高效液相色谱法测定香连片中盐酸小檗碱含量

黄玲 王明霞

香连片［1］是由《中国药典》(2005年版)一部收载的传统中成药香连丸经改变剂型而得。组方由中药黄连，木香组成。具有清热燥湿，行气止痛功效。用于湿热痢疾，里急后重，腹痛泄泻;菌痢，肠炎。中国药典2005版对香连片中盐酸小檗碱的含量测定采用薄层扫描法。为改进制剂质量控制标准，笔者建立了高效液相色谱法测定香连片中盐酸小檗碱含量方法。利用超声波提取法提取供试样品，优选提取时间，本方法操作简便易行，结果准确可靠，可用于香连片的质量控制。

1 仪器与试药Agilent 1200型高效液相色谱仪;CP225D型电子分析天平;KQ-400DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);盐酸小檗碱对照品(购于中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水;香连片(湖北某制药有限公司生产，批号:080318、080514、080822);其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验［2］固定相为十八烷基键合硅胶，色谱柱:ODS(250 mm ×4．6 mm，5μm);流动相:每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g的乙腈-0.1%磷酸溶液(49:51);，检测波长:265nm;柱温:室温;流速:1 ml/min;进样量:10 μl;理论塔板数按盐酸小檗碱峰计应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取在100℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.65 mg的溶液，即得。

2.3 样品供试液的制备［3］取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于盐酸小檗碱60 mg)，置具塞锥形瓶中，加盐酸-甲醇(1:100)100 ml，密塞，精密称定重量，超声处理20 min、30 min、40 min，放冷，精密称定，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取滤液5.0 ml置50 ml量瓶中．用甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得.比较三次不同时间的回收率，20 min＜30 min=40 min，样品供试液的制备以超声处理30 min为宜。

2.4 线性关系考察 取2.2项下对照品溶液，分别精密吸取 3、5、10、15、20 μl进样分析，测定峰面积，以峰面积值(A)为纵坐标、进样量(C)为横坐标绘制标准曲线，回归方程A=481.92C-12.43，r=0.9995。结果表明盐酸小檗碱进样量在1.95～13.0μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验 取同一批样品供试品溶液10 μl，连续进样5次，测定盐酸小檗碱的峰面积。结果RSD=1.92%(n=5)，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一份样品供试品溶液，于0，2，4，6，8，10，12 h时，测定盐酸小檗碱峰面积。计算RSD=1.87%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重现性试验 取香连片(批号:080514)，按供试品溶液的制备方法制备5份供试品溶液分别测定盐酸小檗碱含量。结果盐酸小檗碱平均含量为22.34 mg/片，RSD=2.13%(n=5)，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验考察 取已知含量的样品约0.25 g，加入盐酸小檗碱对照品溶液(c=065 mg/ml)9 ml，按供试品溶液制备操作，进样测定含量，计算回收率，平均回收率(%)=98.84，RSD(%)=1.47，测定结果见表1。结果表明:本方法回收率良好。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果(n=6)

2.9 样品含量测定 取 3批(分别为 080318、080514、080822批次)样品，分别按供试品溶液制备方法制备，进样10 μl，按上述色谱条件测定，按外标法计算样品中盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 不同批号中盐酸小檗碱含量测定结果(n=5)

3 讨论

近年来采用超声波作为一种新技术在提取中草药有效成分方面，应用已日趋广泛。超声波是指振动频率大于20KHZ，在自然环境中无法听到和感受到的一种弹性机械振动波。它具有空化效应，热效应，机械搅拌，强化扩散，乳化，凝聚，机械粉碎等作用。超声波提取法的原理是利用其空化效应和强化扩散所产生的弹性波，给媒质质点以很大的速度和加速度，将植物体快速穿透，使溶剂能和植物中的有效成分充分接触，有利于有效成分向提取溶剂转移，提高提取效率，该方法操作简单，副产品较少。

本试验采用超声波提取供试样品，比较了超声20、30、40 min不同时间盐酸小檗碱的提取率，结果30 min提取的得率与40 min的相同，因此确定提取时间为30 min。由于盐酸小檗碱属碱性较强的季胺型类生物碱，用普通流动相，色谱图会产生严重拖尾。本文采用离子对色谱条件，并能较好地解决色谱峰拖尾现象。

［1］国家药典委员会．中国药典2005年版一部．北京:化学工业出版社，2005:522．

［2］张芳．高效液相色谱法测定黄柏八味胶囊中盐酸小檗碱含量．中国药业，2008，17(17):28．

［3］吴建龙，简炎林．高效液相色谱法测定香连片中小檗碱的含量．广东药学，2004，14(4):14．