玫瑰和月季总黄酮含量对比研究

王 敏，邵冬梅，李海燕，李 双，肖 怀

（大理学院药学院，云南大理 671000）

玫瑰和月季总黄酮含量对比研究

王 敏，邵冬梅，李海燕，李 双，肖 怀*

（大理学院药学院，云南大理 671000）

目的：用紫外可见分光光度法对玫瑰、月季中总黄酮含量进行测定和比较。方法：采用75%乙醇超声提取玫瑰、月季中总黄酮，以芦丁为对照，AlCl3显色法测定总黄酮含量。结果：加样回收率为102.5%，RSD为2.2%。野生及种植玫瑰、月季中总黄酮含量分别为1.94%、0.80%和2.79%。结论：该方法操作简便，结果准确，可为玫瑰、月季等观赏植物的药用研究提供一定依据。

玫瑰；月季；总黄酮；含量测定

玫瑰（Rosa rugosa）、月季（Rosa chinensis）均属蔷微科（Rosaceae）蔷微属（Rosa）落叶灌木，常作为观赏类植物，多以花蕾入药，其根和叶也有药用。玫瑰花利肺胆，辟邪恶之气，食之芳香甘美，令人神爽〔1〕，并且还能舒肝理气、活血调经，可用于胸闷，胃脘胀痛，吐血咳血，月经不调等〔2〕。月季具有活血调经的功效，用于治疗月经不调、痛经〔3〕。它们的花蕾还常用于养生保健，具有美容养颜的功效。二者皆含黄酮类物质，该类物质有抗衰老、抗癌、降血脂、增强机体免疫系统功能等多种生理活性。通过查阅文献，未见对二者黄酮含量进行比较的报道，因此对玫瑰、月季总黄酮含量进行了测定和比较，为更有效、经济地开发利用该类植物提供参考依据。

1 材料

1.1 实验仪器 SY-8200T超声提取器（上海声源超声波仪器设备有限公司产）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司产）；FA-2004N电子分析天平（上海有限公司产）。

1.2 试剂 芦丁标准品（中国药品生物制品检定所产，批号：100080—200707）；乙醇，三氯化铝（AlCl3）为分析纯，水为重蒸水。

1.3 材料 野生玫瑰（1号）购自大理市集盛堂药房，栽培玫瑰（2号）、栽培月季（3号）购买自鲜花市场，自然风干。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取于80℃干燥至恒重的芦丁10.7mg，用75%的乙醇溶解，定容于100mL量瓶中，备用。

2.2 样品溶液的制备 药材干燥至恒重，粉碎，精密称取约1.0 g至锥形瓶中，用75%乙醇各15mL超声提取3次，每次30min，过滤，合并滤液，定容到50mL量瓶中，再精密量取1.50mL于25mL量瓶中，75%乙醇定容，即得样品溶液。

2.3 吸光度测定 每个样品溶液分别取10.00 mL加入5%AlCl3水溶液1mL显色30min后，在411 nm处测定吸光度，空白对照为样品溶液加水1mL〔4〕。

2.4 标准曲线绘制 精密量取芦丁对照品液各2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL于25 mL量瓶中，75%的乙醇定容。依据“2.3”项测定吸光度。以25mL中芦丁总量（mg）对吸光度求得回归方程为：Y=0.844 9X+0.014 2，r=0.999 6。结果表明：芦丁对照品在0.214～1.070 mg内线性关系良好。

2.5 显色稳定性试验 精密称取1号样品约1.0 g，按“2.2”项方法进行提取，按“2.3”项下的测定方法，加入显色剂30min后开始测定吸光度，每隔10 min测定一次，测60min，RSD为0.8%（n=6），说明样品显色后在30~90min内比较稳定。

2.6 仪器精密度试验 取供试溶液，按“2.3”项下的测定方法（空白不变）重复测定5次，吸光度RSD为0.9%。

2.7 重复性试验 精密称取1号样品5份，按“2.1”项和“2.3”项操作，吸光度RSD为2.0%。

2.8 加样回收率试验 精密称取1号样品（总黄酮含量1.94%）5份，分别加入相同量的芦丁对照品4.32mg（精密称取芦丁0.024 g，75%的乙醇定容至50 mL，5份样品中各加入9.0 mL），按“2.2”，“2.3”项操作，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率结果

