大黄黄连泻心汤、理中丸对模型大鼠胃组织PGE2含量的影响

李冀，于海，蒋蕾，柴剑波，赵伟国，毕珺辉

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

伴随人类现代思维模式寻觅客体本质属性的渴求，单纯的中医症候模型和西医病因病理模型已经难以满足对中医药本质科学研究的需求，遂使学界尤为关注病证结合动物模型的探究与建立。

本研究依据“病证结合”理论，将消化性溃疡病与中医寒热证相结合，创建消炎痛型及水浸应激型胃溃疡中医寒热证动物模型，采用“以方测证”手段，探讨了寒性方剂大黄黄连泻心汤、热性方剂理中丸对消炎痛型及水浸应激胃溃疡寒热证模型大鼠胃组织PGE2含量的影响。

1 实验材料及药物制备

1.1 实验动物

清洁级Wistar大鼠，黑龙江中医药大学药物安全性评价中心(GLP)，提供合格证号SCXK(京)2007－0001。

1.2 实验用药

热因素:辣椒水、乙醇混悬液。将辣椒粉过120目筛，溶入60%无水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混悬液。

寒因素:氢氧化钠(NaOH)，称取6g白色颗粒状NaOH，溶入500mL 双蒸水中(0.3mol·L－1)。

冰水:冷冻保存，使用时提前取出溶化。

大黄黄连泻心汤、理中丸均按原方药量及比例制备，其中，大黄黄连泻心汤浓缩至每毫升含0.5g生药量，理中丸浓缩至每毫升含1g生药量的液体，冰箱存储备用。

1.3 主要仪器设备

DY89－Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司);HH系列电热恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂);Sgnergy HT全自动酶标仪洗板机(Anthos Labtee instruments made in Austtria);PL202－S/00型电子天平(上海梅特勒－托利多集团)。

1.4 实验试剂

医用酒精(黑龙江华润酒精有限公司);甲醛(分析纯，天津市博大化工有限公司);乙醚(分析纯，上海化学试剂采购供应站);生理盐水(哈药集团制药六厂);盐酸(上海化学试剂采购供应站);NaOH(天津市博大化工有限公司);冰乙酸(上海化学试剂采购供应站);PGE2试剂盒(美国RD公司)。

2 实验方法

2.1 分组

两模型组各取用Wistar大鼠160只，体重180～220g，雌雄各半，给予标准的大鼠食物和水，实验前大鼠在实验室内习服7天。

消炎痛模型按体重随机分为6组:即空白对照组10只、单消组(消炎痛模型)30只、热消组(热因素+消炎痛注射)30只、寒消组(寒因素+消炎痛注射)30只、单热组(单纯热因素)30只、单寒组(单纯寒因素)30只。

水浸应激模型按体重随机分为6组:即空白对照组10只、单水组(水浸应激模型)30只、热水组(热因素+水浸应激)30只、寒水组(寒因素+水浸应激)30只、单热组(单纯热因素)30只、单寒组(单纯寒因素)30只。

2.2 造模

2.2.1 胃寒热模型

胃热模型:灌服8%干辣椒粉的60%乙醇混悬液，每日2 次，10mL·kg－1，造模 7d。

胃寒模型:灌服冰水和0.3mol·L－1NaOH，每日各 1 次，10mL·kg－1，造模7d。

2.2.2 消炎痛型胃溃疡模型的复制方法

大鼠腹腔注射消炎痛10mg·kg－1(溶于5%NaHCO3溶液中)。

2.2.3 束缚水浸应激胃溃疡模型的复制方法

大鼠用乙醚麻醉后，将四肢扎绑并排固定于木板上。然后将其浸入23℃的恒温水槽中，液面保持在大鼠胸骨剑突水平。

2.3 给药

将各组动物分别按上述胃寒、热证造模方法，进行寒热因素灌胃，给予相应造模剂;模型组及空白对照组则给予等体积生理盐水，连续7d。

寒热因素造模后，将第一步中受试大鼠(除空白对照组)，在各自组别内再按体重随机分成3组，每组10只，即:

单水(消)组分为:单水(消)组、单水(消)大组、单水(消)理组;

