麝香保心丸中3种有效成分的体外溶出度测定

何红伟， 沈 鸣， 韩丽妹， 王建新

(复旦大学药学院药剂学教研室，上海201203)

麝香保心丸为《中国药典》2005年版一部收载的品种，由麝香、人参提取物、冰片、肉桂等七味中药组成，具有芳香温通、益气强心的功效，是临床常用的治疗心血管疾病的中成药，多用于心肌缺血引起的心绞痛、胸闷及心肌梗死等症。麝香保心丸目前的质量控制方法主要包括薄层色谱鉴别和个别有效成分的含量测定。但作为常用的急救类中成药，有效成分的溶出快慢是其能否迅速发挥药效的关键。本文分别选择了人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1，C54H92O23)、肉桂酸(Cinnamic acid，C9H8O2)和冰片(Borneol，C10H18O)这3种有效成分作为指标，进行了溶出度的研究。它们分别是人参提取物、肉桂与苏合香以及冰片的主要有效成分。由于这3种成分的溶解性等理化性质不同，具有较好的代表性，其溶出性能基本上能反映出麝香保心丸中各种化学成分的溶出情况。

1 材料和仪器

1.1 试剂与药品 麝香保心丸(上海和黄药业有限公司，批号:081106、090610、090706);人参皂苷Rb1、肉桂酸、冰片、水杨酸甲酯对照品(含量测定用，中国药品生物制品检定所，人参皂苷Rb1批号:110704-200318;肉桂酸批号:110786-200503;冰片批号:110743-200504;水杨酸甲酯批号:110707-200710);甲醇、乙腈(色谱纯，Tedia公司);高纯氮(纯度:99.999%，上海氯闵气体有限公司);其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 Agilent 1200 HPLC系统(含四元泵，在线脱气机，自动进样器和紫外检测器，美国Agilent公司);7890F气相色谱仪(氢火焰离子检测器，上海天美科学仪器有限公司);水纯化系统(Simplicity，Millipore公司);ZRS-8型智能溶出仪(天津大学无线电厂);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂);BS224S型电子天平(d=0.0001 g)(Sartorius)。

2 方法

2.1 指标成分的含量测定方法

2.1.1 色谱条件 分别采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1和肉桂酸，采用气相色谱法测定冰片。参考有关文献［1，2］，确定 3种成分的测定条件分别为:

人参皂苷 Rb1:色谱柱:Venusil XBP-C18柱(5 μm，4.6 mm ×150 mm)，保护柱:Security guard C18(5 μm，4.0 mm ×2.0 mm);流动相:乙腈-水 =29 ∶71;流速:1 mL/min;柱温:35℃;检测波长:203 nm;进样量:10 μL。

肉桂酸:色谱柱:Venusil XBP-C18柱(5 μm，4.6 mm × 150 mm)，保护柱:Security guard C18(5 μm，4.0 mm×2.0 mm);流动相:甲醇-1%醋酸溶液 =45∶55;流速:1 mL/min;柱温:35℃;检测波长:273 nm;进样量:10 μL。

冰片:色谱柱:TM-1701(30 m ×0.53 mm ×1.0 μm);氮气流量:2.96 mL/min;氢气流量:5.76 mL/min;空气流量:150 mL/min;进样口:240℃;检测器:250℃;升温程序:100℃保持3 min，以每分钟5℃的速度升温至130℃，保持2 min;进样量:1 μL。

2.1.2 方法学考察

2.1.2.1 检测限与定量限 以信噪比S/N为3和10，分别计算方法的检测限与定量限。

2.1.2.2 标准曲线绘制 人参皂苷Rb1:精密移取含人参皂苷 Rb122.7 μg/mL 的对照品溶液 0.5、1、2.5、5 mL于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混匀后进样测定。以人参皂苷Rb1的峰面积A对浓度C进行线性回归，即得标准曲线方程。

肉桂酸:精密移取含肉桂酸10 μg/mL的对照品溶液 0.01、0.02、0.05、0.2、0.4 mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，混匀后进样测定。以肉桂酸的峰面积A对浓度C进行线性回归，即得标准曲线方程。

冰片:精密移取含冰片2.05 mg/mL的对照品溶液 0.1、0.2、0.5、1、2.5 mL 于 5 mL 量瓶中，各加入含水杨酸甲酯2.508 mg/mL的内标溶液0.1 mL，加乙酸乙酯至刻度，混匀后进样测定。以冰片与内标水杨酸甲酯的峰面积之比Ai/As对冰片浓度C进行线性回归，即得标准曲线方程。

2.1.2.3 日内精密度和日间精密度 分别于1日内不同时间及3日内取高中低三个浓度的对照品溶液重复进样，计算样品溶液浓度及相对标准偏差RSD，即得日内精密度及日间精密度。

2.1.2.4 回收率 采用加样回收法测定各成分的回收率。在已知含量的样品中定量加入对照品，在相应的色谱条件下测定含量，计算各指标成分的回收率。

2.1.2.5 重复性 取溶出样品溶液，按2.1.3项下方法平行处理6份，进样测定，计算相对标准偏差RSD。

2.1.2.6 稳定性 取2.1.3项下待测样品溶液于室温下放置不同时间后进行测定，计算其中各指标成分的浓度并计算相对标准偏差RSD。

2.1.3 溶出样品预处理及测定 人参皂苷Rb1:取

2.2项下的续滤液2 mL，加入适量 0.1 mol/L的NaOH溶液，调节其pH至6.8以增加指标成分的稳定性。然后加入2 mL乙醚涡旋2 min，离心(6000 r/min)5 min，弃去乙醚液，取下层水溶液，按 2.1.1项色谱条件进样测定。

