生姜泻心汤对抗顺铂所致小鼠呕吐的实验研究

2010-09-19 07:50成光宇
中国医药指南 2010年33期
关键词:司琼格拉泻心汤

成光宇 王 尚

1 吉林省长春中医药大学附属医院(130021)

2 吉林省长春中医药大学(130117)

源自《伤寒论》的生姜泻心汤,具有和胃降逆、散水消痞之功效。后世医家根据呕吐为胃失和降所致,把生姜泻心汤用于治疗各种病证而见呕吐者,如应用于神经性呕吐、胃扭转、胃癌、胃炎、胰腺炎及因放射治疗所致呕吐和化学治疗引起的呕吐等,均获良效[1]。本实验以药物致呕小鼠为模型,探讨其止呕原理。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

ICR小鼠48只,体质量18~22g,雌雄各半,吉林大学实验动物中心提供。

1.1.2 主要药品及试剂

生姜泻心汤水煎液:制成1g/1mL,置于4℃冰箱保存,临用时按所需浓度配制,吉林省中医院制剂室提供。所有药材均经过鉴定为正品后入药。5-HT、DA 标准液(Sigma 公司产品)。EGF放免药盒(北京北方生物技术研究所)。SP免疫组织化学检测试剂盒(北京北方生物技术研究所)。

1.1.3 主要设备

LD200-2型电子秤(北京长拓锐新科技发展有限公司);EHSY Lab匀浆器(西域集团);5424离心机(德国eppendorf)BP211D电子天平(德国赛多司);FluoroMate FS-2荧光分光光度计(长春博邦科贸有限公司);PowerTome-XL超薄切片机(上海育丰国际贸易有限公司);M331579γ放射免疫计数器(北京中西远大科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组及给药

将48只ICR小鼠随机分为4组,即空白对照组、造模组、生姜泻心汤组、格拉司琼组。适应喂养1周后,分别给模型组、生姜泻心汤组、格拉司琼组小鼠尾静脉注射顺铂0.004mL/g。正常对照组予生理盐水0.02mL/g,生姜泻心汤组给予浓度为100%的生姜泻心汤煎剂0.02mL/g,阳性对照组予格拉司琼0.02mL/g,造模组予生理盐水0.02mL/g,连续给药14d。第14天给药后禁食24h,自由饮水。于第15天处死动物并取材。

1.2.2 取材及实验方法

1.2.2.1 参照王氏法[2],将小鼠断头,迅速收集动脉血,并取脑组织,除去血膜,迅速剥取全脑,去除小脑后将脑组织称重。专置于含有少量冰冷的酸化正丁醇的匀浆器中,在冰水浴中制成匀浆,将匀浆全部转移至具塞刻度离心管内,并用酸化正丁醇补充到4.0ml。经机械振荡5min (120次/min),离心5min (3000转/min),取上清液2.5mL放入另一带塞离心管中,加正庚烷5.0mL和0.1mol/L盐酸1.2mL,振荡5min,离心5min,此时溶液分为上下两层。从上述水相层中,分别吸取0.5mL于2支小试管中,作测定5-HT、DA用。

1.2.2.2 解剖小鼠,找到胃窦部组织,剪下并沿胃大弯剪开胃窦组织,用生理盐水冲洗内容物至干净,放进10%中性福尔马林溶液中固定标本。选取每组中的胃窦组织标本,逐级酒精脱水,二甲苯透明、浸腊,石蜡包埋,常规切片4µm,HE染色。

1.2.2.3 放射免疫法检测EGF

指标检测严格按试剂盒说明书操作。

1.2.2.4 免疫组织化学法测定PCNA

PCNA免疫组织化学染色采用SP法,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封片,PBS代替一抗体作阴性对照。

1.2.3 统计方法

应用SPSS13.0 for Windows统计软件进行统计分析。计量资料应用均数±标准差表示(±s),组间差异采用t检验,P<0.05说明有差异。

2 结 果

2.1 生姜泻心汤对顺铂所致小鼠脑组织5-HT、DA 改变的影响

由表1可见,①化疗用药后小鼠脑组织内5-HT、DA 含量明显提高,与空白对照组比较P<0.01;②生姜泻心汤组小鼠脑组织内5-HT、DA 含量显著低于造模组,P< 0.01;③生姜泻心汤组与格拉司琼组比较,在DA 方面优于格拉司琼,P<0.01;在5-HT方面与之相当,P> 0.05。

表1 各组小鼠脑组织5-HT、DA改变的比较(单位µg/mg ,±s)

表1 各组小鼠脑组织5-HT、DA改变的比较(单位µg/mg ,±s)

生姜泻心汤组与空白对照组比较:**P<0.01;与造模组比较:△P<0.05,△△P<0.01

组别 n DA 5-HT空白对照组 12 0.56±0.05 0.66±0.04造模组 12 0.92±0.03** 0.87±0.03**生姜泻心汤组 12 0.67±0.07 0.73±0.11格拉司琼组 12 0.79±0.03 0.78±0.07

2.2 HE染色病理结果

胃肠黏膜损伤以模型组最明显,黏膜层变薄、萎缩、坏死,淋巴浸润,色苍白,皱襞变平或走向紊乱,有者黏膜表面有黄染黏液被覆;空白组黏膜呈粉红色,有光泽,被覆较多黏液,黏膜皱襞表面光滑,走向规则;生姜泻心汤组和格拉司琼组胃肠黏膜损伤较小,并且有新的组织生成,说明其胃肠组织在修复。

