高效液相色谱法测定甲松涂剂中甲硝唑和维生素B2的含量

张玉玺 姚晓颖 刘春鹤 王丽红 杨姣 李士峰

甲松涂剂是我院制剂室自制的外用制剂，主要用于口腔溃疡等疾病。甲硝唑和维生素B2是甲松涂剂中两种主要成分。我们通过参阅有关甲硝唑和维生素B2在其他剂型中含量测定的文献［1-3］，建立了用高效液相色谱法测定甲硝唑和维生素B2含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1100，美国);电子天平(AG204，瑞士)。

1.2 试药 甲硝唑和维生素B2对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为重蒸水;样品为本院自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(38∶62);流速:0.8 ml/min;检测波长270 nm;进样 20 μl;柱温:25℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取甲硝唑对照品20 mg、维生素B2对照品12 mg置100 ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，配制成甲硝唑浓度为200 μg/ml、维生素B2浓度为120 μg/ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取甲松涂剂1 ml，置50 ml容量瓶中，精密加入流动相至刻度，振摇，过滤，得滤液备用，做为甲硝唑和维生素B2的供试品溶液。

2.4 阴性样品溶液的制备 按处方配比制备缺甲硝唑和维生素B2的阴性甲松涂剂，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备成阴性样品溶液。在此色谱条件下，阴性样品、对照品和供试品溶液的色谱图见图1。甲硝唑和维生素B2的理论塔板数不低于2500，保留时间分别为3.65 min和6.05 min，阴性样品无干扰。

图1 高效液相色谱图

2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。在“2.1”项下色谱条件下分别进样20 μl，以峰面积为纵坐标(Y)，对照品浓度为横坐标(X)进行线性回归。甲硝唑的回归方程为Y=0.0449X+0.4883(r=0.9999)，维生素B2的回归方程为Y=0.0112X-2.0573(r=0.9999)。实验表明甲硝唑和维生素B2分别在20～160 μg/ml和12～96 μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取“2.2”项下甲硝唑浓度为200 μg/ml、维生素 B2浓度为 120 μg/ml的对照品溶液 20 μl，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测得甲硝唑峰面积的RSD为0.79%(n=6)，维生素B2峰面积的RSD为1.12%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取“2.3”项下的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于制备后 0，2，4，6，8，24 h 测定峰面积，测得供试品溶液中甲硝唑峰面积的RSD=1.32%(n=6)，维生素B2峰面积的RSD=1.16%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一批号甲松涂剂样品6份，按“2.3”项下方法的制备后，在“2.1”项下色谱条件各进样3次测定，测得甲硝唑和维生素B2的RSD分别为1.02%和0.96%，结果表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验 精密量取同一批号已知浓度的供试品溶液1 ml置于10 ml棕色量瓶中，稀释至刻度。再从中精密量取1 ml置于10 ml棕色量瓶中，共6份。分别精密加入甲硝唑浓度为200 μg/ml，维生素 B2浓度为120 μg/ml的对照品溶液 1.0，1.0，1.0，2.0，2.0，2.0，3.0，3.0，3.0 ml，再加流动相稀释至刻度，摇匀，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=6)

2.10 样品含量测定 取3批甲松涂剂，按“2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件各进样20 μl，测定色谱峰面积，计算两种成分含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)(%)

3 讨论

3.1 从紫外光谱可见甲硝唑在277 nm波长处有最大吸收，而维生素B2在267 nm、375 nm、444 nm有最大吸收。经试验摸索在270 nm处甲硝唑和维生素B2均吸收良好，故选择此波长作为含量测定的检测波长。

3.2 经反复试验发现以甲醇-水(38∶62)作为流动相时，分离效果最好，保留时间也较合理，因此选用此流动相配比做为测定用流动相。

3.3 实验结果表明，采用本法测定甲松涂剂中的甲硝唑和维生素B2含量，方法简单、快速，结果准确、可靠，分离效果好。阴性对照表明，在该色谱条件下，其他辅料对两种主成分的测定无干扰，可用本法作为该制剂的质量控制标准。

［1］海彩虹，董锦燕，盛爱军．高效液相色谱法测定六维胶丸中维生素 B1、维生素 B2、烟酰胺含量．上海医药，2006，10(27):474．

［2］冯改利，蒙跃龙，李小安，等．HPLC法测定复方锌铁钙颗粒中维生素B2的含量．西北药学杂志，2006，21(5):198．

［3］梁改玲，赵梅花，仲平．高效液相色谱法测定维酶素片中维生素 B2的含量．临床医学，2005，10(25):85．