阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者外周血HBV-DNA和Th1/Th2平衡的调节作用

黄遵仁，罗利飞

(1.浙江省浦江县中医院感染科，浙江 金华 322200； 2.浙江省台州医院检验科，浙江 台州 317000）

乙型肝炎的发病主要是机体清除乙型肝炎病毒（HBV）引发的细胞免疫病理改变，Th1/Th2的平衡在HBV感染人体后的病情发展方向中起着决定作用[1－2]，白细胞介素 4（IL－4）和干扰素 －γ（IFN－γ）是维持Th1/Th2细胞比例的关键分子。阿德福韦酯是一种新型核苷类抗HBV药物，通过竞争脱氧腺苷三磷酸底物，使HBV－DNA链的延长终止而抑制HBV－DNA的复制，从而使慢性乙型肝炎患者病毒学、肝功能和组织学指标得到改善[3－4]，但国内外关于其对外周血Th1/Th2细胞因子的调节作用报道均较少。笔者通过观察阿德福韦酯对慢性乙型肝炎患者外周血HBV－DNA及IL－4、IFN－γ含量的影响，探讨其治疗慢性乙型肝炎的疗效及对外周血Th1/Th2细胞因子的调节作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年1月至12月在我院感染科门诊就诊或住院治疗的轻中度慢性乙型肝炎患者共40例作为治疗组，患者诊断均符合2000年西安全国病毒性肝炎会议制订的诊断标准[5]。其中男25例，女 15 例；年龄 17～58岁，平均（37.2±9.8）岁。所有患者治疗前HBV－DNA均为阳性，排除其他肝炎病毒重叠感染。另选择30例正常健康体检者作为对照组，其中男19例，女11例；年龄18～60岁，平均（38.5±11.3）岁。两组研究对象性别、年龄比较无统计学差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法

治疗组口服阿德福韦酯(江苏正大天晴有限公司)10 mg，每日1次，连续服用12周。在治疗前和治疗12周后检测患者外周血HBV－DNA和IL－4及IFN－γ含量，根据治疗后HBV－DNA复制指标阴转情况、乙型肝炎病毒e抗原及e抗体（HBeAg/HBeAb）转换情况分为治疗有效组与治疗无效组。对照组上述指标只测定1次。

1.3 检测方法

用淋巴细胞分离液从肝素抗凝血中分离单个核细胞(PBMC)，调整细胞浓度为1×109/mL，加入植物血凝素(PHA)100 g/L，于37℃、5%CO2培养箱中培养72 h，收集上清液。采用双抗体夹心ELISA法检测PBMC培养上清液中IL－4和IFN－γ含量。试剂盒购于法国Daclone公司，严格按试剂盒说明书进行操作。HBVDNA采用荧光探针PCR法检测，试剂由深圳匹基生物技术开发有限公司提供。HBeAg及HBeAb的检测试剂为上海科华公司产品。

1.4 统计学方法

结果以均数±标准差(X ±s)表示，以 SPSS 10.0软件包进行统计分析，采用 t检验。

2 结果

结果见表1。可见，与对照组比较，治疗组患者治疗前外周血培养上清PBMC中IL－4水平明显上升，而IFN－γ水平明显下降(P＜0.01)，治疗 12周后 IL－4水平和 HBV－DNA含量明显下降，IFN－γ水平明显上升(P＜0.05或 P＜0.01)，但治疗有效组较治疗无效组变化更明显(P＜0.01)。

表1 外周血培养上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

表1 外周血培养上清PBMC中IL－4和IFN－γ水平及HBV－DNA含量(±s，ng/L)

注：与对照组比较，*P ＜0.01；与治疗前比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01；与治疗无效组比较，■P＜0.01。

指标 对照组（n=30） 治疗组（n=40） 治疗有效组(n=26)治疗无效组(n=14)IL－4 IFN－γ HBV－DNA 36.5±11.5 294.5±52.7－治疗前68.2±20.5*159.2±32.5*1.37×108±2.45×107治疗后45.6±12.4△223.4±42.1△3.96 ×105±6.73 ×104▲30.4±6.9■279.5±37.2■3.76 ×102±2.34 ×102■73.8±12.5 119.2±24.3 9.84×107±5.32×107

3 讨论

HBV感染机体时，细胞免疫在肝细胞损害及病毒清除中起重要作用，而Th应答类型与机体的免疫状态密切相关，Th1/Th2比例是否平衡是机体能否有效清除病毒和病毒感染细胞的主要因素之一[6－7]。在HBV特异性抗原的刺激下，CD4+T细胞在不同细胞因子作用下分化为Th1和Th2两种类型，从而影响细胞因子网络之间的平衡。

阿德福韦酯是新一代抗HBV药，目前在我国刚进入临床应用阶段[3]。阿德福韦酯口服后经过体内非特异性酯酶水解，迅速转化为阿德福韦。阿德福韦是一种无环单磷酸脱氧腺苷类似物，被细胞内普遍存在的激酶磷酸化生成二磷酸阿德福韦。二磷酸阿德福韦和脱氧腺苷三磷酸(dATP)与多聚酶结合位点竞争性结合,从而抑制HBV－DNA多聚酶、人免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶、对拉米夫定耐药的HBV－DNA多聚酶活性，还可与腺苷酸竞争性掺入病毒DNA链，终止DNA链合成以抑制病毒复制[4,8]。近年来研究发现，阿德福韦酯可明显提高慢性乙型肝炎患者Th1类细胞因子IFN－γ的产生水平，降低Th2类细胞因子IL－4水平，改善Th1/Th2功能失衡状态，可明显纠正慢性乙型肝炎患者肝脏生化功能和减轻血清病毒学活动[9]。马萍等[10]研究发现，经阿德福韦治疗后的慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答有一定程度的恢复，与治疗前丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平呈正相关。本研究结果显示，阿德福韦酯可抑制HBV－DNA复制，调节Th1/Th2细胞因子比例平衡，使免疫反应由Th2型向Th1型逆转。其作用机制可能是阿德福韦酯可以促进Th1细胞发育，抑制Th2细胞发育，进而促进IFN－γ等Th1型细胞因子的分泌，抑制IL－4等Th2型细胞因子的分泌，提高细胞免疫反应，抑制体液免疫反应，增强CD8+T细胞的活性，从而清除细胞内病毒，降低血清HBV－DNA的含量。由本研究中治疗有效组与治疗无效组的疗效可见，治疗有效组Th1/Th2平衡比治疗无效组更倾向于Th1优势应答，说明阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎患者是通过调节Th1/Th2细胞的平衡，提高Th1细胞免疫反应，抑制Th2体液免疫反应，从而抑制HBV－DNA的复制。

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