高效液相色谱法测定感冒安片中蒙花苷的含量

杨 敏，廖志钟

(广东罗浮山国药股份有限公司，广东惠州 516133)

感冒安片为广东罗浮山国药股份有限公司生产的品种，该品处方中由野菊花、倒扣草、水杨梅、地胆草、佛手、千里光、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因等组成，具有解热镇痛之功效，用于感冒引起的头痛发热，鼻塞，咳嗽，咽喉痛。方中野菊花具有疏风清热，消肿解毒，治风热感冒头痛的作用，为主要药物，经研究，可采用高效液相色谱法测定野菊花中的蒙花苷成分，方法操作简单、专属性强，线性关系良好，可作为该品的含量测定方法，以更好地控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津公司LC系列高效液相色谱仪（SPD-M20A二极管阵列检测器、SIL-10AD自动进样器、LC Solution色谱工作站）。

1.2 试药

蒙花苷对照品（批号：111528-200504，中国药品生物制品检定所，供含量测定用，以95.5%计）；感冒安片（广东罗浮山药业有限公司）；甲醇（色谱纯），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil-C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.8）为流动相；检测波长：334 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取蒙花苷对照品适量（以95.5%计），加甲醇溶解制成每毫升含15 μg的溶液，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取粉末2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 ml，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

按感冒安片处方及制法，取除野菊花外的其余药材，按制备工艺要求，制成缺野菊花的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成野菊花阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验

分别精密吸取上述对照品、供试品及阴性对照溶液各10 μl，注入液相色谱仪，照上述色谱方法进行测定，HPLC色谱图见图1。

2.6 线性关系考察

精密称取蒙花苷对照品适量，加甲醇溶解制成每毫升含0.05706 mg 的溶液，分别精密吸取 1、2、4、6、8、10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，并以进样浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得蒙花苷回归方程：Y=1922145.0144X-8573.2384（r=1.0000）。 蒙花苷在0.05706～0.57060 μg浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取蒙花苷对照品溶液10 μl，重复进样5次，测定色谱峰面积，RSD=0.20%，结果表明本法精密度良好。

2.8 重现性试验

精密称取同一批样品6份，按“2.3”项下方法制备样品溶液，精密吸取样品溶液、对照品溶液各10 μl进样，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积积分值RSD=1.61%。结果表明本法重复性良好。

2.9 稳定性试验

图1 HPLC色谱图（A.对照品；B.供试品；C.阴性样品）Fig.1 HPLC chromatography(A.Reference substance;B.Sample;C.Negative sample)

分别精密吸取同一供试品溶液，于 0、1、3、6、10、14 h 后分别进样10 μl，记录峰面积，RSD=1.52%。结果表明样品在14 h内基本稳定。

2.10 回收率试验

取已知含量的感冒安片样品（含量：0.4241 mg/g），精密称取6份，每份1 g，分别精密加入约等量的蒙花苷对照品，按供试品溶液制备方法制备并进行测定。试验结果表明，平均回收率为99.65%，RSD=1.2%，结果见表1，表明本法准确性良好。

表1 回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 样品含量测定

取5批样品，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积按外标法计算含量，结果见表2。

3 讨论

感冒安片质量标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第14册，为中西药组方制剂，原标准中没有建立方中的中药成分含量测定方法，为控制产品质量，提高质量控制水平，有必要研究制订处方中的中药含量测定方法。处方中野菊花具有疏风清热，消肿解毒，治风热感冒头痛的作用，为方中主要药物，有效成分蒙花苷明确，故选择野菊花中的蒙花苷成分为含量测定指标成分也是科学合理的。

表2 样品含量测定结果（%，n=5）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=5)

曾经试用乙腈-磷酸二氢钠-磷酸（30∶70∶0.06）作为流动相，结果分离度不好，参考《中国药典》2005年版一部野菊花“密蒙花”项下流动相，试用甲醇-水-磷酸系统，选用流动相甲醇-水-磷酸（48∶52∶0.8），峰纯度检测为重叠峰。 重新调整流动相比例为甲醇-水-磷酸（52∶48∶0.8），在该色谱条件下，样品峰纯度检查为单峰，阴性对照对测定无干扰，且蒙花苷与其相邻峰的分离度＞1.5，理论板数大于2000，分离效果较好。

经试验柱温在25～40℃范围内变动，对含量测定结果无明显影响，但随着柱温的升高，分离度逐渐降低，在25℃分离度较好，30℃和40℃时分离度＜1.5，拖尾因子良好。

综上所述，本法简便、灵敏、准确、方法耐用性好，可用于感冒安片的质量控制。

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