羊蹄总皂苷的提取及抗炎作用研究

刘力丰,王 尚

(1.长春中医药大学附属医院,吉林长春130021;2.长春中医药大学,吉林长春130117)

羊蹄为蓼科植物羊蹄(Rumex japonicus Houtt.)的干燥根。据《全国中草药汇编》记载有清热解毒、止血、通便、杀虫之功,主治鼻出血,功能性子宫出血,血小板减少性紫癜,慢性肝炎,肛门周围炎,大便秘结;外用治外痔,急性乳腺炎,黄水疮,皮癣等。主要含有蒽醌类：大黄酚、大黄素、大黄素甲醚等;同时还含有鞣质等成分[1]。但对其所含皂苷类成分研究较少,故本课题以羊蹄为原料,对其皂苷类成分提取工艺进行系统研究,为最终深入了解羊蹄这一药用植物资源奠定基础。

1 仪器与试药

UV-1700型分光光度计(日本岛津);BP211D电子天平(德国赛多司);烘箱;水浴锅;真空泵;超净工作台(CJ-1)。羊蹄(采于吉林长白县);齐墩果酸对照品(含量测定用,中国药品生物制品鉴定所);Wistar雄性大鼠,购自长春高新医学动物实验研究中心,体重200～240 g。昆明种小鼠18～20 g,雌雄均用,购自吉林大学基础医学院动物实验中心。

2 方法与结果

2.1 羊蹄总皂苷的提取 称取羊蹄粉末200 g,置5 000 mL圆底烧瓶中,加乙醚2 000 mL浸泡2次,每次1 h,过滤,残渣挥尽乙醚后加70%乙醇2 000 mL,在80℃水浴中回流提取2次,合并2次提取液,减压回收乙醇,残渣加蒸馏水500 mL溶解,溶液上D101大孔树脂,分别用水、30%乙醇、70%乙醇洗脱,弃去蒸馏水与30%乙醇洗脱部分,收集70%乙醇洗脱部分,回收乙醇,残渣加蒸馏水300 mL溶解,溶液用水饱和正丁醇萃取3次,每次500 mL,弃去水层,合并正丁醇层,将正丁醇溶液60℃减压干燥即得羊蹄总皂苷干品。

2.2 羊蹄总皂苷含量的测定[2]

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品2.0 mg,置10 mL的容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,备用。

2.2.2 样品溶液的制备 称取羊蹄总皂苷60 mg,置100 mL容量瓶中,加70%乙醇溶解并定容至刻度,备用。

2.2.3 测定波长的选择 吸取对照品溶液0.5 mL于10 mL具塞试管中,沸水浴中挥干,依次加入新配制的10%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,高氯酸0.8 mL,摇匀,于70℃水浴中加热15 min取出,冰水浴中冷却后加入冰醋酸5 mL,混匀,以相应试剂为空白,在400～600 nm波长范围内测定其吸收波长。同法测定羊蹄总皂苷吸收波长。二者最大吸收均为554 nm,故选择测定波长为554 nm。

2.2.4 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mL,置10 mL具塞试管中,照 2.2.3项下自“沸水浴中挥干”起,于554 nm测定吸光度,以齐墩果酸溶液浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：A=59.324C-0.0023,r=0.999 5(n=5)。结果表明齐墩果酸在3.333～16.667 μ g/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.2.5 样品含量测定 取样品溶液,在554 nm处测定吸光度,将吸光度带入标准曲线,线性回归法计羊蹄总皂苷含量。实验结果表明,羊蹄总皂苷含量为64.3%。

2.3 羊蹄总皂苷的抗炎作用实验 取大鼠30只,随机分为3组：对照组,0.2 g/kg阳性药阿司匹林组,0.521 g/kg受试药给药组。连续给药5 d,于末次给药1 h后于大鼠右后足腱膜下注入0.05%角叉菜胶0.20 mL/只,然后于注射后1,2,3,4,5,6 h测其足肿胀(先于注射前测正常大鼠足周长),比较正常足值之差作为肿胀度。结果表1。

表1 对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响

从上表可知,与对照组相比受试物中剂量组对大鼠角叉菜胶性足肿胀有极显著性差异。

3 讨论

本文采用回流法提取羊蹄总皂苷,同时采用D101大孔树脂、水饱和正丁醇有机溶剂萃取等方法纯化所得总皂苷,最终含量达到64.3%,明显提高总皂苷有效部位的含量。该方法简便易行,是提取皂苷类成分的常用方法,同时对设备要求低,实验室操作简单。本实验首次定量测定了羊蹄总皂苷的对大鼠角叉菜胶性足肿胀消炎的活性,实验结果证实对大鼠角叉菜胶性足肿胀抗炎作用较为明显。此结果为该植物的开发、利用提供了科学依据和物质基础。

[1]郑永庆,陈万生.中药羊蹄化学成分的研究(Ⅰ)[J].第二军医大学学报,2000,21(10)：910-913.

[2]腾燕平,张玉梅,刘颖,等.分光光度法测大豆总皂苷含量[J].中国食品卫生杂志,2000,12(4)：10-13.