分光光度法测定鹰嘴豆豆叶、豆茎、豆荚中总多糖含量

胡尔西丹 刘 海* 艾尔肯·依不拉音 阿吉艾克拜尔·爱萨 阿布力米提·伊力

1.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054;2.中科院新疆理化技术研究所植物资源化学重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830011

鹰嘴豆是维吾尔医常用的药材。维吾尔族用它治疗支气管炎、黏膜炎、霍乱、便秘痢疾、消化不良、肠胃气胀、毒蛇咬伤、糖尿病、性欲降低、皮肤瘙痒、高脂血症、中暑等疾病。在中医上，鹰嘴豆可以调节湿度，有止泻、解毒、壮身等作用，它的花可以治疗痢疾，浸泡水后服用可以治疗中药中毒和白带增多等。籽粒可做利尿剂、催奶剂，可治疗失眠、预防皮肤病等。

多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂。能提高机体免疫系统的功能，对正常细胞没有毒副作用，在抗肿瘤，抗病毒，抗衰老等药物研究中，多糖类药物的研制已成为当今世界新药的开展方向之一。多项研究已经充分表明多糖无毒副作用，来源广泛，生物活性高，必将为高效低毒药物开发开辟广阔的前景。

鹰嘴豆的食用及药用价值已经受到广泛的关注，鹰嘴豆中各种成分的分析已经做得很详细，但是豆茎、豆叶、豆荚中的成分分析没有见到报导。本次课题的研究目的是利用分光光度法的检测技术，检测鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚中总多糖的含量，为鹰嘴豆的全面开发利用提供科学依据。

1 仪器与试剂

分光光度计，蒽酮、浓硫酸、95%乙醇、无水乙醇、氯仿、正丁醇均为分析纯，鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚样品(2009年采于新疆木垒)。

2 实验方法与结果

2.1 多糖的提取与精制［1－2]

分别称取干燥至恒重过40目筛的鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末100g，加水适量，于95℃时超声提取30min，过滤，滤渣于95℃时再超声提取30min，共提取3次，合并提取液，于旋转蒸发仪上浓缩至100ml。在其中加95%乙醇至含醇量达80%，4℃时静置过夜。40000r/min下离心分离，离心后的沉淀物加少量热水溶解后，再加95%乙醇至含醇量达80%，静置过夜，离心分离。将得到的粗多糖溶于热水，用Sevag法 (氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白8次。加1%活性炭脱色，抽滤，加入乙醇使含醇量达80%，静置过夜，离心分离。沉淀物置于60℃的真空干燥箱中干燥，即得精制的淡黄色的鹰嘴豆豆茎，豆叶多糖。将精制后的多糖在260nm～280nm区间扫描，结果显示无吸收峰，说明蛋白基本除尽。

2.2 标准溶液的制备

精密称取葡萄糖对照品0.1000g，用蒸馏水溶解并定容至100m l，配成浓度为1mg/ml的标准储备液。

2.3 标准曲线的绘制

精密吸取葡萄糖标准溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5m l于10m l的容量瓶中，用蒸馏水定溶至刻度。分别取2.0m l至25ml具塞试管中，加蒽酮－浓硫酸 (0.2g∶100m l)试剂4m l，放入沸水中加热8min，迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。用吸光度对浓度回归，得回归方程：A=0.0294C－0.0325，r=0.9996。线性范围为 3.333～166.7μg/ml。

表1 标准溶液的浓度与吸光度

2.4 换算因子的测定

精密称取精制的多糖0.1000g，用少量热蒸馏水溶解后定溶于100m l容量瓶中，摇匀。精密吸取此溶液2ml至25m l具塞试管中，加蒽酮－浓硫酸试剂4m l，放入沸水中加热8min迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度，根据标准曲线计算浓度，再按下式计算换算因子：

f=W/CD

式中W为多糖质量 (mg)，C为多糖的浓度 (μg/m l)，D为稀释因素。

得豆茎：f=6.265豆叶：f=4.608豆荚：f=3.216。

2.5 样品溶液的测定

分别准确称取鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末0.5g(4份)，置于100m l容量瓶中，加水适量，在95℃时超声提取30min，过滤于另一100m l容量瓶中，滤渣用蒸馏水洗涤多次，用水定溶至刻度。精密吸取样品溶液2.5m l置25m l容量瓶中，加水稀释刻度。精密吸取此溶液2.0ml置于25ml具塞试管中，加入蒽酮－浓硫酸试剂4m，放入沸水中加热8min，迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。

含量 (%)=CDf/W×100%

式中W为多糖质量 (mg)，C为多糖的浓度 (μg/m l)，D为稀释因素，f为换算因子。

鹰嘴豆豆茎多糖的平均含量为11.4% (n=4)，RSD=1.3%。

鹰嘴豆豆叶多糖的平均含量为12.6% (n=4)，RSD=1.1%。

鹰嘴豆豆荚多糖的平均含量为8.7% (n=4)，RSD=0.98%。

2.6 精密度实验

分别精密吸取对照品溶液1.0ml，于25m l具塞试管中，加1.0ml蒸馏水，加入蒽酮－浓硫酸试剂4m，放入沸水中加热8min，迅速冷却室温。于620nm处测定吸光度。求的其RSD分别为：0.83%;0.97%;1.1%(n=5)

2.7 回收率实验

分别准确称取鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚粉末0.5g(8份，分为4组)，置于100ml容量瓶中，第一组为本底，后面三组分别加入0.1m l，0.2m l，0.3m l的对照品溶液，按2.5项下操作。于620nm处测定吸光度。

测得豆茎、豆叶、豆荚平均回收率为98.01%;99.21%、101.2%

3 结果与讨论

3.1 结论

(1)分光光度法测定鹰嘴豆豆茎、豆叶中总多糖含量。方法灵敏度高，其准确性、重现性、线性关系、稳定性均能达到科研和生产的要求，操作简便，可用于植物中总多糖的测定。

(2)鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚中所含多糖量比较高。结合鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚中所含丰富的微量元素［3]，可知，鹰嘴豆全身都是宝，鹰嘴豆豆茎、豆叶、豆荚也有着广阔的开发前景。

［1]刘晓河，梁惠花，因陈中多糖含量测定［J]．中草药，2003，34(6)：519－520．

［2]叶勇，植物多糖的分离纯化与制备 ［J]．中国食品添加剂．2001，(5)：29－31．

［3]刘海，胡尔西丹．鹰嘴豆地上部位元素分析及药用价值研究［J]．中国民族民间医药，2009，(9)：141－142．