HPLC测定金刚藤颗粒中薯蓣皂苷元的含量

朱祥松 张德军

1 武汉大学（430000）

2 湖北省鄂州市药品检验所（436000）

金刚藤颗粒为我市某医院制剂，由百合科植物菝葜Smilas China L.的根茎经加工制成，具有清热解毒，消肿散结的功效，临床用于附件炎和附件炎性包块的治疗。菝葜属植物中含有甾体皂苷、黄酮、植物甾醇等多种化学成分[1]。该制剂的质量标准中含量测定采用薄层扫描法，操作繁琐，专属性不强，且使用毒性较强的苯作为溶剂。本文参考文献[2]采用了HPLC法对其中薯蓣皂苷的水解产物薯蓣皂苷元进行含量测定，方法简单，结果准确，重现性好，为该制剂质量控制提供了有效方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2000型高效液相色谱仪，包括P2000输液泵、UV2000紫外检测器、TJ2000色谱工作站（北京创新通恒有限公司）；BS21S电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；SK-3300超声仪（功率300w，频率40kHz,上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试药

薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号1359-200001）；金刚藤颗粒（鄂州市某医院，批号为20090321、20090615、20091216）；乙腈为色谱纯；水为二次重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性

色谱柱：Kromasil-100 C18 （250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（90∶10）；检测波长：203nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL。理论塔板数按薯蓣皂苷元峰计算应不少于4000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取经60℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品适量，加乙腈超声使溶解，制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。

图1 HPLC图谱

表1 加样回收试验结果（n=5）

表2 样品含量测定结果

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品，研细，称取粉末约10g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，浸渍过夜，加热回流至提取液近无色，回收溶剂至约100mL，加热回流水解2.5h，放冷，用石油醚（60～90℃）振摇提取4次，每次40mL，合并石油醚提取液，回收溶剂至干，残渣加乙腈溶解并转移至10mL量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备

按处方比例和制法制成不含金刚藤的阴性样品，按照上法制备阴性样品溶液。

2.3 干扰试验

在上述色谱条件下，供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致，薯蓣皂苷元峰与其它峰完全分离、峰形较理想，阴性样品无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察

精密称取薯蓣皂苷元对照品12.05mg，置25mL容量瓶中，加乙腈超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别量取储备液1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。取上述4种浓度的溶液及储备液，共5个梯度浓度的溶液，用定量环分别进样20μL，记录色谱图，以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，方程为：Y=3.5689×104X+4.2868×103，r=0.9998。结果表明：在1.928～9.640μg范围内，薯蓣皂苷元的进样量与峰面积呈现良好线性关系。.

2.5 精密度试验

取对照品溶液，连续进样5次，每次20μL，测定薯蓣皂苷元峰面积，RSD为0.9%（n=5）。

2.6 稳定性试验

将供试品溶液常温放置，分别于0、2、4、6、8、12h进样20μL，测定薯蓣皂苷元峰面积，RSD为1.5%（n=5）。结果表明，供试品溶液在12h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取批号为20091216供试品5份，分别按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按照上述相同色谱条件测定，计算，薯蓣皂苷元含量的RSD为1.9%（n=5）。

2.8 加样回收试验

精密称取重复性试验项下各份余下的已测定含量的金刚藤颗粒5份，每份约5g，分别加入对照品约2mg，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样20μL，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取金刚藤颗粒，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，取对照品溶液与供试品溶液分别进样20μL，测定，以外标法（峰面积）计算含量，结果见表2。

3 讨 论

3.1 菝葜的质量标准[2]中供试品回流时间为2h，本试验中由于供试品量的增加，为考察水解是否完全，选用了2.0、2.5、3.0h进行水解，结果三者测定值分别为0.36、0.45、0.44mg/g，故选择2.5h。

3.2 为考察供试品是否提取完全，分别进行了4、5、6次提取，结果三者测定值分别为0.43、0.44、0.43mg/g，说明4次已基本提取完全，故选择提取4次。

3.3 薯蓣皂苷元在乙腈中振摇溶解不太理想，通过超声处理可得到较好溶解。

[1]赵钟祥,冯育林,阮金兰等.菝葜化学成分及其抗氧化活性的研究[J].中草药,2008,39(7):975-977.

[2]国家药典委员会.中国药典2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005:216.