表2 各组EGF含量变化的比较 (单位ng/L,±s)

表2 各组EGF含量变化的比较 (单位ng/L,±s)

注:生姜泻心汤组与其他3组比较:*P<0.05,*P<0.01

组别 n EGF空白对照组 12 0.55±0.07造模组 12 0.38±0.04**生姜泻心汤组 12 0.49±0.06格拉司琼组 12 0.43±0.09

2.3 放射免疫法检测EGF的结果EGF含量

由表2可见,在用化疗药的3组动物中,以生姜泻心汤组EGF含量最高,与造模组相比有显著性差异,P<0.05、P<0.01;与格拉司琼组比较无显著性差异;与空白组比较无显著性差异。格拉司琼组与其他3组比较均无差异。

2.4 免疫组织化学法测定PCNA的结果

PCNA以细胞核内出现明显的棕褐色颗粒为阳性。每张图片选取阳性细胞最密集处,用高倍镜(40×)计数200个细胞,算出阳性细胞百分率。由表3可见,在用化疗药的3组动物中,以生姜泻心汤组PCNA的阳性表达率最高,阳性率与造模组相比有显著性差异,P<0.05、P<0.01;生姜泻心汤组PCNA阳性表达率与空白组差异无显著性;生姜泻心汤组与格拉司琼组相比有差异,P<0.05。造模组与格拉司琼组PCNA阳性表达率有明显的差异P<0.05、P<0.01。

表3 各组PCNA阳性率表达情况的比较(单位%,±s)

表3 各组PCNA阳性率表达情况的比较(单位%,±s)

注:生姜泻心汤组与其他3组比较:*P<0.05,**P<0.01;格拉司琼组与其他3组比较:△P<0.05,△△P<0.01

组别 n PCNA阳性率空白对照组 12 35.9±3.66造模组 12 20.6±3.48 **△△生姜泻心汤组 12 36.1±3.46△格拉司琼组 12 30.8±3.18*

3 讨 论

顺铂在临床上已被公认为传统的致呕药物,其在神经递质方面致呕作用的机制,主要是引起外周及中枢神经5-HT、DA 神经递质的升高,使迷走神经兴奋而产生呕吐反射。神经递质5-HT、DA 在化疗中起着十分关键的作用。现临床上常用的对抗化疗呕吐的药物便主要是5-HT受体阻断剂及DA受体阻断剂,因此本实验选用5-HT、DA为观察指标。同时,通过观察顺铂对胃肠组织的损伤程度及恢复情况,可以通过检测EGF的含量及PCNA的阳性表达率来判断。

生姜泻心汤对顺铂所致小鼠脑组织内5-HT、DA改变的影响实验结果显示,生姜泻心汤组与格拉司琼组比较,在DA方面优于格拉司琼,P<0.01;在5-HT方面与之相当,P>0.05。说明小半夏汤有明显对抗顺铂导致小鼠脑组织5-HT、DA含量分泌增高的作用,且作用效果优于格拉司琼。由此可推断生姜泻心汤对抗化疗药物顺铂所致呕吐的作用机制主要是影响5-HT、DA分泌而起作用。EGF存在于颌下腺、十二指肠腺和胰腺中,是一种多效生长因子,它的主要功能是促进细胞增生,参与胃肠上皮细胞的增生、成熟、分化,在生理条件下调节胃肠道的生长发育,还具有营养和保护胃肠道的作用。EGF也是反映胃肠组织修复的可靠指标之一。本实验结果表明,生姜泻心汤能使EGF的含量提高,EGF可促进胃肠上皮细胞生长繁殖,对胃肠黏膜有一定的修复作用。与造模组比较,有着明显的统计学意义。增殖细胞核抗原(PCNA)是一种酸性核蛋白(相对分子质量3600),为DNA多聚酶的一种辅助蛋白,直接参与DNA的合成,仅在增殖的细胞中合成与表达。因此PCNA常作为测定组织细胞增殖水平的指标之一,具有实用性和可行性。本实验结果表明,生姜泻心汤能提高PCNA的阳性表达率,与造模组比较,具有明显的统计学意义。

[1]闫兆平,黄文甫,卫向阳等.生姜泻心汤治疗反流性食管炎的临床观察[J].华西医学,2010,23(5):840-841.

[2]麻春杰.半夏泻心汤对实验性大鼠胃运动的影响[J].实用中医药杂志,1996,12(4):31.

猜你喜欢
司琼格拉泻心汤
格拉迪丝·韦斯特:协助开发全球定位系统的隐藏人物
善良带来的好运
意外的好运
重复使用5-HT3受体拮抗剂预防多日化疗相关性恶心呕吐的疗效和安全性分析*
生姜泻心汤治疗伊立替康导致的结直肠癌小鼠迟发性腹泻
H PLC测定盐酸帕洛诺司琼原料药中光学异构体
慢性胃炎采用半夏泻心汤治疗的临床观察
格拉司琼对于术后恶心呕吐的预防和治疗
大黄黄连泻心汤加味治疗胃癌癌前病变30例
半夏泻心汤治疗慢性咳嗽42例