热水(消)组分为:热水(消)组、热水(消)大组、热水(消)理组;

寒水(消)组分为:寒水(消)组、寒水(消)大组、寒水(消)理组;

单热组分为:单热组、单热大组、单热理组;

单寒组分为:单寒组、单寒大组、单寒理组。

按组别，各给药组分别给予相应治疗方剂，大黄黄连泻心汤 1.8g·Kg－1，理中丸 3.6g·kg－1;每天 2 次;单水(消)组、热水(消)组、寒水(消)组、单热组、单寒组及空白对照组给予等体积生理盐水，连续4d;末次给药后将受试大鼠禁食不禁水30h(注意勿使动物食入粪便和垫料等杂物，以免影响造模结果)，并于消炎痛及水浸应激造模开始前30min，再给药1次。

2.4 取材

分别于消炎痛腹腔注射7h后，水浸应激7h后，处死动物，准确称取大鼠胃组织0.3～0.4g，按重量体积比加9倍的生理盐水制成10%的匀浆，2500r·min－1离心10min，取上清，－20℃冻存备用。

2.5 测定

胃组织PGE2含量测定按照试剂盒说明书进行。

2.6 统计学处理

所有数据通过SPSS 17.0软件包用单因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法进行两两比较检验，用(±s)表示结果。

3 实验结果

3.1 寒热方剂对水浸应激型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响 结果见表1。

表1 寒热方剂对水浸应激型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响(±s)

表1 寒热方剂对水浸应激型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响(±s)

注:与空白组比较，1)P<0.01;与模型组比较，2)P<0.01，3)P<0.05;与寒水组比较，4)P<0.05。

干预因素组别 n 理中丸 n大黄黄连泻心汤n 未给予治疗药物寒水 9 16.87±2.012)7 8.34±2.99 8 9.94±2.811)－ 10 18.54±2.15热水 8 14.48±2.73 8 15.8±1.663) 9 13.14±2.111)单寒 9 17.25±1.422)8 11.52±3.45 10 11.48±2.091)单热 10 14.05±1.46 8 16.80±2.893)10 14.02±2.511)单水 － － 1012.63±2.391)4)空白 －

由表1可知:单水、寒水、热水、单寒、单热组大鼠胃组织PGE2含量均明显低于空白组，比较具有显著性差异(P<0.01)。寒水理与寒水、单寒理与单寒、热水大与热水、单热大与单热各组比较，PGE2含量均明显升高，比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。寒水大与寒水、单寒大与单寒、热水理与热水、单热理与单热，热水与单水，寒水与单寒，热水与单热各组比较，胃组织PGE2含量无显著性差异(P>0.05)。寒水组PGE2含量明显低于单水组，比较具有显著性差异(P<0.05)。

3.2 寒热方剂对消炎痛型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响

由表2可知:单消、寒消、热消、单寒、单热组大鼠胃组织PGE2含量均明显低于空白组，比较具有显著性差异(P<0.01)。寒消理与寒消、单寒理与单寒、热消大与热消、单热大与单热各组比较，PGE2含量均明显升高，比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)，寒消大与寒消、单寒大与单寒、单热理与单热、热消理与热消、寒消与单寒、寒消与单消各组比较，胃组织PGE2含量无显著性差异(P>0.05)。热消与单消、热消与单热各组比较，PGE2含量均明显降低，比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。

表2 寒热方剂对消炎痛型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响(±s)

表2 寒热方剂对消炎痛型胃溃疡大鼠胃组织PGE2含量的影响(±s)

注:与空白组比较，1)P<0.01;与模型组比较，2)P<0.01，3)P<0.05;与热消组比较，4)P<0.01，5)P<0.05。

干预因素组别 n 理中丸 n大黄黄连泻心汤n 未给予治疗药物寒消 8 13.78±2.072)8 9.05±1.37 9 9.68±1.401)－ 10 17.23±2.87热消 8 9.66±1.42 8 12.39±1.412)9 8.55±1.191)单寒 9 13.42±2.022)9 10.83±1.52 10 9.41±1.821)单热 9 10.34±1.63 9 13.13±1.503)9 11.03±1.611)4)单消 － － 9 10.37±1.681)5)空白 －

