咪达唑仑对异氟烷小鼠的镇痛、催眠作用的影响

王 雷，孙 飞，李 艳，刘 备，庞 静，赵冰雪，谈艳雯，惠洪亮，廖艺聪，王红军，孟 晶

(1.徐州医学院麻醉学院，2.江苏省麻醉学重点实验室，江苏 徐州 221004)

异氟烷(Isoflurane，Iso)是临床常用吸入麻醉药。有研究发现［1］，GHB受体、神经元烟碱受体与吸入麻醉药的催眠作用有关，而 NMDA、GlyR及 AMPA与其镇痛作用有关，但是GABA受体与吸入麻醉药的镇痛作用的关系还不明确［2］。咪达唑仑(Midazolam，Mid)是一种含咪唑环的苯二氮类药物，可增强麻醉药的镇痛作用。本实验通过观察咪达唑仑对异氟烷的镇痛、催眠作用的影响，为临床合理使用两药奠定理论基础，并初步探讨苯二氮受体与异氟烷作用机制的关系。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器 吸入用异氟烷(批号:61K05A)，英国罗地亚精细化工有限公司;咪达唑仑注射液(批号:20100108)，江苏恩华药业股份有限公司;HH-42数显恒温搅拌循环水箱，常州国华电器有限公司。

1.2 实验动物及方法 昆明种小鼠18～25 g，由徐州医学院实验动物中心提供。热板法用♀，扭体法、翻正反射法♀♂兼用。每种方法均按分层随机区组设计分为生理盐水组(NS组)、Mid组(M组)、Iso组(I组)、咪达唑仑 +异氟烷组(MI组)4组，每组10只，使各组动物平均体重、年龄相似。Mid腹腔注射剂量为 2.7 mg·kg－1，Mid和 NS注射容积为0.1 ml·(10 g)－1。Iso 腹腔注射镇痛剂量为 2.5 μl·(10 g)－1［3］，催眠剂量为 6 μl·(10 g)－1［3］。

1.3 咪达唑仑对异氟烷镇痛作用的影响

1.3.1 热板法 小鼠置于(55±0.5)℃的恒温水浴箱热板上，记录从小鼠放入到舔后足的时间作为痛阈(pain threshold in the hot-plate test，HPPT)，选取 5 s＜HPPT ＜30 s的小鼠。观察时间超过60 s者HPPT记为60 s。用药前测痛阈2次，间隔5 min，取其平均值为基础痛阈。实验开始时，I组先ip Iso，5 min后 ip生理盐水;MI组先 ip Iso，5 min后给 ip Mid，均为腹腔注射。记录4组小鼠的基础痛阈和用药后5、15、30、45 min 的 HPPT。

1.3.2 扭体法 腹腔注射1%冰醋酸造模。注冰醋酸前5 min，各组给予相应的药物，给药顺序同热板法。观察并记录致痛后15 min内各组小鼠的扭体次数(writhing times，WT)。

1.4 咪达唑仑对异氟烷催眠作用的影响 给药顺序同热板法。记录小鼠翻正反射消失的持续时间，即睡眠时间(sleeping time，ST)。

2 结果

2.1 咪达唑仑对异氟烷镇痛作用的影响 在热板实验中，NS组、I组和M组HPPT较基础痛阈均无差异，MI组 HPPT给药后延长(P＜0.05或 P＜0.01);与 NS组相比，仅 MI组HPPT延长(P＜0.01)。在扭体法实验中可见MI组小鼠15 min扭体次数只有2～3次(P＜0.01)。见 Tab1。

2.2 咪达唑仑对异氟烷催眠作用的影响 NS组和M组小鼠均无入睡，I组有3只小鼠入睡，MI组入睡率为1.0(P＜0.01)。

3 讨论

Wakai等［4］的研究显示异氟烷在临床浓度时能够增强脊髓背角浅层神经细胞GABA能神经递质受体系统功能，抑制单突触的兴奋性神经传递，而咪达唑仑可以通过GABA受体亚单位的苯二氮类结合位点发挥抗伤害作用［5］，苯二氮类受体与GABA受体及氯通道等结合成GABA-苯二氮类受体－氯通道复合物调节GABA的突触前抑制作用，也使进入脊髓和脑干等二级神经元的神经递质释放减少［6］，从而使中枢接受的兴奋性递质进一步减少，增强了异氟烷的中枢抑制效果。本实验结果表明咪达唑仑能够增强异氟烷的镇痛催眠作用。同时，咪达唑仑可减少病人的躁动，故提示咪达唑仑与异氟烷合用于临床麻醉是有利的。

Tab 1Effect of midazolam on the analgesia of isoflurane(writhing test，hot-plate test)(±s，n=10)

Tab 1Effect of midazolam on the analgesia of isoflurane(writhing test，hot-plate test)(±s，n=10)

*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs basal HPPT;##P＜0.01 vs NS

Group WT/n Basal HPPT/s HPPT(after injection of drugs)/s 5 min 15 min 30 min 45 min NS 45.3 ± 16.7 13.1 ±6.0 12.7 ±5.4 11.7 ± 3.7 11.5±4.8 12.9 ± 4.3 Mid 35.4 ± 15.6 12.9 ±4.1 9.8 ±2.7 11.5 ± 3.6 12.1 ±2.7 13.2 ± 4.8 Iso 30.9 ± 17.5 11.0 ±3.3 12.4 ±11.7 19.4 ± 12.8 11.8 ±5.8 12.5 ± 5.4 Mid+Iso 2.6 ±2.8## 13.6 ±2.9 29.2 ±16.1*## 44.8 ±20.8＊＊## 33.2 ±17.0＊＊## 22.0 ±8.8*##

［1］ 周美艳，戴体俊.吸入麻醉药镇痛、催眠作用受体机制研究进展［J］.徐州医学院学报，2010，30(5):346 －8.

［1］ Zhou M Y，Dai T J.Research progress on receptor mechanisms of analgesia and hypnosis of inhalation anesthetics［J］.Acta Acad Med Xuzhou，2010，30(5):346 －8.

［2］ 闫 肃，戴体俊，程 伟.全身麻醉药镇痛作用受体机制的研究进展［J］.中国药理学通报，2008，24(10):1272 －5.

［2］ Yan S，Dai T J，Cheng W.Research progress on receptor mechanisms of analgesia of general anesthetics［J］.Chin Pharmacol Bull，2008，24(10):1272 － 5.

［3］ 宋苏沛，胡柳青，刘传飞，等.异丙嗪对异氟烷小鼠镇痛、催眠、遗忘作用和治疗指数的影响［J］.中国药理学通报，2010，26(1):66－9.

［3］ Song S P，Hu L Q，Liu C F，et al.The effects of promethazine on the analgesia，hypnosis，amnesia and therapeutic index of isoflurane treated mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26(1):66 － 9.

［4］ Wakai A，Kohno T，Yamakura T，et al.Action of isoflurane on the substantia gelatinosa neurons of the adult rat spinal cord［J］.Anesthesiology，2005，102:379 －86.

［5］ Yaksh T L，Allen J W.The use of intrathecal midazolam in humans:a case study of process［J］.Anesth Analg，2004，98:1536 －45.

［6］ 邵 兵，赖朝蓬，黄素清，刘琴湘.咪唑安定用于硬膜外术后镇痛的临床观察［J］.中国疼痛医学杂志，2001，7(1):47.

［6］ Shao B，Lai C P，Huang S Q，Liu Q X.Effect of midazolam for epidural postoperative analgesia［J］.Chin J Pain Med，2001，7(1):47.