肉桂酸:取2.2项下的续滤液按2.1.1项色谱条件直接进样测定。

冰片［3-4］:取 2.2 项下的续滤液 0.7 mL，加入0.3 mL含水杨酸甲酯0.05 mg/mL的乙酸乙酯溶液，涡旋混匀，离心(8000 r/min)5 min，取上清液，按2.1.1色谱条件进行GC测定。

2.2 3种有效成分的体外溶出度测定

按《中国药典》2005年版附录XC溶出度测定法第三法小杯法，溶出条件为:以100 mL人工胃液为溶出介质，转速为75 r/min，温度为(37±0.5)℃。于设定时间分别取样5 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，并补以同体积等温溶出介质。续滤液分别按照2.1.3项下操作进行预处理后进样测定，以每批样品中实际含量［1，5-6］为100%，计算3种有效成分在不同时间的溶出百分率。

3 结果

3.1 指标成分的含量测定方法评价结果

3.1.1 检测限与定量限 在上述条件下，人参皂苷Rb1，肉桂酸，冰片三种指标成分的检测限(S/N=3)和定量限(S/N=10)依次分别为 0.21、0.70 μg/mL;2.0、6.7 ng/mL 和 0.015、0.051 mg/mL。

3.1.2 标准曲线 所得各指标成分含量测定的标准曲线见表1，可看到各指标在相应的线性范围内线性关系良好，满足测定要求。

表1 3种指标成分的含量测定标准曲线(n=3)

3.1.3 精密度 精密度试验中，人参皂苷Rb1高中低浓度的日内精密度RSD分别为0.31%、2.90%、5.53%(n=5)，日间精密度 RSD分别为0.61%、2.59%、5.96%(n=9);肉桂酸高中低浓度的日内精密度 RSD 分别为 0.24%、1.02%、4.38%(n=5)，日间精密度 RSD 分别为0.87%、2.93%、7.50%(n=9);冰片高中低浓度的日内精密度RSD分别为2.41%、3.54%、2.95%(n=5)，日间精密度 RSD 分别为 3.79%、4.82%、3.23%(n=9)。结果表明精密度满足测定要求。

3.1.4 回收率 回收率试验中，人参皂苷Rb1高中低浓度的加样回收率分别为(97.28±2.59)%、(100.43 ±3.20)%、(102.06 ±1.67)%(n=3);肉桂酸高中低浓度的加样回收率分别为(100.72±1.10)%、(102.64 ±4.33)%、(104.07 ±1.76)%(n=3);冰片高中低浓度的加样回收率分别为(109.25 ±7.07)%、(93.96 ± 6.67)%、(102.54 ±4.93)%(n=3)。结果表明回收率满足测定要求。3.1.5 重复性 重复性试验中，6份人参皂苷Rb1、肉桂酸和冰片的溶出样品经处理后分别连续进样，所测峰面积的RSD分别为1.73%、1.31%、3.98%，结果表明测定方法的重现性良好。

3.1.6 稳定性 稳定性试验中，人参皂苷Rb1、肉桂酸和冰片的溶出样品经处理后放置0、2、4、6、8、12 h后所测峰面积的RSD分别为3.38%、3.53%、4.77%，结果表明在12 h内供试品基本稳定。

3.2 3种有效成分的体外溶出度测定结果

按上述测定方法，以人参皂苷Rb1、肉桂酸和冰片为指标成分，对3批市售麝香保心丸进行体外溶出度测定，结果见表2～4。

表2 3批麝香保心丸中人参皂苷Rb1的体外累积溶出百分率测定结果(n=6)

表3 3批麝香保心丸中肉桂酸的体外累积溶出百分率测定结果(n=6)

表4 批麝香保心丸中冰片的体外累积溶出百分率测定结果(n=6)

将该3种有效成分的累积溶出百分率绘制成溶出度曲线图，见图1。

图1 麝香保心丸中3种有效成分的累积溶出度曲线

对表2～表4中的数据按Weibull分布模型进行处理，得到麝香保心丸中3种有效成分的溶出度参数，结果见表5。

表5 3种有效成分的溶出度参数

4 讨论

由于制剂中麝香酮与脂蟾毒配基含量较少，溶出样品溶液中其浓度均低于定量限，因此本试验中不将其作为指标成分，而选用人参皂苷Rb1、肉桂酸以及冰片分别作为水中易溶、微溶以及难溶性指标成分来考察制剂的溶出度，具有一定代表性，能相对全面地反映该复方中药中各成分的溶出情况。

麝香保心丸是临床上常用的急救中成药，要求在胃中能够迅速崩解溶散，因此，本文选择人工胃液作为溶出介质。由各有效成分的溶出曲线图可以看到，人参皂苷Rb1、肉桂酸以及冰片的溶出均较快，该结果说明麝香保心丸经口服给药后，在胃内即迅速发生崩解，各成分可快速溶出。既表明了麝香保心丸用于快速起效的生物药剂学基础，也表明了选用人工胃液作为溶出介质的合理性。

文献［7］报道，人参皂苷 Rb1在 pH1.2的盐酸溶液即人工胃液中可发生水解。我们进行了稳定性试验，发现将人参提取物置于37℃人工胃液中，人参皂苷Rb1的含量在45 min内基本稳定，这可能与人参提取物中其他组分对其产生的保护作用有关。因此，本文中，人参皂苷Rb1的溶出取样点仅取到45 min，此时其溶出已基本完全。进一步延长取样时间，会由于人参皂苷Rb1在其酸内的不稳定性而导致含量下降，影响溶出度测定结果的准确性。在冰片的溶出度测定中，由于冰片具有较强的挥发性，在试验中我们采用自制泡沫板扣于溶出盖的缝隙以减少其挥发，但仍不能完全密闭，在反复的取样过程中会导致冰片的部分挥发，从而导致其累积溶出百分率相对较低。

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