气相色谱法测定培美曲塞二钠中有机溶剂残留量

赵砚荣，徐 娴

(江苏奥赛康药业有限公司，南京 211112)

培美曲塞二钠（pemetrexed disodium）是一种多靶位叶酸拮抗剂，可同时阻断胸苷酸合酶（TS）、二氢叶酸还原酶（DHFR）和甘氨酰胺核苷酸转甲酰酶（GARFT）这3种不同的对癌细胞的生存至关重要的酶靶标，从而阻断肿瘤DNA复制、细胞分裂所需的酶，抑制了肿瘤的生长[1-2]。由于该原料药在制备过程中使用了有机溶剂二氯甲烷、四氢呋喃和N，N-二甲基甲酰胺，依据人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）提出的残留溶剂指导原则，所用溶剂均被列为药品必须限制的第二、三类有机溶剂[3]，因此为保证药品质量和用药安全，对该原料药进行有机溶剂残留量检测就显得尤为重要。本实验采用毛细管气相色谱法[4-6]，对培美曲塞二钠中有机溶剂残留量分析进行了系统性的研究、确认，所建立的方法简单、灵敏、重现性好、准确度高。可用于实际生产中的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津GC-14C型气相色谱仪（配FID检测器，化学工作站）。

1.2 试药

培美曲塞二钠 （批号：090201，090202，090903，090204，江苏奥赛康药业有限公司）。二氯甲烷、四氢呋喃和N，N-二甲基甲酰胺均为分析纯（南京化学试剂厂）；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：OV-101 毛细管色谱柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm），内涂100%聚二甲基聚硅氧烷。柱温：50℃；保持5 min后，以30℃/min速度升至 150℃，保持 3 min；进样口温度：180℃；检测室（FID）温度：200℃；载气：N2；流速：1.0 ml/min；分流比为1∶50；进样体积：1 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取二氯甲烷0.024 g、四氢呋喃 0.0288 g、N，N-二甲基甲酰胺 0.0352 g置 50 ml量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液0.5 ml，置10 ml量瓶中，加纯化水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取培美曲塞二钠40 mg，精密称定，置5 ml具塞试管中，加纯化水1 ml，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 色谱峰定性试验

分别精密吸取二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺各 1 μl，按“2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱图。 二氯甲烷峰的保留时间为0.918 min，四氢呋喃峰的保留时间为1.295 min，N，N-二甲基甲酰胺峰的保留时间为3.583 min，结果见图1。

表1 线性关系试验结果Tab.1 Standard curves of three kinds of organic solvents

2.4 线性关系考察

取二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺，分别精密称定，置同一只100 ml量瓶中，用纯化水制成标准贮备液，其质量浓度分别为0.253、0.406、0.376 mg/ml。精密量取标准贮备液 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml分别置于 25 ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，得对照品系列标准溶液。精密量取系列标准溶液各1 μl，分别进样分析，以峰面积（A）对相应溶液中各组分质量浓度（C）作线性回归，结果见表1。

2.5 检测限测定

取二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺分别加水稀释，按“2.1”项下的色谱条件进样。信噪比S/N=3时计算检测限，分别为 0.4、0.4、1.7 μg/ml。

2.6 精密度试验

精密吸取线性关系考察项下中间浓度的溶液，重复进样6次，以各溶剂峰面积计算，RSD分别为2.01%、2.98%和3.14%，结果表明该法精密度良好。

2.7 重复性试验

取二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺和培美曲塞二钠（批号：090201）适量，按“2.2”项下方法制备混合对照品溶液和6份供试品溶液，分别进样分析。结果3种有机溶剂均未检出。

2.8 稳定性试验

取回收率试验项下序号为1的测试溶液，放置1 d后，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，检测结果不变，表明被测物的稳定性良好。

2.9 回收率试验

取已知溶剂残留量的培美曲塞二钠（批号：090201）40 mg，精密称定，置5 ml具塞试管中，共6份，精密添加1 ml二氯甲烷、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺质量浓度分别为20.24、32.48、30.08 μg/ml的混合标准溶液，振摇使溶解，摇匀。 按“2.1”项下色谱条件进样分析，计算回收率，见表2。结果表明该法准确性良好。

表2 回收率测定结果（n=6）Tab.2 Results of the recoveries （n=6）

2.10 样品测定

取对照品溶液和供试品溶液进样测定，按外标法以峰面积定量计算。3批培美曲塞二钠样品（批号：090202、090203、090204）中3种有机溶剂均未检出。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

由于原料药在水中易溶，故选择水作为溶剂。分析时采用程序升温，在保证各溶剂分离良好的情况下，提高分析效率。结果表明用水作溶剂，谱图简单，干扰峰少，6 min内完成整个分析，快速简便。

3.2 系统耐用性

在实验过程中，曾选用Agilent DB-5毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），内涂 5%苯基甲基聚硅氧烷，其他按“2.1”项下色谱条件进行测定，各溶剂峰除保留时间略有改变，其他没有影响。结果表明采用的检测条件适用于不同型号的非极性气相柱。出于价格因素，推荐首选OV-101毛细管色谱柱。

[1]Hutson TE,Vukelja S,Atienza D,et al.PhaseⅠstudy of a 3-drug regimen of gemcitabine/cisplatin/pemetrexed in patients with metastatic transitional cell carcinoma of the urothelium[J].Investigational New Drugs,2008,26(2):151-158.

[2]Robert D,Hailun L,Matthew M,et al.Phase 2 trial of pemetrexed disodium and gemcitabine in advanced urothelial cancer[J].Cancer,2008,112(15):2671-2675.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:附录Ⅷ P.

[4]Liu DH,Zhang CY,Mao ZM.Determination of Residual Organic Solvents in Tiotropium Bromide by GC[J].Chinese Journal of Pharmaceuticals,2009,40(3):207-208.

[5]周岐勋,李健和,徐幸民.高效液相色谱法测定盐酸甲氯芬酯分散片含量及有关物质[J].中国当代医药,2009,16(4):73-76.

[6]关强,王云龙,杜遵义.高效液相色谱法测定延胡索药材中延胡索乙素的含量[J].中国当代医药,2009,16(4):78-79.