4 讨论

1910年，Schwartz提出“无酸即无溃疡”的设想，即溃疡只发生于黏膜与胃酸接触的部位［1］，提示胃酸分泌过多是消化性溃疡发生的因素之一。前列腺素广泛地存在于人体中，具有多样的生理活性。胃肠黏膜中主要含有前列腺素E2、F2、α和J，其中前列腺素E系列具有抑制胃酸分泌，促进消化道溃疡愈合，保护胃和十二指肠黏膜的作用。前列腺素是首先被发现具有细胞保护作用的内源性物质，PGE2缺乏是引起消化性溃疡的重要因素之一。另外还有研究报道［2］，前列腺素可能通过刺激胃黏液的合成和分泌，促进HCO的分泌，增加表面磷脂的生成，加强胃黏膜屏障的疏水性;以及保护胃黏膜微循环结构的完整，维持胃黏膜的血液供应，保护增殖区细胞和黏膜上皮的更新及修复，抑制运动过强等机制来实现对胃黏膜的保护作用。前列腺素在胃黏膜保护机制中居中心地位，起到加强其他因素的用［3］。本研究结果表明:

①无论是病因素(单纯造模因素)、还是证因素(单纯寒热因素)，或者是病证结合因素(模型与寒热因素结合)均可致胃组织中PGE2含量的降低，似可认为诸因素是通过减少胃组织中PGE2的合成，进而削弱其抑制胃酸分泌、保护胃和十二指肠黏膜的作用，从而促进溃疡的形成。

②“病证结合”的造模方法与单纯“病”或“证”的造模方法相比，其中寒因素结合水应激与单纯寒因素，热因素结合水应激与单纯热因素、单纯水应激，以及寒因素结合消炎痛与单纯寒因素、单纯消炎痛，五组比较，胃组织中PGE2含量无明显差别，提示在溃疡形成过程中，“病”和“证”两方面因素并未以协同作用的形式对胃组织中PGE2含量进行干预，而热因素结合消炎痛与单纯热因素及单纯消炎痛，寒因素结合水应激与单纯水应激，三组相比较，胃组织中PGE2含量明显降低，提示寒因素与水应激、热因素与消炎痛在对胃组织中PGE2含量的影响方面具有协同作用，说明在溃疡的形成过程中，“病”和“证”共同加重了对胃组织中PGE2的合成和释放的抑制，加速了溃疡的形成。

③大黄黄连泻心汤、理中丸在病证结合模型的治疗上体现了有选择性的不同证治效应。热性方剂理中丸对单纯寒因素及消炎痛型与水浸应激型胃溃疡寒证模型大鼠胃组织PGE2含量的降低具有升高作用，寒性方剂大黄黄连泻心汤对此类模型无作用。同时，寒性方剂大黄黄连泻心汤对单纯热因素及消炎痛型与水浸应激型胃溃疡热证模型大鼠胃组织PGE2含量的降低亦具有升高作用，热性方剂理中丸对此类模型无作用。这从实验研究方面印证了“寒者热之、热者寒之”法则与“方证相应”模式的客观性。

综上所述，通过寒热不同性质的方剂对施加寒热因素的消炎痛型和水浸应激型胃溃疡模型大鼠胃组织中PGE2含量影响的比较，既说明寒性方剂大黄黄连泻心汤对热性胃溃疡的治疗和热性方剂理中丸对寒性胃溃疡的治疗，可通过提升大鼠胃组织中PGE2含量而实现，又证明了本实验所采用的“病证结合”的胃溃疡造模方法确切可行。

［1］ 孟宪镛.消化性溃疡的发病机理［J］.交通医学，1991(5):17.

［2］ 吴灵飞，郑万强.前列腺素对阿司匹林诱发大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用［J］.汕头大学医学院学报，1996(1):28－31.

［3］ 刘春英，王丽杰，孙梅.PGE2在内毒素诱导的幼鼠急性胃黏膜损伤中的变化及PAF受体拮抗剂对其影响［J］.世界华人消化杂志，2006，14(2):163 －166.