HPLC测定肿节风片中异秦皮啶和迷迭香酸的含量

肖小武， 李婷婷， 宁火华， 罗跃华*

(1.南昌大学药学系，江西南昌330046;2.江西省食品药品检验所，江西南昌330029)

肿节风片由肿节风干浸膏加工精制而成的单方制剂，肿节风为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb)Nakai的干燥全株，二者均收载于《中国药典》2005年版一部，具有清热凉血，活血消斑，祛风通络之功效［1］。原标准以异嗪皮啶为含量测定指标，但异嗪皮啶的抗炎活性未能得到充分的证明，黄明菊［2］等人从肿节风浸膏中成功分离得含量较高的迷迭香酸及其它7个化合物，且现已证明迷迭香酸具有抗菌作用、抗炎作用、抑制血管生成和诱导细胞凋亡、抗血栓和抗血小板聚集、还具有抗氧化、抗病毒、抗过敏等生物活性［3-4］。表明肿节风的药理作用和临床适用症与迷迭香酸的药理作用相吻合［5］。根据《中国药典》2010年版一部标准研究课题研究的要求，本实验参考文献［1，6］，建立了高效液相色谱法同时测定肿节风片中异秦皮啶和迷迭香酸的含量，从而为提高肿节风片的质量标准，更好地控制其质量提供有效的方法。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪:Aglient 1100高效液相色谱仪，紫外可变检测器 ，Aglient 1100化学工作站。BUG25-06型超声波清洗机(上海必能信超声有限公司)。对照品异秦皮啶(批号:110837-200304，来源:中国药品生物制品检定所)和迷迭香酸(批号:MW080504，来源:SIGMA-ALDRICH)。肿节风片由江西天施康中药股份有限公司提供。乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇均为分析纯;超纯水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 采用Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80);流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;检测波长为342 nm。理论板数以异秦皮啶峰计算应不低于2 000，异秦皮啶和迷迭香酸的分离度大于1.5。见图1。

图1 混合对照样品溶液(A)、供试品溶液(B)、空白样品溶液(C)HPLC色谱图

2.2 溶液配制

对照品溶液的制备 取异秦皮啶对照品、迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL各含10μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取肿节风片10片，除去糖衣，精密称定，研细，取50 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率25 kHz)40 min，放冷，再精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系考察 分别精密量取2.2项下的对照品溶液配制不同浓度进样，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到异秦皮啶和迷迭香酸的回归方程分别为:Y=3 006.04 X+1.447 8 R2=0.999 99，Y=1 723.79X －4.944 1 R2=0.999 92。结果表明，异秦皮啶和迷迭香酸分别在0.011～2.214μg和0.021 2～2.198μg范围内线性关系良好。

2.4 稳定性试验 取同一批供试品溶液(批号:06121901)照2.2项下供试品制备方法制备溶液，分别于 0、4、11、16、23、32 h 进样 10 μL，测定峰面积。结果异秦皮啶和迷迭香酸的RSD(n=6)分别为0.63%和0.83%。表明供试品溶液在32 h内基本稳定。

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液(异秦皮啶浓度:0.022 3μg/mL;迷迭香酸浓度:0.022 34μg/mL)，重复进样6次，测定峰面积。结果异秦皮啶和迷迭香酸的RSD(n=6)分别为1.0%和1.1%。

2.6 重复性试验 取同一批肿节风片样品(批号:06121901)6份，照2.2项下供试品制备方法制备溶液，进样10μL，测定峰面积，结果异秦皮啶和迷迭香酸含量平均值(n=6)分别为2.77 mg/g和12.18 mg/g。RSD分别为0.80%和1.06%。

2.7 加样回收试验 取已知含量的肿节风片样品(批号:06121901)适量，研细，取约 25 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入对照品溶液(异秦皮啶浓度为0.002 8 mg/mL迷迭香酸浓度为0.009 6 mg/mL)25 mL。进样10μL，测定峰面积，结果异秦皮啶和迷迭香酸的平均回收率(n=6)98.7%(RSD为2.22%)及96.9%(RSD为2.76%)。见表1、2。

表1 异秦皮啶回收率试验结果

2.8 样品测定 取10批肿节风片按2.2项下供试品溶液制备方法制备溶液，进样10μL，测定峰面积，按外标法以峰面积计算含量。结果见表3。

3 讨论

3.1 不同提取时间的比较 试验中曾考察了10、15、20、30、40 min和60 min不同提取时间的比较，含量数据结果表明40 min和60 min含量测定结果基本一致，说明超声提取40 min已能达到效果，故确定超声处理时间为40 min。

表2 迷迭香酸回收率试验结果

表3 肿节风片中异秦皮啶和迷迭香酸的含量测定(n=2)

3.2 检测波长的选择 根据异秦皮啶和迷迭香酸在400～200 nm波长范围内进行光谱扫描，结果异秦皮啶在342.20 nm及212.00 nm处有最大吸收，迷迭香酸在328.90 nm及207.40 nm处有最大吸收。取供试品溶液和对照品溶液分别在342.0 nm与329.0 nm处测定，结果样品在342.0 nm处分离度较好，峰杂质少。故确定342.0 nm为测定波长。

3.3 样品测定 从测定的结果看，有一批的含量明显高于其他批次样品，可能是由于药材受不同生长环境以及该药材干浸膏提取等方面的影响而成的，但样品的测定结果均在标准规定的范围之内。

［1］中国药典［S］.一部.2005:502.

［2］黄明菊，李妍岚，曾光尧，等.肿节风化学成分研究［J］.中南药学，2007，5(5):459-461.

［3］李伟光，粱敬钰.迷迭香酸的研究进展［J］.海峡药学，2004，16(1):1-4.

［4］孙 峋，王靖超，李洪涛，等.迷迭香酸抗菌机理研究［J］.青岛大学学报(自然科学版)，2005，18(4):41-44.

［5］郁建生，李英伦.草珊瑚研究进展［J］.安徽农业科学，2005，33(12):2390-2392.

［6］吴 良，袁干军，苏秋玲.高效液相色谱法测定迷迭香中迷迭香酸的含量［J］.海南医学院学报，2006，12(2):112-114.