2.9 玫瑰和月季中黄酮含量测定 分别取1号、2号和3号样品，平行称取3份，用“2.2”方法进行提取，“2.3”方法测定各自吸光度，每份样品平行测定3次，取其平均值，代入回归方程计算总黄酮含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

从表2结果看，总黄酮含量以月季最高，野生玫瑰高于栽培玫瑰。

3 讨论

3.1 显色方法的选择 总黄酮含量测定中常采用供试液加5%亚硝酸钠、10%硝酸铝及氢氧化钠〔5〕显色后进行比色测定。实验结果发现此方法显色后样品溶液吸光度不稳定，随时间变化较大。后改为单独用5%AlCl3〔6〕显色，显色后在30~90 min内吸光度较稳定。

3.2 测定波长的选择 文献〔5-6〕报道总黄酮显色后可在272.5 nm、510 nm等多个波长处测定吸光度。通过对显色前后的样品和对照品在190~600 nm范围内扫描，结果见图1。发现显色后的芦丁对照品和样品最大吸收略有不同，分别为411 nm和391 nm，未显色的芦丁和样品在相应波长处吸收值都很小，样品显色后411 nm处也有较大吸收，所以我们选择芦丁显色后的最大吸收波长411 nm为检测波长。为消除样品中其他杂质吸收带来的误差，采用不加显色剂的样品溶液作为空白对照。

图1 样品、显色前后吸收光谱图

3.3 提取条件选择 样品溶液的制备中，分别对提取溶剂、提取次数和提取时间进行了选择，发现用75%的乙醇作溶剂比无水乙醇提取率要高，超声提取3次，每次30min能基本提取完全。本实验提取条件为75%乙醇各15 mL超声提取3次，每次30min。

3.4 显色时间及稳定性的考察 样品加入显色剂显色5min后，开始测定其吸光度，每隔5min测定一次，发现在30 min之内，吸光度值不稳定，且逐渐增大，30 min以后，变化值很小，但90 min以后吸光度值不稳定，建议在显色后30~90min内完成测定。此外，实验过程中还发现制备好的样品溶液在第2天、第3天重复测定，吸光度值降低超过5%，所以在总黄酮类含量测定中，建议样品提取制备后马上测定，不要放置过夜。

〔1〕田建华.《本草纲目》彩色图集〔M〕.石家庄：河北科学技术出版社，2007：169.

〔2〕郑宏钩，詹亚华.现代中药材鉴别手册〔M〕.北京：中国医药科技出版社，2001：541-542.

〔3〕徐国钧.中草药彩色图谱〔M〕.2版.福州：福建科学技术出版社，1999：590-591.

〔4〕黄文波，蔡元菊，饶光福.扁蓄总黄酮提取方法的比较研究〔J〕.现代生物医学进展，2008，8（6）：1078-1080.

〔5〕张锋，宋康，王同燕.紫外分光光度法测定白首乌中黄酮类化合物含量方法研究〔J〕.中国食物与营养，2009，30（7）：43-45.

〔6〕张进祥，段吉平.紫外分光光度法测定金莲花中总黄酮的含量〔J〕.中国实验方剂学杂志，2009，15（10）：36-37.

（责任编辑 蒋 康）

Com parative Study of the Total Flavonoids Contents in Rosa Rugosa and Rosa Chinensis

WANGMin,SHAO Dongmei,LIHaiyan,LIShuang,XIAO Huai*
（C ollege of Pharmacy，DaliUniversity，Dali，Yunnan 671000，China）

Objective：To determine the contents of total flavonoids inRosa.rugosaandRosa.chinensis.Methods:75%alcohol and AlCl3colorimetry was used to determine the content of total flavonoids,with rutin as the reference substance.Results:The average recovery was 102.5%and RSD 2.2%,and the contents of total flavonoids in wild and plantR.rugosaandR.chinensiswere 1.94%,0.80%and 2.79%respectively.Conclusion:Thismethod is convenient and accurate,which can offer some foundation to themedical study of sightseeing plants such asR.rugosaandR.chinensis.

R.rugosa;R.chinensis;total flavonoids;contents determination

Q949.751.8

A

1672-2345（2010）12-0013-02

大理学院大学生科研基金资助项目（2009DXSKY23）

2010-06-01

王敏，主要从事药物分析研究.

*通信作者：肖怀，副教授，电话：0872-2257418.