪器有限公司；

电热鼓风干燥箱：101－2AB型，天津市泰斯特仪器有限公司；

艾科浦超纯水系统：DZG－303A，颐洋企业发展有限公司；

电子天平：PL602－S，梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；

高压灭菌锅：HVE－50，日本平山（HIRAYAMA）制造公司；

超净工作台：SW－CJ－2FD，苏州净化设备有限公司；

索氏提取器：ST－60，北京赛福莱博科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 银杏叶提取物的制备 取新鲜银杏叶洗净，晾干，于60℃干燥箱中烘8～12h（具体时间视样品中含水量来定），取出用研钵粉碎过40目筛，粉末贮藏在密封袋中，备用。称取400g银杏叶粉末包入纱布内，放入2 000mL烧杯中，取500mL 95%乙醇加入烧杯中浸泡48h，得到浸泡液。取出纱布包，将纱布包在索氏抽提器中进行减压抽提（温度50～60℃）使得没有液体浸出为止，将浸泡液和提取液用滤纸过滤到烧杯中，在80℃水浴锅中恒温初步浓缩将残留的乙醇挥发掉，将经过初步浓缩的提取物装入旋转蒸发仪中，挥发除去最后的乙醇和残留水分，即可得到纯提取物，将提取物存放在有色试剂瓶中备用。提取物得率按式（1）计算：

1.3.2 不同浓度银杏提取物的配制 称取10g银杏叶提取物溶解在100mL的丙酮溶液中形成0.1g/mL的银杏叶提取物丙酮溶液。分别吸取该溶液15，12，9，6，3mL进行稀释，稀释到银杏叶乙醇提取物（EGb）的浓度分别为0.01，0.008，0.006，0.004，0.002g/mL。

1.3.3 供试柑橘的选择与处理 柑橘的处理采用浸果法和针刺伤感染法。选取大小、色泽一致的柑橘，将新鲜柑橘洗净晾干，放在超净台上，经75%酒精表面消毒后打开风机吹干，以去除表面可能携带的微生物。用针刺伤感染法，在每个柑橘的东西南北各刺5个伤口，伤口深0.1～0.2cm。将柑橘在青霉病菌菌液中浸泡1min，风机吹干后，分别将柑橘浸泡于5种不同浓度银杏提取物溶液中2～3min后取出，装入聚乙烯塑料袋中。设置利用丙酮溶液浸泡柑橘后接菌处理作为对照组（CK）。每个组20个柑橘。将处理后的柑橘置于25℃室温储藏，每10d调查1次发病情况（病级），计算病情指数和抑菌效果。试验重复3次。病果分级标准：0级，无病害；1级，病害面积占整个柑橘1/4以下；2级，病害面积占整个柑橘1/4～1/2之间；3级，病害面积占整个柑橘的1/2～3/4之间；4级，病害面积占整个柑橘3/4以上［7］。病情指数按公式（2）计算，抑菌效果按公式（3）计算［7］：

2 结果与分析

5种不同浓度EGb处理柑橘10，20，30d后病情指数与抑菌效果见图1～3。

图1 不同浓度提取物溶液处理柑橘10d后的病情指数和抑菌效果Figure 1 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 10d

图2 不同浓度提取物溶液处理柑橘20d后的病情指数与抑菌效果Figure 2 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 20d

由图1可知，随着银杏叶乙醇提取物浓度的增大，储藏期柑橘青霉病病情指数减小，银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增强。

从图2、图3可以看出与图1相似的趋势，说明随着银杏叶乙醇提取物浓度的增大，储藏期柑橘青霉病病情指数减小，银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增强。

图3 不同浓度提取物溶液处理柑橘30d后的病情指数与抑菌效果Figure 3 The disease index of stored citruses and the bacteriostatic effects of EGb solutions with different concentrations against penicillium italicumin stored citruses after 30d

由图1、图2、图3还可以得知，随着处理时间的延长，储藏期柑橘青霉病病情指数增大，银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉菌的抑菌效果降低。

3 结论

随着银杏叶乙醇提取物浓度的增大，储藏期柑橘青霉病病情指数减小，银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉菌的抑菌效果增强。随着处理时间的延长，储藏期柑橘青霉病病情指数增大，银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉菌的抑菌效果降低。

银杏叶乙醇提取物对储藏期柑橘青霉病菌具有较强的抑菌作用，且随着提取物浓度的增大抑菌作用增强，但是随着处理时间的延长防治效果下降。说明提取物抑菌效果较好，杀菌效果差。

1 梁立兴.中国银杏［M］.济南：山东科学技术出版社，1988.

2 闫泽华，张仲欣，甘晓露，等.隧道式干燥剂干燥银杏叶的工艺参数研究［J］.食品与机械，2009，25（4）：149～152.

3 曾献，喻林华.银杏叶生物活性成分及其在功能性食品中的应用［J］.中国西部科技，2007（12）：22～26.

4 曾献，龚玉子，王焕姣.银杏叶的药理作用［J］.湖南林业科技，2008，35（1）：6～8.

5 李倩如，姜永嘉，张耀东.银杏叶乙醇提取物对霉菌抑制作用的研究（一）［J］.郑州粮食学院学报，2000，21（2）：16～20.

6 徐齐云，姚安庆，胡美英，等.银杏叶提取物对柑桔青霉病菌的抑制效果研究［J］.广东农业科学，2006（5）：83～84.

7 李俊凯，易金兰，郭敦成.多菌灵有机酸盐防治柑橘贮藏期病害的初步研究［J］.湖北农学院学报，2000，20（4）：316～318.

Effect of bacteriostaticonpenicillium italicumin stored citruses by using the extracts ofginkgo bilobaleaves

YU Lin－huan1，2LI Xiao－lie1LAN Hua1PENG Jia－dai1HE Xiao－xin1

（1.College of Life Science＆ Technology，Central South University of Forestry and Technology，Changsha，Hunan410004，China；2.Demonstration Center forTeaching Experiment of Forest Plant，Central South University of Forestry and Technology，Changsha，Hunan410004，China）

To study the bacteriostatic effect against Penicillium italicum in stored citruses by using the extracts of Ginkgo biloba leaves（EGb）extracted with 95%alcohol.95%Alcohol was used to extract the Ginkgo biloba leaves as a solvent.Penicillium italicum solution and EGb solution was used to deal with citruses which had been stabbed in order to test EGb’s bacteriostatic effect against Penicillium italicum.The results showed that EGb had strong bacteriostatic effect against Penicillium italicum in stored citruses.The bacteriostatic effect of EGb solution against Penicillium italicum became strong with the increase of concentration of EGb，The bacteriostatic effect of EGb solution against Penicillium italicum reduced with the last of time of citruses stored.

alcohol；the extracts of ginkgo biloba leaves （EGb）；stored citruses；penicillium italicum；bacteriostatic effect

10.3969 /j.issn.1003－5788.2010.06.001

湖南省教育厅科学研究项目基金资助（编号：09C1005）；中南林业科技大学青年科学研究基金资助（编号：2009016B）；国家级森林植物教学实验示范中心大学生创新性项目

喻林华（1977－），女，中南林业科技大学讲师，硕士。E－mail：yokelhill＠yahoo.com.cn

2010－06－25