太白贝母祛痰实验研究

梁惠婵 肖百全 连雪科 黄远铿 雷夏凌 杨 威

广州医药工业研究院药物非临床评价研究中心国家广州新药安全评价研究重点实验室,广东 广州 510240

贝母为多年生草本植物,其鳞茎供药用,有止咳化痰、清热散结之功,主产于四川、云南、陕西秦巴山区,甘肃等地。贝母有川贝、浙贝、平贝、伊贝之分,其中川贝又分为暗紫贝母、梭砂贝母、太白贝母等。太白贝母为百合科植物太白贝母的鳞茎。具有清热润肺,化痰止咳的作用,其功能主治与川贝中的暗紫贝母、梭砂贝母相似,但是目前尚无有关太白贝母化痰作用的实验报道,临床上太白贝母用于化痰止咳的案例也较少,其应用尚未得到较好的推广。为此,笔者对太白贝母的祛痰功效进行了相关研究,并与暗紫贝母、梭砂贝母进行了比较。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 昆明种小鼠,SPF 级,雌雄各半,购入时体重 16-19g,从广东省医学实验动物中心购进,动物合格证号：0046273,粤监证字：SCXK(粤)2003-0002,粤监证字2008A022。动物饲养于广州医药工业研究院 SPF 级动物房内,广东省动物实验环境设施检测合格证号：粤监证字2008C076号,实验动物使用许可证号：SYXK(粤)2008-0003。动物饲养条件：自由进食饮水,饲养室温度与湿度：23±3℃,55±15%。

1.1.2 氯化胺,分析纯,500g/瓶,广东汕头新宁化工厂,XK 13-001-1513-197II。

1.1.3 碳酸氢钠：分析纯,500g/瓶,天津市福辰化学试剂厂,批号：20080902。

1.1.4 苯酚红：分析纯,上海化学试剂总厂所属上海试剂三厂,批号 900615。

1.1.5 羧甲基纤维素钠 (CMC-Na)：药用级,规格：500g/瓶,室温保存,国药集团化学试剂有限公司。

1.1.6 电子天平：TE 4100-L,赛多利斯科学仪器 (北京)有限公司,精度：1g。

1.1.7 电子天平：124S,北京赛多利斯科学仪器有限公司,精度：0.0001g。

1.1.8 紫外分光光度计：PU-1221,北京通用仪器设备公司。

1.2 方法[1～3]

挑选检疫观察合格的昆明种小鼠 132只,雌雄各半,按体重随机均衡分成 11组,即空白对照组、氯化胺组、太白贝母高、中、低剂量组,梭砂贝母高、中、低剂量组,暗紫贝母高、中、低剂量组,每组 12只,雌雄各半。设定太白贝母、梭砂贝母、暗紫贝母高、中、低剂量分别为1.0、0.5、 0.25g(生药)/kg。试验第一天起开始灌胃给药,每天一次,连续 5天 (第四次给药后小鼠饥饿过夜,约 16小时),空白组灌服等容积的 0.5%CMC-Na;阳性对照药氯化胺剂量为 1.0g/kg,灌胃给药,仅给药一次 (末次处理给药,前四天灌服等容积的 0.5%CMC-Na)。末次给药后 1.0h 先给小鼠腹腔注射 5%的酚红溶液 (10ml/kg),注射酚红溶液 30min 后用尾静脉空气栓塞法将小鼠处死,剪开颈部皮肤,小心分离气管 (操作过程中避免出血),放入 2.5ml 5%碳酸氢钠溶液中并震荡 30min,将气管弃去后用紫外分光光度计于波长 546nm 测 OD 值,用酚红做一标准曲线,根据曲线计算酚红含量 (μg/ml)并与对照组比较。酚红标准曲线绘制方法：分析天平准确称量一定量的酚红,加 5%碳酸氢钠溶液溶解,配制成酚红含量为100μg/ml 的溶液,然后顺次稀释成每毫升含酚红 0.1、0.3、0.5、 0.7、 1.0、3.0、 5.0、 10μg 的溶液。 用分光光度计测量 OD 值,以酚红剂量为横坐标,OD 值为纵坐标,各交点连成直线,根据所测出的OD 值计算各试验组动物酚红的排泌量。

1.3 数据统计：所有数据均输入 Excel 2003进行单因素方差分析或 (和)t 检验进行统计分析,各组计量数据均采用表示。

2 结果

实验结果表明 (表 1)：与空白组相比,太白贝母高、中剂量组、梭砂贝母高、中剂量组、暗紫贝母高、中、低剂量组均能显著增加小鼠气管酚红的排泌量 (p＜0.05或 0.01),阳性对照药氯化铵也能显著增加小鼠气管酚红的排泌量。

附表1 太白贝母系列样品对昆明种小鼠气管酚红排泌的影响 (n=12)

3 讨论

小鼠气管酚红排泌测定法是一个经典的常用于考察药物是否具有祛痰作用的试验方法之一,其原理是利用指示剂酚红自小鼠腹腔注射吸收后,部分酚红可从支气管分泌到痰液中,因而可以通过测定小鼠气管酚红排泌的量间接的反应药物的祛痰作用。凡是能够促使支气管分泌液增加的药物,都可以促使呼吸道粘膜排出的酚红量随之增多。为考察太白贝母与暗紫贝母、梭砂贝母在化痰功效方面是否具有差别,笔者选用小鼠气管酚红排泌试验对上述川贝母的化痰功效进行考察。试验结果表明：太白贝母、梭砂贝母、暗紫贝母均有促进小鼠气管酚红排泌的作用,其中暗紫贝母对小鼠气管酚红排泌的作用最强,太白贝母作用与梭砂贝母相近。

川贝的生长环境较为复杂,通常生长于海拔 3000米以上的高原地区。由于生长条件苛刻,故此川贝不能人工种植繁育,只能靠野生获得。刘先齐[5]等人研究表明,太白贝母可通过人工种植获得,人工种植的太白贝母粗皂苷含量、果实产量均比人工种植的暗紫贝母高,人工种植的暗紫贝母几乎无市场和药用价值;赵德永[6]等人研究结果表明,人工种植的太白贝母虽然总皂苷含量比野生暗紫贝母低,但是总生物碱的含量却高于暗紫贝母[6]。本研究结果表明太白贝母具有较好的祛痰作用,具有推广应用价值,由于太白贝母可以人工种植繁育,在实现标准化的同时,其产量远高于其他川贝母,具有很好的医药经济价值。

[1]刘元,李星雨等,白花前胡丙素和紫花前胡苷祛痰作用研究 [J].时珍国医国药,2009,20(5)：1049-1049.

[2]陈奇,中药药理研究方法学 [M].北京：人民卫生出版社,2006：624.

[3]曾晓春,陈淑慧等,粗叶榕的镇咳、祛痰、平喘作用 [J].中国中医药信息杂志,2009,9(2)：30-32.

[4]刘玉红 李兆方,太白贝母的快速繁殖试验 [J].中国中药杂志,1996,21(1)：15-17.

[5]刘先齐,暗紫贝母与太白贝母的引种比较试验 [J].中国中药杂志,1992,14(2)：81-82.

[6]赵德永,4种川贝母的总皂甙、总生物碱及西贝素的含量测定 [J],中国中药杂志,1994,19(2)：71-72.