RPHPLC法测定咽炎片中哈巴俄苷和肉桂酸的含量*

冯 慧,林月英

(天津市大港区药品检验所,天津 300270)

咽炎片用于治疗慢性咽炎引起的咽干、咽痒、刺激性咳嗽,具有养阴润肺,清热解毒,清咽利喉,镇咳止痒的功效。现行标准为国家食品药品监督管理局标准(试行)YBZ24862005,其含量测定项下测定牡丹皮中芍药苷含量。本品处方君药为玄参,具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结的功效,用于热入营血、温毒发斑、热病伤阴、舌绛烦渴、津伤便秘、骨蒸劳嗽等症[1]。为更好地控制本品质量,采用高效液相色谱法,测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸含量,以加强对咽炎片的质量控制。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪 LC-2010AHT(工作站LC—Solution)。甲醇、乙腈、冰醋酸均为色谱纯,纯化水;对照品：哈巴俄苷(中国药品生物制品检定所,批号

0756-200110 ),肉桂酸(中国药品生物制品检定所,批号 0796-200006);样品：咽炎片 (批号 20080022、20080026、20080028)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱 DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈为流动相 A,以 1%冰醋酸为流动相 B,按表1进行梯度洗脱[2];检测波长为 278nm;流速为 1ml/min;柱温 40℃。理论板数按哈巴俄苷峰计算不低于 5000。

表1 梯度洗脱表

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取对照品哈巴俄苷10.30 mg,肉桂酸 10.25mg,加甲醇制成每 1ml含哈巴俄苷20.6μg与肉桂酸 20.5μg的混合溶液。

2.2.2 供试品溶液 取“装量差异”项下本品内容物,研细,取 2g,精密称定,置 50ml量瓶中,加入甲醇适量,超声处理 30min,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.2.3 阴性样品溶液 按处方比例,制备不含玄参的阴性样品,按“2.2.2”项下的方法制备阴性样品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液 10 μl,注入液相色谱仪,见图 1,结果表明阴性无干扰。

2.3 线性关系考查 取哈巴俄苷与肉桂酸对照品适量,精密称定,加 30%甲醇使溶解,制成每 1ml中分别含哈巴俄苷 4.12、8.24、16.48、32.96、65.92 μg及肉桂酸 1.23、2.46、4.92、9.84、19.68 μg的混合对照品溶液,分别精密吸取 10μl,注入高效液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件分析,以对照品进样的量(μg)和峰面积值进行回归分析,得哈巴俄苷回归方程：Y=2.544×103X+9.675×103,r=0.9999;肉桂酸回归方程为 Y=8.863×103X+1.368×104,r=0.9999。结果表明,哈巴俄苷在 41.2 ～ 659.2μg、肉桂酸在12.3～196.8μg范围内线性良好。

2.4 精密度试验 精密量取含哈巴俄苷 16.48μg及肉桂酸 4.92μg的混合对照品溶液 10μl,注入高效液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件分析,连续重复进样6次,结果哈巴俄苷的峰面积值的 RSD为 0.19%,肉桂酸的峰面积值的 RSD为 0.38%,结果符合要求。

2.5 重复性试验 取同一批号(20080022)样品,共 6份,按照“2.2.2”项下方法制备,按“2.1”项下色谱条件分析,测定每份样品中哈巴俄苷和肉桂酸的含量。结果样品中哈巴俄苷的平均含量为 0.228mg/g,RSD为 1.4%;肉桂酸的平均含量为 0.0643mg/g,RSD为0.8%,结果符合要求。

2.6 稳定性试验 取同一批号(20080022)样品,取 1份,剪碎,取 1g,按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作,按“2.1”项下色谱条件分析 ,分别在 0、5、10、15、20、25、30、35和 40h进样,测定样品中哈巴俄苷和肉桂酸峰面积,测得哈巴俄苷峰面积值的 RSD为 1.0%,肉桂酸峰面积值的 RSD为 0.9%,结果表明供试品溶液在 40h内测定稳定。

2.7 回收率试验 取同一批号(20080022)样品,取 1 g,共 6份,精密称定,置 50ml量瓶中,分别加入哈巴俄苷对照品溶液(0.206mg/ml)1ml,肉桂酸对照品溶液(0.0205mg/ml)3ml,加入甲醇适量,再按照“2.2.2”项下操作,制得供回收率用供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件分析,计算回收率,结果哈巴俄苷平均回收率为 103.03%,RSD为 1.97%;肉桂酸平均回收率为98.99%,RSD为 1.77%。试验结果符合要求。

图 1 对照品(A)样品(B)阴性样品(C)HPLC色谱图

2.8 样品测定 取 (批号为 20080022、20080026、20080028)样品,按照“2.2.2”项下供试品溶液制备方法操作,按“2.1”项下色谱条件分析,测定各批样品中哈巴俄苷与肉桂酸含量,结果见表1。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 提取时间的选择 用 30%甲醇作为溶剂处理样品,考查超声提取 20、30、40min,结果表明,超声处理30min样品中的哈巴俄苷和肉桂酸含量与 40min结果相当,故超声处理时间定为 30min。

3.2 流动相的选择 本文采用梯度洗脱的方法同时测定哈巴俄苷和肉桂酸两种成分的含量,在 20min内上述两种成分即可达到基线分离。

3.3 检测波长的确定 哈巴俄苷最大吸收波长为 278 nm,肉桂酸最大吸收波长为 285nm,试验发现,在 278 nm波长处,供试品色谱中,肉桂酸色谱峰与杂质峰达到基线分离,分离度大于 1.5,因此采用 278nm同时测定上述两种成分的含量。

3.4 本实验同时测定玄参中哈巴俄苷和肉桂酸两种成分含量,为咽炎片的质量控制提供了新的方法。

1 中国药典.一部.2005：76

2 蔡少青,谢丽华,王建华,等.中药玄参中哈巴俄苷和肉桂酸的高效液相色谱法的测定.药物分析杂志,2000,20(3)：191