HPLC测定金刚藤颗粒中薯蓣皂苷元的含量

2010-09-21 08:05朱祥松张德军
中国医药指南 2010年33期
关键词:皂苷元薯蓣乙腈

朱祥松 张德军

1 武汉大学(430000)

2 湖北省鄂州市药品检验所(436000)

金刚藤颗粒为我市某医院制剂,由百合科植物菝葜Smilas China L.的根茎经加工制成,具有清热解毒,消肿散结的功效,临床用于附件炎和附件炎性包块的治疗。菝葜属植物中含有甾体皂苷、黄酮、植物甾醇等多种化学成分[1]。该制剂的质量标准中含量测定采用薄层扫描法,操作繁琐,专属性不强,且使用毒性较强的苯作为溶剂。本文参考文献[2]采用了HPLC法对其中薯蓣皂苷的水解产物薯蓣皂苷元进行含量测定,方法简单,结果准确,重现性好,为该制剂质量控制提供了有效方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2000型高效液相色谱仪,包括P2000输液泵、UV2000紫外检测器、TJ2000色谱工作站(北京创新通恒有限公司);BS21S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);SK-3300超声仪(功率300w,频率40kHz,上海科导超声仪器有限公司)。

1.2 试药

薯蓣皂苷元对照品(中国药品生物制品检定所,批号1359-200001);金刚藤颗粒(鄂州市某医院,批号为20090321、20090615、20091216);乙腈为色谱纯;水为二次重蒸水,其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性

色谱柱:Kromasil-100 C18 (250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(90∶10);检测波长:203nm;流速:1.0mL/min;柱温:35℃;进样量:20μL。理论塔板数按薯蓣皂苷元峰计算应不少于4000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取经60℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品适量,加乙腈超声使溶解,制成每1mL含0.2mg的溶液,即得。

图1 HPLC图谱

表1 加样回收试验结果(n=5)

表2 样品含量测定结果

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品,研细,称取粉末约10g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醇适量,浸渍过夜,加热回流至提取液近无色,回收溶剂至约100mL,加热回流水解2.5h,放冷,用石油醚(60~90℃)振摇提取4次,每次40mL,合并石油醚提取液,回收溶剂至干,残渣加乙腈溶解并转移至10mL量瓶中,加乙腈至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备

按处方比例和制法制成不含金刚藤的阴性样品,按照上法制备阴性样品溶液。

2.3 干扰试验

在上述色谱条件下,供试品溶液与对照品溶液主峰的保留时间一致,薯蓣皂苷元峰与其它峰完全分离、峰形较理想,阴性样品无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察

精密称取薯蓣皂苷元对照品12.05mg,置25mL容量瓶中,加乙腈超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为储备液。分别量取储备液1.0、2.0、3.0、4.0mL至5mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀。取上述4种浓度的溶液及储备液,共5个梯度浓度的溶液,用定量环分别进样20μL,记录色谱图,以进样量(X,μg)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归,方程为:Y=3.5689×104X+4.2868×103,r=0.9998。结果表明:在1.928~9.640μg范围内,薯蓣皂苷元的进样量与峰面积呈现良好线性关系。.

2.5 精密度试验

取对照品溶液,连续进样5次,每次20μL,测定薯蓣皂苷元峰面积,RSD为0.9%(n=5)。

2.6 稳定性试验

将供试品溶液常温放置,分别于0、2、4、6、8、12h进样20μL,测定薯蓣皂苷元峰面积,RSD为1.5%(n=5)。结果表明,供试品溶液在12h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取批号为20091216供试品5份,分别按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按照上述相同色谱条件测定,计算,薯蓣皂苷元含量的RSD为1.9%(n=5)。

2.8 加样回收试验

精密称取重复性试验项下各份余下的已测定含量的金刚藤颗粒5份,每份约5g,分别加入对照品约2mg,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,进样20μL,结果见表1。

2.9 样品含量测定

取金刚藤颗粒,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,取对照品溶液与供试品溶液分别进样20μL,测定,以外标法(峰面积)计算含量,结果见表2。

3 讨 论

3.1 菝葜的质量标准[2]中供试品回流时间为2h,本试验中由于供试品量的增加,为考察水解是否完全,选用了2.0、2.5、3.0h进行水解,结果三者测定值分别为0.36、0.45、0.44mg/g,故选择2.5h。

3.2 为考察供试品是否提取完全,分别进行了4、5、6次提取,结果三者测定值分别为0.43、0.44、0.43mg/g,说明4次已基本提取完全,故选择提取4次。

3.3 薯蓣皂苷元在乙腈中振摇溶解不太理想,通过超声处理可得到较好溶解。

[1]赵钟祥,冯育林,阮金兰等.菝葜化学成分及其抗氧化活性的研究[J].中草药,2008,39(7):975-977.

[2]国家药典委员会.中国药典2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005:216.

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