凋亡抑制基因Survivin在胰腺癌中的表达及临床意义

叶群立 杨 振

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一个新成员，是迄今发现最强的凋亡抑制因子[1]。近年研究表明，Survivin与肿瘤的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨胰腺癌组织中Survivin蛋白的表达及其与淋巴结转移的关系，为临床治疗及提高患者的生存率提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料

采用郑州大学第一附属医院病理科2004至2006年胰腺癌根治术后存档蜡块25例，均经病理学诊断为导管腺癌，术前均未接受放射治疗和化学治疗。其中男15例，女10例，年龄38～85岁，平均52岁。按1997年UICC制订的TNM分期标准分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期8例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例。有淋巴结转移者17例，无转移者8例。病理分化程度：高中分化16例，低分化9例；另取10例癌旁非肿瘤胰腺组织标本作对照。

1.2 Survivin的检测

采用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法染色，SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）检测Survivin的表达，严格按照说明书操作。已知阳性胰腺癌切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果判定：以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，400倍镜下计数500个细胞，≥10%为阳性，＜10%为阴性。

1.3 统计学分析

采用SPSS10.0统计软件包进行统计分析。计数资料的比较采用c2检验，相关分析采用Spearman等级分析。

2 结 果

2.1 Survivin蛋白阳性表达

Survivin在正常胰腺组织中不表达，肿瘤组织中Survivin蛋白阳性染色颗粒主要定位于肿瘤细胞胞质内，细胞膜亦可有少量着色，周围间质亦见少量阳性染色。胰腺癌组Survivin蛋白阳性表达率72.0%（18/25）显著高于正常胰腺组0%（0/10），差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 Survivin蛋白阳性表达与胰腺癌临床病理特征的关系

淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率（82.4%，14/17）显著高于无淋巴转移组（50.0%，4/8），P＜0.05；根据临床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期组（63.6%，7/11）与Ⅲ+Ⅳ组（78.6%，11/14）期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.05）；随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高（rs=0.514，P＜0.05），见表1。另外，Survivin蛋白阳性表达与患者年龄、性别及分化程度无关（P＞0.05）。

表1 Survivin与胰腺癌临床病理特征的关系

3 讨 论

随着人们对细胞凋亡认识的逐步加深，新的观点认为肿瘤的发生发展亦是细胞凋亡的结果，细胞凋亡的抑制与恶性肿瘤的发生发展有密切关系[2]。Survivin基因是一个新近发现的凋亡抑制基因[1]，具有强大的凋亡抑制功能，其异常表达与多种人类肿瘤的发生发展及预后密切相关[3]，成为人们研究的一个热点。

Ambrosini等[1]利用效应细胞蛋白酶受体1（EPR1）cDNA在人类基因组文库中杂交筛选并克隆产生了1个IAP基因家族新成员，即Survivin基因。组织分布上Survivin只表达于胚胎和发育的胎儿组织，除胸腺、生殖腺外不见于其他终末分化的正常成人组织。相反在大多数肿瘤组织中均可检测到Survivin的表达[4,5]。Survivin的主要生物学功能就是抗凋亡，它是目前已知作用最强的凋亡抑制蛋白。细胞凋亡主要有两条途径：死亡受体途径和线粒体途径，两条途径最终都通过激活下游效应因子caspase-3及caspase-7使细胞凋亡。Survivin可以直接粘附于活化的caspase-3及caspase-7，使其不能发挥作用，从而阻断细胞凋亡过程[6]。

本研究显示，Survivin在正常胰腺组织中不表达，Survivin在胰腺癌组织中的阳性表达率显著高于正常胰腺组织，提示Survivin基因的表达发生在胰腺癌恶性转化的早期，表明Survivin基因与胰腺癌的发生有关。Survivin基因在胰腺癌组织中的表达可能抑制了异常突变细胞的凋亡，从而扰乱了细胞生长和凋亡途径，促使细胞逃离生长监控，导致肿瘤的发生。对Survivin蛋白的检测可作为早期胰腺癌的辅助诊断。Satoh等[7]研究了胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织标本，发现Survivin仅在胰腺癌组织中有高表达，并与凋亡指数呈负相关。Suga等[4]对大肠组织从增生到癌变不同时期标本的Survivin表达情况进行了研究，所得到的结论基本相似。从而认为Survivin基因的表达是癌变早期事件。

本研究证实，Ⅰ+Ⅱ期组与Ⅲ+Ⅳ组期之间Survivin蛋白阳性表达率差异有统计学意义；淋巴结转移组Survivin蛋白阳性表达率显著高于无淋巴转移组；随临床分期增加及淋巴结的转移，Survivin蛋白阳性表达率逐渐升高。提示Survivin基因不但参与原位肿瘤形成过程的调节，促进其发展，可能还参与癌细胞转移过程的调节，在转移过程中发挥作用。由于Survivin对凋亡的抑制，癌细胞得以继续分裂，造成肿瘤的临近和远隔部位转移灶的形成。也有研究表明，Survivin mRNA的表达与胃癌侵犯的深度和腹膜转移有关，认为Survivin在胃癌的局部侵犯过程中有一定的作用。Sarela等[8]认为，在恶性肿瘤中，脱落的癌细胞因为Survivin 对凋亡的抑制而受到了保护，得以继续存活并分裂增殖，进而形成肿瘤邻近或远离部位的转移，从而引起预后不良。

Survivin的异常表达与胰腺癌的发生、发展密切相关，其在胰腺癌中的高表达与淋巴结转移及临床病理分期密切相关，可能是影响胰腺癌预后的重要分子指标。

[1]Ambrosini G,Adida DC,Altier DC. A novel anti-apoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med,1997,3(8):917-921.

[2]Granville DJ,Carthy CM,Hunt DWC,et al. Apoptosis: molecular aspects of cell death and disease[J]. Lab Invest,1998,78(8):893-898.

[3]Salz W,Eisenberg D,Plescia J,et al. A survivin gene signature predicts aggressive tumor behavior[J]. Cancer Res,2005,65(9):3531-3534.

[4]Suga K,Yamamoto T,Yamada Y,et al. Correlation between transcriptional expression of survivin isoforms and clinicopathological findings in human colorectal carcinomas[J]. Oncol Rep,2005,13(5):891-897.

[5]Li JX,Zhou KY,Liang T,et al. Knockdown of survivin Expression by Small Interfering RNA Induces Apoptosis in Human Breast Carcinoma Cell Line MCF-7[J]. Ai Zheng,2005,24(3):268-272.

[6]Tamm I,Macadam Y,Sausville E,et al. IAP-family protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95),Bax,caspases,and anticancer drugs[J]. Cancer Res,1998,58(23):5315-5320.

[7]Satoh K,Kaneko K,Hirota M,et al. Expression of survivin is correlated with cancer cell apoptosis and is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors[J]. Cancer,2001,92(2):251-258.

[8]Sarela AI,Macadam RC,Farmery SM,et al. Expression of the antiapoptosis gene,survivin,predicts death from recurrent colorectal carcinoma[J]. Gut,2000,6(5):645-650.