Ezrin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

河南省焦作市人民医院病理科 (焦作 454000)陆晓彭 春

恶性肿瘤转移是肿瘤患者死亡的主要原因之一,其间涉及多种机制,研究表明某些蛋白质在肿瘤的转移过程中起着重要的作用,其中 Ezrin是近年来发现的与肿瘤发生、发展及转移有密切关系的蛋白之一。非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病率有逐年上升的趋势。我们应用免疫组化方法检测非小细胞肺癌手术标本的石蜡包埋组织中 Ezrin蛋白的表达情况,旨在进一步探讨 Ezrin蛋白与非小细胞肺癌发生发展的关系。

材料与方法

1 标本来源 本研究所用资料均系焦作市人民医院 2000～2007年间手术切除或纤支镜活检标本的原发性非小细胞肺癌标本,共计 45例。其中男 30例,女 15例。年龄 34～ 78岁,平均 56.6岁。所有病例均按世界卫生组织 1981年肺癌分型标准分类,鳞癌 22例,腺癌 10例,鳞腺癌 7例,大细胞癌 6例。 按 1997年国际肺癌分期标准,Ⅰ期肺癌 16例,Ⅱ期肺癌 10例,Ⅲ期肺癌 10例,Ⅳ期肺癌 9例。高分化癌 16例,中分化癌 17例,低分化癌 12例。淋巴结 28例,无淋巴结转移17例。

2 免疫组织化学法 将 10%福尔马林固定、石蜡包埋的癌组织制成 4～ 5 μ m切片,常规脱蜡,浸入 0.01mol/L、pH为 6.0的枸橼酸盐缓冲液内,微波炉抗原修复 10min,温度为 92～ 98℃。用 SP法进行免疫组织化学染色。Ezrin及 SP试剂盒系北京中山生物试剂公司提供的 Zymed公司产品。 Ezrin以肿瘤细胞浆出现典型棕黄色颗粒为阳性,阳性细胞数目在 10%～25%为(+),25%～ 50%为(⧺),超过 50%为(⧻)。每次实验均设阳性和阴性对照。用已知乳腺癌阳性切片作阳性对照,阴性对照用 PBS代替一抗。

3 统计学处理 统计分析采用 SPSS12.0软件进行i2检验,以 P＜0.05为有显著性差异,P＜0.01为有极显著性差异。

结 果

表1 肺癌组织类型与 Ezrin蛋白表达的关系

表2 Ezrin蛋白阳性表达与肺癌临床病理相关性

1 Ezrin蛋白在正常肺组织及非小细胞肺癌组织中的表达结果 见表 1。Ezrin蛋白在非小细胞肺癌总的阳性率为 66.67%(30/45),Ezrin蛋白在正常肺组织阳性表达率为 100%(20/20),两组有显著性差异(P＜0.05)。Ezrin蛋白在非小细胞肺癌主要表达于胞浆,在正常肺组织主要表达于胞膜。

2 Ezrin蛋白阳性表达与肺癌临床病理相关性

见表 2。 Ezrin蛋白阳性表达与肺癌组织学类型、肿瘤细胞分化程度及肿瘤分期无关(P＞0.05),而与肺癌有无淋巴结转移有关。在有淋巴结转移组,Ezrin蛋白阳性表达高于无淋巴结转移组。

讨 论

20世纪 80年代初,Bretscher等[1]首次发现了Ezrin蛋白。 Ezrin是一个分子量为 82 kD的磷酸化蛋白质,由 585个氨基酸组成,编码基因为 villin2,定位于染色体 6q25.2～ q26。 Ezrin是 ERM蛋白家族(Ezrin,Radixin和 Moesin)中细胞内骨架蛋白,调节细胞活动如生存、黏附、迁移、侵袭,这些活动在肿瘤发展和进程中都具有非常重要的作用[2～4]。

本组结果显示,Ezrin蛋白阳性表达在肺癌细胞表达下调,其阳性率与肺癌组织学类型、肿瘤细胞分化程度及肿瘤分期无关,而与肺癌有无淋巴结转移有关。在有淋巴结转移组,Ezrin蛋白阳性表达高于无淋巴结转移组。以往研究表明:Ezrin蛋白可以通过与 CD43、ICAM-1、ICAM-2、磷脂酰丝氨酸 4和 5-二磷酸盐结合等方式,增加肿瘤细胞的迁移和转移能力[5]。此外,Ezrin在肿瘤细胞中的过度表达可以破坏正常细胞内信号传递网络的平衡,其中主要涉及的为细胞信号转导相关分子(Rho)及受体酪氨酸蛋白激酶等信号传导途径[6]。 Hiscox等[7]用免疫共沉淀发现,Ezrin和 E-cadherin是结合在一起的;Pujuguent等[8]则发现Ezrin可通过 Rho蛋白调节 E-cadherin在胞膜上的表达,这些研究表明 Ezrin可直接或间接和 E-cadherin发生作用,改变肿瘤细胞极性及细胞运动、调节肿瘤细胞间的黏附,参与肿瘤细胞内信号转导而发挥作用,并且发现 EzrinThr567磷酸化对其影响恶性肿瘤浸润转移非常重要。

此外,在本研究中也发现:Ezrin蛋白阳性表达在肺癌肿瘤细胞定位也存在着不同,其在非小细胞肺癌主要表达于胞浆,在正常肺组织主要表达于胞膜。在结肠癌的研究中也发现了 Ezrin蛋白定位的改变,在正常结肠黏膜组织中蛋白主要定位于细胞膜上,而在肿瘤组织中主要定位于细胞浆[9]。Ezrin亚细胞定位改变的机制目前尚不完全清楚,可能与其磷酸化有关,其亚细胞定位的改变对于肿瘤的发生、发展及转移均具有重要作用。

因此,Ezrin作为一种膜-细胞骨架连接蛋白,不仅可影响细胞形态和运动,而且与多条信号传导途径有关,在多种肿瘤中 Ezrin过度表达和表达异位可能参与肿瘤的发生、发展和转移,但是 Ezrin蛋白在肿瘤发展及转移中的具体作用机制目前尚未完全明确。有关其表达调节的研究也不多,相信随着今后有关研究的深入,可为进一步阐明其在肿瘤发生、发展及转移中的作用。

综上所述:Ezrin蛋白在非小细胞肺癌表达下降且表达部位发生移位,可能与非小细胞肺癌发生发展及远处转移有关。

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[7]Hiscox S,Jiang W G.Ezrin regulates cell-cell and cell matrixadhesion,a possible role withEcadherin/bcatenin[J].J Cell Sci,1999,112(18):3081-3090.

[8]Pujuguent P,Del-Maestro L,Gautreau A,et al.Ezrin regulates E-Cadherin-dependentadherens junction assembly through Rac1 activation[J].Mol Biol Cell,2003,14(5):2181-2191.

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