高效液相色谱法测定心肌炎颗粒中丹酚酸B含量

苑相爱

(山东省安丘市中医院，山东 安丘 262100)

心肌炎颗粒是我院自行研制的医院制剂，由丹参、地黄、元参、苦参、麦冬等中药经科学方法提取精制而成，具有清热解毒、益气养阴、养心复脉的作用，主要用于病毒性心肌炎的治疗。丹参是方中主药，为控制产品内在质量，保证疗效，笔者以其主要成分丹酚酸B的含量为指标，采用高效液相色谱（HPLC）法[1]进行了定量分析，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010型高效液相色谱仪（日本岛津）；十万分之一电子分析天平（日本岛津）；定量毛细管（Drummond Scientific Co.USA）；超纯水器（Millipore）；超声波发生器（上海吉理超声仪器厂）。硅胶G板（青岛海洋化工厂）；中性氧化铝（100以上）；丹酚酸B对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号为11562－200504）；心肌炎颗粒（本院制剂室提供，批号分别为 080503，080603，080607）；阴性样品（自制）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS 柱(250 mm ×4.6 mm，5!m)；流动相：甲醇 －乙腈 －甲酸 －水(30∶10∶1∶59)；检测波长：286 nm；柱温：室温。

2.2 溶液制备

精密称取常温减压干燥12 h的丹酚酸B对照品1.4 mg，加甲醇至10 mL，制成质量浓度为0.14 g/L的对照品溶液。取本品5 g，研细，混匀，精密称取1.0 g，置20 mL量瓶中，加70%甲醇10 mL,超声提取30 min,精密量取1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取处方中除丹参外的其余各药，按供试品处方量投料比例制成阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10!L，注入液相色谱仪，测定。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于3 000，并且与其他成分峰分离良好。所得阴性对照品溶液色谱图中，在供试品溶液色谱中丹酚酸B相应位置上未出现吸收峰，表明处方中其他各味药对丹酚酸B色谱峰测定无干扰。结果见图1。

图1 高效液相色谱图

标准曲线制备：分别吸取一定量的丹酚酸B对照品贮备液，加体积分数为75%的甲醇稀释成丹酚酸B质量浓度为2,4,8,12,16,20,24!g/mL的溶液。依次进样10!L，每个质量浓度测定3次以上。以峰面积（Y）对质量浓度（X）进行回归，得回归方程 Y=9.85 X －1.25，r=0.999 8（n=7）。结果表明，丹酚酸 B 质量浓度在2～24!g/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取质量浓度为0.14 g/L的丹酚酸B对照品溶液10!L，连续测定5次。结果其峰面积的 RSD为1.97%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一批（批号为080503）供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10，12 h 时进样，按上述色谱条件测定。结果峰面积的RSD为1.39%（n=7），表明供试品溶液在12 h内稳定。

重现性试验：取同一批（批号为080603）样品6份，按供试品溶液制备方法处理并依法测定。结果的 RSD为2.6%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品适量，加入对照品溶液（质量浓度分别为 2.5，12.0，22.0!g/mL），平行操作 2 次，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品3批，依法测定丹酚酸B的含量。结果批号为080503，080603，080607 的样品中，丹酚酸 B 的含量分别为 0.1430，0.1510，0.135 6 mg/g（n=3）。

3 讨论

丹酚酸B药理作用明确且在丹参药材中的含量较高，2005年版《中国药典（一部）》规定丹参药材中丹酚酸B含量不得低于3%[1],因此以丹酚酸B为指标可有效控制该制剂质量。由于丹酚酸B受热时不稳定,因此在样品制备方法上选择甲醇超声提取。采用甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）为流动相进行色谱分析，结果分离效果良好，峰形较理想。方法学考察结果表明，该法操作简便、结果准确、重现性好,可有效控制心肌炎颗粒的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:附录"B，52 －53.